05)（Table2, Fig.4,5,6）。 2.3三组大鼠血清生化指标 对照组：TG0.81±0.27mmol/L, TC2.18±0.39mmol/L, LDL-C1.24±0.47mmol/L, HDL1.55±0.33mmol/L, ICAM-175.63±19.52pg/ml, VCAM-1616.54±54.51ng/ml, NF-κB78.68±12.15μmol/L 糖尿病组：TG1.83±0.40mmol/L, TC4.15±0.41mmol/L, LDL-C2.53±0.44mmol/L, HDL0.68±0.23mmol/L, ICAM-1130.59±16.00pg/ml,

VCAM-1990.19±119.18ng/ml, NF-κB170.22±21.53μmol/L 二甲双胍组：TG1.33±0.30mmol/L, TC3.21±0.46mmol/L, LDL-C2.24±0.31mmol/L, HDL-C0.98±0.34mmol/L, ICAM-1102.86±15.76pg/ml, VCAM-1860.66±112.72ng/ml,NF-κB110.86±26.89μmol/L 结果显示，糖尿病组和二甲双胍组大鼠TG, TC, LDL-C, ICAM-1,VCAM-1, NF-κB水平均明显高于对照组（P 0.05）；与对照组相比，糖尿病组和二甲双胍组HDL-C水平显著降低（P 0.05)（Table2-3,Fig.7-10）。 3胸主动脉病理改变 胸主动脉HE染色结果：血管组织切片HE染色后光镜下检查，对照组血管壁结构清晰，内膜光滑完整，平滑肌细胞排列整齐，内皮细胞结构完整，中层及外膜结构清楚，未见病理性改变；糖尿病组可见血管壁弥漫性隆起，突向管腔面，内膜明显增厚，内膜下平滑肌细胞排列紊乱、增生，内有脂质沉积，形成大小不等、形态不规则的泡沫细胞，胶原纤维和弹性纤维增多；应用二甲双胍治疗后，胸主动脉血管壁无明显隆起，平滑肌细胞排列较整齐（Fig.11-13）。 Alectinib分子重量 4免疫组化结果：和对照组相比，糖尿病组和二甲双胍组大鼠胸主动脉中p-p38MAPK, NF-κB, MCP-1蛋白表达水平明显升高（P
目的： 糖尿病心肌细胞凋亡是糖尿病心肌病最重要的病理变化之一，促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)链是真核生物信号传递网络中的重要途径之一，是一类广泛存在于真核细胞中的丝/苏氨酸蛋白激酶。它是缺血、缺氧、激素作用、生长因子及细胞因子等各种细胞外刺激诱导基因表达、细胞增殖等核反应的共同通路或汇聚点，在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥关键作用。本实验利用原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，研究高糖对心肌细胞凋亡的影响及分子通路机制和MAPK通路阻断剂的抗心肌细胞凋亡作用，旨在探索糖尿病性心肌病药物防治的新靶点。

Screening Library mw 方法： 1心肌细胞的培养：无菌条件下取新生1-3天的Sprague-Dawley（SD）大鼠乳鼠，取心尖，剪碎成约1mm3大小，应用0.1%的胰酶、0.04%的胶原酶Ⅱ的混合酶消化液分离心肌细胞，10%胎牛血清中和终止消化，应用差速贴壁法获取心肌细胞，置于37℃、5%CO2的培养箱培养，培养基中加入Brdu抑制成纤维细胞生长，每48小时更换培养基。倒置相差显微镜观察心肌细胞形态，0.4%台盼蓝染色检查心肌细胞成活率，免疫细胞化学染色鉴定心肌细胞纯度。

2分组：将培养的乳鼠心肌细胞随机分为7组：对照组，葡萄糖浓度为5.5mmol/L；高糖组，葡萄糖浓度为25mmol/L；高渗对照组:对照组+19.5mmol/L的D-甘露醇；DMSO组：高糖组+1μl/ml的DMSO预处理30分钟； 获悉更多 SB203580组：高糖组+P38抑制剂SB203580预处理细胞30分钟； PD98059组:高糖组+ERK抑制剂PD98059预处理细胞30分钟；SP600125组:高糖组+JNK抑制剂SP600125预处理细胞30分钟; 3检测指标：干预72h后，应用流式细胞术分析各组细胞凋亡率，Western blot检测凋亡指标caspase-3蛋白的表达变化及p-JNK，p-P38蛋白表达的变化。 4数据分析：所得数据采用均数±标准差（x±s）表示，统计分析运用SPSS13.0软件。采用单因素方差分析及q检验进行组间的两两比较。以P<0.05作为差异有统计学意义。以P<0.01）；PD98059组及DMSO组较高糖组细胞凋亡无明显变化（P＞0.05），SP600125组及SB203580组较高糖组细胞凋亡均减少（p
纳米颗粒接触体液后，会与蛋白质或其他生物分子发生相互作用，使其表面性质发生明显的变化，从而影响纳米颗粒的稳定性及其与生物体的相互作用。纳米颗粒与免疫球蛋白、补体蛋白、纤维蛋白原等调理素作用后，会启动吞噬作用，然后被清除出血液；纳米颗粒与血清白蛋白、载脂蛋白或其他蛋白质载体作用后，会延长纳米颗粒在血液中的循环。蛋白质吸附到纳米颗粒表面会导致蛋白质结构的改变，可能使新的表位暴露，从而传递生物信号；也可能阻碍生物信号的传递，产生副作用。因此，深入研究纳米颗粒与蛋白质的相互作用，才能使纳米材料得到安全而广泛的应用。 四氧化三铁纳米颗粒(Fe3O4NPs)具有超顺磁特性和优良的生物相容性，在靶向药物、磁共振成像、细胞分离和磁热疗等生物医学领域具有良好的应用前景。研究氧化铁纳米颗粒与蛋白质的相互作用会促进氧化铁纳米颗粒在生物医学领域的应用，同时减少副作用的产生。 本文研究了氧化铁纳米颗粒（10nm和40nm）与血红蛋白（红细胞的主要成分，含铁蛋白）、细胞色素C（电子传递链的重要蛋白，含铁蛋白）、牛血清白蛋白（血液中含量最高的蛋白）及转铁蛋白（负责铁转运的蛋白）的相互作用。首先通过透射电子显微镜、动态光散射和琼脂糖凝胶电泳研究了纳米颗粒蛋白质复合物的形成。然后通过等温滴定量热测量了反应的热力学参数。通过荧光光谱和同步辐射圆二色光谱研究了纳米颗粒对蛋白质结构的影响。最后我们初步研究了氧化铁纳米颗粒对蛋白质功能的影响。实验结果显示，氧化铁纳米颗粒可以与血红蛋白、细胞色素C、牛血清白蛋白、去铁转铁蛋白发生相互作用。我们通过琼脂糖凝胶电泳明显地观察到了血红蛋白、牛血清白蛋白分别与纳米颗粒的复合物。10nm氧化铁纳米颗粒与蛋白质的作用更明显。血红蛋白和牛血清白蛋白与10nm氧化铁纳米颗粒结合的摩尔比分别是2.5:1和1.

05)。 结论:ET-1通过ETAR上调前列腺癌PC-3细胞COX-2的表达,ETBR未参与次调控过程;p42/44

MAPK, p38 MAPK和EGFR等信号通路参与了此调控过程。提示ET-1拮抗剂联合应用COX-2拮抗剂等信号通路拮抗剂,可为AIPC的治疗开辟新途经。
【引言】 帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的中老年神经系统变性疾病,其主要病理变化是含色素的神经元变性缺失,尤以以黑质致密部多巴胺(Dopamine,DA)能神经元选择性变性缺失为主。虽然PD的病因仍不明确,但已发现一些与其发病相关的危险因素,如遗传,年龄及环境等。1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶( 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6- tetrahy-dropyridine,MPTP)是一种人工合成的神经毒性物质,能使动物和人出现PD症状。MPTP通过其活性代谢产物MPP(+1-methyl-phenyl selleck screening library pyridinium cation)使黑质纹状体DA能神经元受损伤。 二苯乙烯苷(2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)是中药何首乌的有效成分之一。具有抗氧化,清除自由自,抑制单胺氧化酶活性以及改善记忆功能的作用。近年来,TSG的神经保护作用逐渐受到人们的关注。研究证实TSG可改善老年痴呆小鼠的学习记忆能力,具有神经保护作用,但是TSG对MPP~+诱导的DA能神经元损伤是否具有保护作用,目前尚未见报道。 本研究选择具有DA能神经元特性的PC12细胞建立体外模型,旨在观察TSG对MPP~+诱导的DA能神经元损伤是否有保护作用,并对其作用机制做初步探讨。 【目的】 1.建立帕金森病模型,筛选出MPP~+对PC12细胞损伤的有效浓度和TSG对MPP~+损伤PC12细胞的有效保护浓度; 2.观察TSG对MPP~+诱导的PC12细胞的影响; 3.研究TSG抑制MPP~+诱导PC12细胞损伤的可能机制。 【方法】 1.设立空白对照组,200,300,500,700,800,1000,1200,1500 mol/L MPP~+浓度组作用于PC12细胞24h;TSG保护作用:筛选实验处理浓度设立正常对照组、MPP~+损伤组(500 mol/L)、不同浓度的TSG预处理组(1,5,10,50,100

mol/L),用噻唑蓝(MTT)比色法检测,最终筛选出最佳TSG预处理组浓度(1,5,10 mol/L); 2.设立正常对照组、MPP~+组、不同浓度TSG预处理组(1,5,10 mol/L),用MTT比色试验检测细胞活性;Hoechst 33258染色观察细胞及细胞核形态变化;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡比率;TUNEL染色观察细胞DNA断裂情况; 3.通过蛋白免疫印迹观察细胞中caspase-3、p38MAPK的表达。 【结果】 1. MTT比色法检测显示,与对照组相比,500 mol/L的MPP~+处理24h后细胞活力为48.3±3.6%(P<0.05),74.3±2.7%(P<0.05),86.8±2.0%(P<0.05)和13.4±1.1%(P<0.01),而TSG组TUNEL阳性细胞数则显著降低,分别降为25.3±1.2%(P<0.01),17.3±0.9%(P<0.01)和11.7±0.9%(P
研究背景 布比卡因(Bupivacaine,Bup)是一种酰胺类局部麻醉药,因其良好的麻醉和镇痛效果而在临床上被广泛应用于神经阻滞、椎管内麻醉和硬膜外镇痛。然而,随着应用Bup临床经验的不断积累,在充分肯定其麻醉与镇痛效果的同时,也发现其对神经元有潜在的损伤作用。Bup神经毒性的机制虽然尚未完全阐明,但现有研究认为Bup具有毒性,可引起神经细胞内源性抗凋亡分子表达下调或活性下降,从而导致神经元坏死和凋亡,最终使患者出现运动和感觉异常。已有研究证实,地塞米松(Dexamethasone,

已经 Dex)可显著抑制氧化应激诱导的巨噬细胞凋亡、抑制肿瘤坏死因子相关凋亡配体诱导的甲状腺癌细胞凋亡以及降低细胞毒化疗药物的细胞毒性等。但Dex是否对Bup诱导的神经元坏死或凋亡也有保护作用,目前还不清楚。 研究目的 采用体外培养的小鼠神经细胞株N2a为模型,以文献报道的Bup损伤浓度和Dex保护浓度来探讨Dex对Bup神经毒性的影响,并初步探讨其机制,以期为Bup潜在神经毒性的临床防治提供新的思路和基础数据。 研究方法 所有实验均在小鼠神经母细胞瘤细胞株N2a细胞的体外培养模型上进行。 1.阐明Bup对N2a的损伤作用。评价指标为:细胞形态学、细胞膜完整性(以LDH渗漏率衡量)、细胞核固缩凝集; 2.研究Bup损伤N2a的可能机制。检测指标为:线粒体内膜跨膜电位(ΔΨm)、ERKs和Akt磷酸化激活水平; 确认细节 3.明确Dex对Bup所致N2a损伤是否有保护作用。评价指标为:细胞形态学、细胞膜完整性(以LDH渗漏率衡量)、细胞核固缩凝集; 4.阐明选择性阻断Akt磷酸化对地塞米松保护布比卡因神经毒性的影响。评价指标有:细胞形态学、细胞膜完整性(以LDH渗漏率衡量)、细胞核固缩凝集、线粒体膜电位变化。 实验结果 1. Bup导致N2a形态学损伤明显、LDH渗漏率和细胞核固缩率显著增加; 2. Bup作用后,N2a细胞线粒体内膜跨膜电位显著下降、ERKs和Akt被显著脱磷酸化; 3. Dex预处理可显著减轻Bup所致的N2a损伤,并完全逆转Bup所致的ERKs和Akt脱磷酸化作用 4.选择性阻断Akt磷酸化激活,可去除Dex对Bup神经元毒性的保护作用。 结论 地塞米松对布比卡因所致神经元毒性有保护作用,该作用依赖于地塞米松对Akt磷酸化激活水平的维持。
青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中核心结合因子ɑ1和骨形态发生蛋白-2的表达及意义 第一部分青少年成骨细胞的体外分离、培养、扩增及表型鉴定 目的建立青少年成骨细胞(osteoblast,OB)体外分离、培养、扩增及表型鉴定的方法,为后续分子生物学检测做准备。 方法试验对象为2008年03月至2009年04在我院行后路手术的女性AIS患者26例。根据测量的骨密度值,将AIS患者分为两组:A组15例,为骨量正常患者,年龄12~18岁,平均14.6岁;B组11例,为骨量减低患者,年龄12~18岁,平均14.

These findings suggested that, although 时间 excessive accumulation of oxidative DNA damage was present in LSCs, the relatively decreased phosphorylation of p38 might help leukemic cells escape senescence and apoptosis.
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种病因尚未完全阐明的慢性非特异性炎性肠病,近几年研究发现Toll样受体4(TLR4)在UC的发生发展过程中起到了极其重要的作用。TLR4信号转导主要通过MyD88依赖性信号转导路径和MyD88非依赖性信号转导路径活化NF-κB及炎症因子转录,从而导致NF-κB激活,引起炎性因子释放,最终介导炎症反应。大量的研究显示UC动物实验模型和UC患者结肠黏膜中TLR4的高表达,干预TLR4通路传导的相关药物的实验疗效也得到了证实。TLR4信号转导通路为今后治疗UC提供了新的思路。
目的:探讨雌激素受体ER-β与细胞信号传导通路丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)上游激活酶MEK-2和下游激活酶p-ERK在子宫内膜异位症(EMs)发病机制中的作用。方法:采用免疫组化S-P法检测46例EMs患者在位及异位内膜、40例正常内膜组织中ER-β、MEK-2和p-ERK的蛋白表达。结果:ER-β、MEK-2和p-ERK在异位内膜和在位内膜中表达高于正常内膜,差异有显著性意义(P<0.01),异位内膜表达高于在位内膜,差异具有显著意义(P<0.01)。结论:ER-β、MEK-2和p-ERK在EMs组织中高表达并呈正相关,MAPK信号通路可能与ER-β相互作用,在EMs的发生发展中起着重要作用。
【目的】探讨髓样细胞诱发受体1(TREM-1)在铜绿假单胞菌(PA)感染角膜炎中的作用及其分子机制。【方法】为了揭示TREM-1在细菌性角膜炎中的作用,我们建立了PA角膜炎小鼠模型和PA感染的腹腔巨噬细胞模型,real-timePCR和免疫荧光法检测感染前后TREM-1的表达水平;用丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的抑制剂或磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂预处理巨噬细胞,再用脂多糖(LPS)和TREM-1活化抗体刺激,real-time

那个 PCR检测IL-1β、MIP-2、TNF-α和IL-6等促炎因子的表达水平,进一步探讨TREM-1调控PA角膜炎的分子机制;用Th1细胞因子IFN-γ或者Th2细胞因子IL-4、IL-10刺激巨噬细胞,real-time PCR检测Th1/Th2细胞因子对TREM-1表达的调控。【结果】PA感染的C57BL/6小鼠角膜中TREM-1表达高于BALB/c小鼠;体外研究显示PA感染和LPS刺激均诱导TREM-1高表达;TREM-1通过MAPK和PI3K-Akt通路调节促炎因子生成;Th1细胞因子促进TREM-1表达,而Th2细胞因子不影响TREM-1的表达。【结论】PA感染上调TREM-1的表达,TREM-1通过调控Th1/Th2细胞因子的表达进一步放大炎症,导致角膜溃疡穿孔,这一发现可能为化脓性角膜炎的防治提供了新的理论依据。
本研究探讨藤黄酸对Jurkat细胞的抑制作用及可能机理。以不同浓度藤黄酸与抑制剂处理Jurkat细胞,AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞的凋亡;流式细胞仪检测荧光素激活的caspase 3、caspase 8、caspase 9阳性细胞水平;免疫印迹检测pro-caspase

3、pro-caspase 9、磷酸化JNK及P38蛋白水平。结果表明,藤黄酸呈浓度依赖性诱导Jurkat细胞凋亡;藤黄酸作用Jurkat细胞后caspase 那个 3、caspase 8、caspase 9阳性细胞水平升高,caspase 3、caspase 9活化蛋白及磷酸化JNK及P38蛋白水平升高;ROS、CaMKⅡ、caspase 3、caspase 9、MAPKK、JNK1/2及P38抑制剂减弱藤黄酸诱导Jurkat细胞凋亡的作用;ROS、CaMKⅡ、MAPKK、JNK1/2及P38抑制剂降低藤黄酸作用Jurkat细胞后caspase 3、caspase 9活化蛋白水平;ROS、CaMKⅡ、MAPKK、JNK1/2抑制剂降低藤黄酸作用Jurkat细胞后磷酸化JNK蛋白水平;ROS、CaMKⅡ、MAPKK、P38抑制剂减弱藤黄酸作用Jurkat细胞后磷酸化P38蛋白水平。结论:藤黄酸通过激活caspase途径诱导Jurkat细胞凋亡,该过程可能与ROS-CaMKⅡ-MAPKK-JNK/P38通路有关。
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)是真核细胞介导细胞外信号到细胞内反应的重要信号传导系统之一,P38MAPK是MAPK家族的重要成员,他在炎症、细胞应激、凋亡、细胞周期和生长等多种生理和病理过程中起重要作用.现从其组织结构、分布亚型、激活途径和功能等方面,对P38MAPK信号通路在肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)过程中所起的重要作用作一综述,旨在为相关研究提供参考资料.

05)。3. MMP-13检测:与SO组相比,O+L组、O-L组均有增高(P<0.05,P<0.01),但O-L组增高更为明显;与O+L组相比,O-L组MMP-13显著增高(P<0.05,P<0.05,P
第一部分乙型肝炎病毒X蛋白能过MEK/ERK和PI-3K/Akt信号通路上调cyclinD1并促进肝脏卵圆细胞增殖 第一节HBX在体外对肝脏卵圆细胞增殖的直接促进作用 目的：研究乙型肝炎病毒编码X蛋白在体外对肝脏卵圆细胞增殖的促进作用. 方法：运用荧光显微镜观察及Western blot对稳定表达HBX的大鼠肝脏卵圆细胞系HBX-EGFP-LE/6进行鉴定。以转染HBX细胞系HBX-EGFP-LE/6为实验组,转染标记绿色荧光蛋白空载体EGFP-LE/6、LE/6细胞系为对照组,通过MTT细胞增殖活力实验及EDU掺入实验比较三组细胞DNA合成速度。

结果：HBX在部分细胞克隆稳定高表达,对照组细胞未检测到HBX表达。HBX对肝脏卵圆细胞的增殖具有促进作用,在同步化后培养24h、48h、72h,与对照组相比,HBX-EGFP-LE/6卵圆细胞系增殖加快,差异有统计学意义(p
人类的食管下括约肌(lower 而且 esophageal sphincter,LES)位于食管下端和胃的连接处,与大多数哺乳动物不同的是LES由大弯侧的套锁纤维(sling fibers)和小弯侧的钩状纤维(clasp fibers)构成。这两种平滑肌细胞形成一长约1~3cm的高压带,正常人静息时LES压力为10~30mmHg,比胃内压高约5~10mmHg,发挥着生理括约肌的作用。正常情况下,LES处于持续的收缩状态,从而限制胃内容物反流入食管。但在进食或发生喛气、呕吐时,LES会适时松弛允许营养物质进入胃和胃内气体或内容物呕出。因此,当LES的功能状态和(或)结构发生异常变化时,则会引发多种食管疾病,如胃食管反流病、贲门失弛症等等。 LES的功能调节机制非常复杂,包括神经系统、体液因素和肌源性因素。生理状态下,神经或内分泌细胞分泌的脑肠肽可以作为神经递质、神经调质及激素对LES的收缩和舒张进行调节,但无论调节发生在哪一水平,脑肠肽最终都要同LES表面的受体结合,激活受体后一系列信号转导机制,引发LES的收缩与舒张。以往的研究大多集中在脑肠肽通过中枢、外周及肠神经系统对胃肠运动进行调节,而对游离的单个套索纤维细胞和钩状纤维细胞运动规律研究较少。因此,有必要在细胞水平进一步研究LES套锁纤维和钩状纤维的受体及受体后信号转导机制,以便阐明LES运动的调节机制。

Protein Tyrosine Kinase抑制剂 脑肠肽要通过质膜上存在的肌醇脂质系统和环核苷酸系统将胞外信号转导入细胞内,从而引发LES发生收缩或舒张,即脑肠肽与细胞表面受体结合并使之活化,促使三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate, GTP)与不同的鸟苷酸结合蛋白(GTP-binding protein, G protein)结合并使之活化,使效应酶活化或抑制,进而引发不同的调控途径来调节LES的收缩或舒张。G蛋白在细胞跨膜信息传递过程中发挥着“桥梁”作用,所以阐明与脑肠肽受体偶联的G蛋白的类型对深入研究导致LES收缩或舒张的受体后信号转导通路具有重要意义。 胃动素和胃泌素是人体内重要的兴奋性脑肠肽,对促进胃肠运动发挥重要作用。但是,关于胃动素和胃泌素与套锁纤维和钩状纤维特异性受体耦联的G蛋白信号转导通路研究较少。促胰液素是一种抑制性脑肠肽,可导致胃肠平滑肌舒张,使胃排空延迟。国内外有关促胰液素与LES功能的关系及信号转导途径研究较少,且大部分局限在动物水平,少数关于人LES的研究也停留在大体标本水平,同时在细胞水平对套锁纤维细胞和钩状纤维细胞与脑肠肽耦联的G蛋白及信号转导通路的研究比较少。因此本实验选用具有代表性的兴奋性脑肠肽(胃动素、胃泌素)和抑制性脑肠肽(促胰液素)应用于单个的套锁纤维和钩状纤维,研究脑肠肽对套锁纤维和钩状纤维作用的受体、G蛋白类型和受体后信号转导通路,期望在细胞水平进一步阐明兴奋性脑肠肽和抑制性脑肠肽的信号转导机制,进而深入认识LES的调节机制,这对于认识食管运动障碍性疾病具有重要意义。 本研究用人LES游离的套锁纤维和钩状纤维,应用兴奋性脑肠肽(胃动素、胃泌素)和抑制性脑肠肽(促胰液素),观察:(l)LES套锁纤维和钩状纤维的反应;(2)与脑肠肽受体耦联的G蛋白的类型;(3)兴奋性脑肠肽与肌醇脂质信号系统间的关系;抑制性脑肠肽与环核苷酸信号系统间的关系。通过上述研究在细胞水平深入了解脑肠肽干预下LES细胞内信号物质的变化规律,从而揭示脑肠肽对LES作用的本质。本实验主要分三个部分: 第一部分胃动素对LES套索纤维和钩状纤维的调节作用及其信号转导通路 目的:胃动素是一种由22个氨基酸组成的兴奋性脑肠肽,是启动消化间期胃肠移行性复合运动(migrating 也许 motor complex, MMO)的重要激素。本文主要讨论胃动素受体在人LES套锁纤维和钩状纤维中的表达规律,及胃动素引起套锁纤维细胞和钩状纤维细胞收缩规律及信号转导通路。 方法:选取2009年5月至2010年10月期间因食管中段癌于河北医科大学第四附属医院行手术治疗患者5例,术中分别收集套索纤维和钩状纤维。(1)制备游离的套锁纤维和钩状纤维细胞悬液,不同浓度胃动素溶液(10~(-6),

10~(-7), 10~(-8), 10~(-9), 10~(-10), 10~(-12)mol/L)作用于套锁纤维和钩状纤维引起收缩反应,随后应用2.5%的戊二醛终止反应,并记录套锁纤维和钩状纤维的长度变化。应用GraphPad Prism5.0软件对数据进行非线性回归分析,得出浓度-反应曲线,分析得到套锁纤维与钩状纤维最大收缩百分比时对应的胃动素溶液浓度;(2)通过逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction , RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)法检测套索纤维和钩状纤维中胃动素受体的表达规律;(3)应用皂苷制备可通透套锁纤维和钩状纤维单细胞悬液,分别观察抗胃动素血清(1:100)、磷脂酶C抑制剂U-73122(10~(-6)mol/L)、三磷酸肌醇受体拮抗剂肝素(10μg/mL)对胃动素引起套锁纤维和钩状纤维的收缩反应变化规律;(4)通过[35S]GTPγS结合实验,观察G蛋白水平变化;(5)观察特异性G蛋白抗体(Gαi3、Gαs、Gαq/11)对胃动素作用的影响,分析与胃动素受体耦联的G蛋白的类型。 结果:(1)胃动素在10~(-6)-10~(-12) mol/L范围内对套锁纤维和钩状纤维均有收缩效应,且呈剂量-效应关系,并且最大反应浓度为10~(-6)mol/L。胃动素引起套索纤维和钩状纤维出现最大收缩百分率分别为(24.1±1.2)%和(21.1±1.0)%,套锁纤维收缩百分率高于钩状纤维(t=3.18, P=0.004);(2)RT-PCR和Western blot显示套索纤维和钩状纤维中均存在胃动素受体的表达,并且套锁纤维表达高于钩状纤维(t=5.