25±0.08 pmol/mg；与IR组比较,MC组明显降低移植心AI[3h:(8.65±2.01)％vs.(19.28±4.94)％,P<0.01；24h:(5.82±2.36)％vs.(10.54±3.66)％,P<0.05].激活Akt蛋白(3h:P<0.01；24h:P0.05)。 结论诱导受体产生CO能明显抑制冷缺血再灌注诱导的移植心的细胞凋亡,其机理可能与通过P13K/Akt信号途径对凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax的调节有关。 第四部分 诱导受体产生一氧化碳减轻同种移植心排斥反应不依赖于Foxp3表达的上调 目的CO由于具有强大的干扰体内氧运输的特性而通常被认为是一种有害的废弃物。事实上,低浓度的CO通过调节血管张力、抗炎、抗凋亡等作用缓解移植物缺血再灌注损伤。本研究在小鼠心脏移植的基础上,观察诱导受体小鼠产生CO对同种移植排斥反应和移植心存活时间的影响,并探讨其可能的机制。 方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型(C57BL/6→Balb/c小鼠)。受体小鼠自移植前1d至移植后第6d(MC1w组,n=11)或至第13d(MC2w组,n=10)以含二氯甲烷(MC)100mg/kg体重灌胃,或以同体积不含MC的橄榄油灌胃(Tx组,n=6)。观测移植心存活时间,并于移植后6d、10d分别检测受体血清TNF-α、IL-10的含量、心脏移植物和受体脾脏TNF-α、IL-10、Foxp3 mRNA及Foxp3蛋白的表达、心脏移植物ICAM-1(细胞间粘附分子-1)及Caspase-3蛋白的表达；观察移植后6d、10d或移植物心跳停止时移植心胶原纤维增生程度及组织病理学变化。
结果受体以MC灌胃后血液中COHb浓度在3h达到峰值,为(5.24±0.45)%；受体诱导CO可以明显延长移植心存活时间[Tx:(6.33±0.56)d; MC1w: (12.14±0.87)d, P<0.01vs.Tx)及Caspase-3的表达(MC1w组：P0.05)。 结论受体小鼠诱导CO明显减轻同种移植排斥反应并延长移植心的存活时间,其主要机制与可能与CO的抗炎症和抗凋亡功能密切相关,而并不依赖于移植物和受体脾脏内Foxp3表达的上调。
活化淋巴细胞来源DNA 购买Cyclopamine (ALD-DNA)诱导系统性红斑狼疮(SLE)的新机制：巨噬细胞极化及其作用 还有 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一个潜在的致死性疾病,以出现各种典型的自身免疫症状包括自身免疫反应、血管炎、关节炎和肾小球肾炎等为特征。在美国SLE病人总数已经超过二十五万,90%发生于育龄期妇女,严重影响人类健康。随着治疗手段的进步,狼疮性肾炎病人5年的生存率从二十世纪五十年代的44%提高到现在的82%,但是SLE病人的平均寿命只有44岁。SLE以其复杂多变的症状引起临床工作者的广泛关注,而SLE几乎累及免疫系统的各个成份,更是引起了免疫学工作者极大的兴趣,针对SLE的发病机制和SLE防治方法的研究一直是科学家关注的重大前沿课题。
作为SLE病人血清学特征的抗双链DNA (double-stranded DNA, dsDNA)抗体,已经被证明是致病性的,可以引起免疫复合物沉积和组织损伤,与SLE疾病的严重程度密切相关。SLE病人遗传学的研究发现抗dsDNA自身抗体大多属于对dsDNA具有高亲和力的IgG亚类,不同于体细胞突变产生的抗体。研究显示自身DNA可以诱导抗dsDNA抗体产生。一般情况下,哺乳动物的DNA免疫原性较弱,不会引起免疫应答。寻找引起自身免疫反应和抗dsDNA抗体产生的驱动成份是免疫学家关注的热点。我们实验室在寻找SLE驱动原的过程中发现用活化淋巴细胞来源的DNA (activated lymphocyte-derived DNA, ALD-DNA)免疫同系的雌性BALB/c小鼠,可以产生一系列的SLE症状,包括高水平的抗dsDNA自身抗体、蛋白尿、免疫复合物沉积和肾小球肾炎,这些症状模拟病人体内由大量凋亡细胞来源的自身DNA引起的SLE症状,因此ALD-DNA免疫的小鼠可以被作为理想的小鼠狼疮模型进行探讨SLE疾病可能的细胞与分子免疫学机制。 selleck kinase抑制剂 SLE通常被认为是由自身抗体介导的全身性炎症反应和由T／B细胞介导的适应性免疫应答所诱发的组织损伤,但是SLE发病和疾病进展的细胞与分子机制仍不清楚。有研究提示,在SLE小鼠中,显著激活的巨噬细胞和其它髓系细胞大量浸润到淋巴组织和肾脏中,启动和促进适应性免疫应答,从而导致SLE的发生。越来越多的证据显示F4／80+巨噬细胞是SLE肾炎中主要的浸润细胞,在SLE肾炎的发生过程中扮演重要角色,而浸润的巨噬细胞发挥保护性还是病理性作用有待阐明。功能上的可塑性和多样性是单核巨噬细胞的显著特点之一,巨噬细胞随着周围环境的变化,功能上会发生显著变化,这些功能上的变化,也称为功能上的巨噬细胞极化,可以产生有不同基因表达谱和不同功能的巨噬细胞亚群。目前认为M1和M2(包括M2a、M2b和M2c)是单核巨噬细胞功能上连续变化过程的两个极端。在SLE疾病过程中巨噬细胞是否发生极化、极化类型及其机制鲜有报道。 本研究的目的在于：(1)探讨巨噬细胞在ALD-DNA诱导SLE发病中的作用；(2)通过表型分析和细胞因子表达谱鉴定,分析SLE模型鼠肾炎组织中巨噬细胞的活化和极化类型以及可能的分子机制；(3)研究导致自身DNA清除障碍和打破免疫耐受引起巨噬细胞产生免疫应答的机制；(4)设计体内外实验探索SLE疾病可能的防治方法。我们的研究分为以下四部分：
1.巨噬细胞在ALD-DNA诱导SLE发病中的作用 体内未被清除的凋亡细胞来源的自身DNA具有免疫原性,可以引发一系列的免疫应答,从而导致抗自身DNA的抗体产生和抗体介导的组织损伤,这在SLE病人体内非常普遍,但是巨噬细胞是否在SLE发病过程中发挥作用仍不清楚。在本课题中,我们在ALD-DNA免疫的SLE小鼠模型中,发现狼疮肾炎组织中有大量的活化巨噬细胞浸润。ALD-DNA可以在体内和体外诱导巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10,并上调表达表面活化标志包括MHC class-Ⅱ、CD40、CD80和CD86,但是非活化淋巴细胞来源的DNA (unactivated lymphocyte-derived DNA, UnALD-DNA)并不能引起巨噬细胞的活化。我们进一步发现活化的巨噬细胞在体外可以促进T分泌IL-4和IL-10,促进B细胞产生抗dsDNA的自身抗体,从而参与ALD-DNA诱导的自身免疫反应。更重要的是去除SLE模型小鼠体内的巨噬细胞可以有效减轻尿蛋白水平、缓解狼疮性肾炎的症状。这些研究结果提示巨噬细胞在SLE发病过程中扮演重要角色,ALD-DNA通过诱导巨噬细胞活化进而启动针对自身抗原的固有免疫和适应性免疫应答,从而造成免疫复合物沉积和组织损伤。以上发现为SLE的发病机制提供了新视野,为临床SLE疾病的治疗提供了以控制巨噬细胞浸润和活化作为靶点的可能的新治疗策略。 2.