05)。 4.抑制actin重组对吗啡药物奖赏记忆再巩固行为学的影响是否长期存在 经过8天的CPP训练,各组均形成了CPP。与对照组相比,向NAc shell脑区微注射actin重组抑制剂Latrunculin A对吗啡CPP的影响,这种作用至少可以持续2周且不能被低剂量吗啡点燃(P
目的： t(8;21)/AML的发生机制与染色体易位产生的特异性融合蛋白AML1-ETO异常募集组蛋白脱乙酰化酶(HDAC),进而干扰AML1所激活靶基因的正常转录相关。本实验研究HDAC抑制剂丙戊酸钠(VPA)体内给药对白血病细胞系Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤生长的影响,探讨可能的作用机制。 方法： 建立Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤模型,分为对照组和VPA治疗组进行实验,观察并记录各组裸鼠移植瘤的生长情况,计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率。HE染色观测肿瘤细胞形态。末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP原位缺口末端标记(‘TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡。RT-PCR和Western blot方法分析粒-单核细胞刺激因子(GM-CSF)、组蛋白脱乙酰化酶1(HDAC1)、乙酰化组蛋白H3(Ac-H3)、Survivin的mRNA或蛋白的表达。染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测VPA对GM-CSF基因启动子区域组蛋白H3乙酰化程度的影响。

EPZ-6438研究购买 结果： 1. Kasumi-1细胞的裸鼠移植瘤模型特点 裸鼠前肢跟部皮下接种生长状态良好的Kasumi-1细胞后,第3天开始成瘤,成瘤率为100%。荷瘤裸鼠随着时间延长,肿瘤体积逐渐增大,绘制肿瘤生长曲线。经病理切片检查,裸鼠的外周血、肝脏、肺脏均未见瘤细胞转移。RT-PCR方法检测Kasumi-1细胞标志性融合基因AML1/ETO,证实其表达存在。 2.VPA对裸鼠移植瘤生长的抑制作用 VPA体内用药明显抑制裸鼠Kasumi-1细胞移植瘤的生长,观测到随着用药时间延长,VPA用药组移植瘤生长速度相比对照组明显减慢,用药12天后处死小鼠,实验过程中没有裸鼠死亡,VPA组瘤体积及重量与对照组相比明显减少,具有统计学差异(P
目的：体外建立人胃癌细胞多药耐药模型(SGC7901/ADM),研究多药耐药机制及三氧化二砷(arsenic trioxide,AS2O3)对其逆转耐药作用。 方法：采用阿霉素(Adriamycin, ADM)浓度梯度递增法诱导建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADMo显微镜下观察细胞形态；MTT法检测亲本细胞株SGC7901/S及耐药细胞株SGC7901/ADM分别对ADM、长春新碱(vincristine,

VCR)、紫杉醇(taxol,TAX)的敏感性,计算所获得耐药细胞株耐药倍数,并检测As2O3对其逆转耐药倍数；免疫细胞化学法(PV法)检测细胞中P-gp、Caspase3蛋白表达情况；流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果：胃癌细胞株SGC7901/ADM对ADM、VCR和TAX均产生耐药,耐药倍数分别是7.49、7.56及5.33倍。经0.5mmol/L浓度的AS2O3作用48h后耐药倍数明显下降,分别为0.77、1.29、1.4(P
目的：

Ruxolitinib 1、观察细胞外液酸化对大鼠离体冠状动脉环静息张力的影响。 2、观察电压依赖性钾通道(Kv)、ATP敏感性钾通道(KATP)和大电导钙激活钾通道(BKca)在细胞外液酸化所致大鼠离体冠状动脉环静息张力改变中的作用。 3、观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在细胞外液酸化所致大鼠离体冠状动脉环静息张力改变中的作用。 方法： 而且 1、将雄性大鼠(200～250g)断头处死,立即取出心脏置于4℃的生理盐水溶液(physiological salt solution, PSS)中,在显微镜下迅速分离冠状动脉,剪成2mm长的动脉环,将其固定在离体微动脉张力测定仪的传感器上。采用PowerLab和DMT微血管环张力记录系统,观察细胞外液酸化(pH7.2、7.0、6.8、6.6)对大鼠离体冠状动脉环静息张力的影响。 2、观察Kv阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)(0.3mmol/L、1mmol/L)、KATP阻断剂格列苯脲(Gli)(0.003mmol/L、0.01mmol/L、0.03mmol/L)和BKca阻断剂四乙胺(TEA)(1mmol/L、3mmol/L)对细胞外液酸化(pH7.2、7.0、6.8、6.6)所致大鼠离体冠状动脉环静息张力改变的影响。 3、观察p38MAPK抑制剂SB239063(1μmol/L)对细胞外液酸化(pH7.2、7.0、6.8、6.6)所致大鼠离体冠状动脉环静息张力改变的影响。 结果： 1、在静息状态下,随细胞外液pH值降低(pH7.2、7.0、6.8、6.6),大鼠离体冠状动脉环张力逐渐增高。以KC1(60mmol/L)所致的最大收缩幅度为100%,pH7.2、7.0、6.8、6.6的收缩百分比分别为(4.51±1.48)%、(38.84±7.24)%、(78.61±4.10)%、(101.79±3.64)%。 2、细胞外液酸化(pH7.2、7.0、6.8、6.6)所致大鼠冠状动脉环的收缩百分比分别为(6.57±2.35)%、(34.42±9.48)%、(76.41±8.58)%、(101.91±3.02)%；预孵4-AP (0.3mmol/L)时,可显著抑制细胞外液pH6.6所致大鼠冠状动脉环的收缩(P0.05)。 5、细胞外液酸化(pH7.2、7.0、6.8、6.6)所致大鼠冠状动脉环的收缩百分比分别为(7.85±3.27)%、(39.04±5.19)%、(78.28±5.39)%、(103.89±3.42)%；预孵SB239063(1μmol/L)时,可显著抑制细胞外液pH7.0、6.8、6.

天狼猩红染色胶原含量的变化 6周时,各组大鼠心肌纤维化面积均有不同程度的提高。MIR组大鼠心肌存在广泛的心肌纤维化,且心肌纤维化面积明显高于1周组(P＜0.05)。SMC的治疗明显改善了大鼠的心肌纤维化,且呈剂量依赖性,大剂量组优于小剂量组。应用p38MAPK抑制剂(SB组)明显降低心肌纤维化的面积,与SMC治疗组比较差异无显著性(P＞0.05)。与MIR组比较,SMC+LY组大鼠心肌纤维化程度也有降低,但降低水平明显小于舒脉胶囊治疗组与SB组。

8.透射电镜观测心肌超微结构变化 Sham组大鼠心肌肌原纤维排列整齐、紧密,无断裂,肌丝清晰,细胞核发育良好,线粒体体积大数量多,嵴丰富排列紧密呈Z字型,肌浆网体积大,数量多,胞浆丰富。MIR组大鼠心肌细胞肿胀、肌原纤维排列紊乱,核异形、呈分叶状,核膜已染色质边聚,常染色质呈团块状,Z线消失,核周细胞器呈点状、碎片状等变化;多数线粒体呈多形性,大小不等、嵴断裂溶解呈现絮状、空泡样变。SMCH与SB203580组心肌肌原纤维大都排列整齐,未见肌丝溶解,肌浆网扩张减少;线粒体无明显肿胀;细胞核轻度肿胀。SMCL组与SMC+LY组局部心肌细胞核异型;线粒体形状不规则;核周有点状、碎片状改变。 结论 1.舒脉胶囊对MI大鼠左室重构有明显的逆转作用,其具体表现为:改善MI大鼠心肌组织形态学指标,降低心肌CFs增殖与ECM胶原含量,即降低心肌α-SMA与collagenⅠ的表达,降低心肌纤维化,改善心肌超微结构的病理改变。 2.舒脉胶囊改善左室重构的分子机制为舒脉胶囊抑制p38MAPK信号通路,从而抑制心肌TNFα的蛋白表达。进而下调TIMP-1及αSMA的蛋白表达,抑制CFs的增殖与胶原的沉积。 3.舒脉胶囊改善左室整体与局部心功能。表现为左室射血分数(LVEF)的提高,左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)的降低,左室缺血区室壁厚度分数(WT%)的提高。心功能改善是舒脉胶囊对缺血心肌保护作用的终极指标。
目的：PI3K/Akt在肿瘤细胞生长、增殖及血管新生等生物学行为中起重要作用。然而,其与肿瘤血管生成拟态形成的关系不明确。本研究拟初步探索PI3K与肺癌血管生成拟态的关系。 没有 方法：收集我院2007年1月-2008年4月肺腺癌手术病例47例及良性肺疾病组织11例,免疫组化法检测各组织中Akt、p-Akt的表达；CD31免疫组织化学及PAS组织化学双重染色法检测各肺癌组织中是否存在血管生成拟态；统计学分析p-Akt阳性表达与肺癌中VM现象的关系； 结果：肺癌组织中Akt表达阳性率为80.8%(38/47),p-Akt表达阳性率为76.5%(36/47),肺良性病组织中Akt及p-Akt表达阳性率分别为27.3%(3/11)和18.2%(2/11),肺癌组织中Akt及p-Akt的阳性表达率显著高于良性肺疾病组织(p
目的：利用荧光素酶报告基因系统,确定人p55PIK基因启动子全长序列和启动子核心序列；利用生物信息学技术,分析并预测人p55PIK基因启动子核心序列中可能影响转录活性的顺式作用元件；利用定点突变技术,观察上述DNA位点对p55PIK的转录活性的影响,明确哪些位点及相应转录因子在p55PIK的转录调节中起重要作用。

AZD2281核磁共振 方法：以从正常人基因组DNA作为模板,用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)法扩增基因组DNA人p55PIK基因5’端非编码区DNA不同长度片段,分别克隆到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体得到(-651/+45)-p55PIK、(-839/+45)-p55PIK、(-1064/+45)-p55PIK、(-1243/+45)-p55PIK和(-1633/+45)-p55PIK；在HepG2、Hela细胞中,利用荧光素酶报告基因法检测各片段DNA序列的报告基因活性,确定人p55PIK基因启动子活性最强的全长序列和活性变化最大的启动子核心序列；利用生物信息学方法,分析这一启动子核心序列并预测可能与之结合的转录因子和相应的顺式作用元件；利用定点突变技术结合荧光素酶报告基因检测技术,明确哪些位点及相应转录因子对p55PIK转录活性其重要作用。 结果：构建得到p55PIK基因上游调控区不同长度片段的荧光素酶报告基因载体(-651/+45)-p55PIK、(-839/+45)-p55PIK、(-1064/+45)-p55PIK、(-1243/+45)-p55PIK和(-1633/+45)-p55PIK,酶切及测序鉴定分子量及序列正确；观察各质粒的相对荧光素酶活性,HepG2中(-1243/+45)-p55PIK的相对荧光素酶活性分别为4.90±0.21,p0.05)

结论：人p55PIK基因的启动子全长片段位于(-1243/+45),其核心片段位于(-1243/-840)；其中若干DNA位点可能与MZF1、YY1、RUNX1、ADR1、IRF1、Delta E、p300等转录因子结合并调节p55PIK基因的转录；位于p55PIK基因的启动子(-900/-896)的” 寻找更多 TGGGGA “位点可能与MZFl蛋白结合显著影响p55PIK基因启动子的转录水平。 目的：阐明MZF1在p55PIK转录调控中的作用及其机制,并观察该作用对肿瘤细胞增殖的影响。 方法：我们利用染色质免疫共沉淀法验证了MZF1蛋白与p55PIK启动子(-900/-896)位点的TGGGGA序列DNA之间的结合,阐明MZF1对p55PIK的转录调控作用的具体机制。我们分别在肿瘤细胞系中高表达、低表达了MZF1蛋白。用荧光素酶报告基因系统、荧光定量PCR法和Western Blot免疫印迹法分别检测了p55PIK基因的转录水平、mRNA水平和蛋白表达水平的变化,阐明p55PIK是否受MZF1的转录调控；利用BrdU掺入法检测了细胞DNA合成能力,利用Ki67法检测了细胞增殖相关抗原的表达,p55PIK接受MZF1蛋白的转录调控对肿瘤细胞增殖的影响。在该作用的临床意义方面,我们利用荧光定量PCR法,检测了10例结直肠癌患者的肿瘤标本和正常组织标本中的MZF1和p55PIK的mRNA水平,分析了二者的表达的变化及相关性,阐明p55PIK表达与MZF1的表达的相关性,以及p55PIK在结直肠肿瘤发生发展中的作用及意义。 结果：MZF1 Antibody组和Input组均有明显的条带,而阴性对照IgG组则无明显条带。GFP-MZF1质粒组的p55PIK全长相对荧光素酶活性显著高于GFP空质粒组(P<0.01,LOVO中P<0.

05）。各处理组p-Akt表达均下降。DRAM1基因可以促进自噬。顺铂联合电离辐射同单纯电离辐射相比DRAM1表达明显增高。各处理组MAPLC3-II蛋白（表明自噬体形成）表达明显增高（p
第一部分SENP1表达预测非小细胞肺癌化疗敏感性和预后 背景非小细胞肺癌(NSCLC)是最常见的恶性肿瘤,占全部肺癌的80%左右。超过65%的NSCLC患者发现时已为中晚期,只能采取放、化疗为主的综合治疗。近年来,尽管在治疗方式上已有较大进展,但非小细胞肺癌患者的死亡率仍然很高。其中,1/3-1/2的患者对铂类药物耐药。研究发现缺氧通过多个通路导致肿瘤细胞对顺铂耐药,而SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在缺氧-HIF1α-VEGF信号通路中起重要作用。为此,进行本研究。旨在评价SENP1表达水平与非小细胞肺癌TNM病理分期、化疗敏感性和预后的关系,进而研究SENP1调节血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用。 方法构建SENP1siRNA并转染至肺癌细胞系中。应用RT-PCR研究SENP1siRNA对VEGF mRNA表达的影响。在100例非小细胞肺癌患者中分析SENP1表达与TNM病理分期、化疗敏感性和预后的相关性。 结果非小细胞肺癌中VEGF mRNA水平高于正常肺组织。SENP1siRNA抑制肺癌细胞系中VEGF

mRNA表达。非小细胞肺癌中55%为SENP1高表达。SENP1蛋白过表达与肺癌中低分化相关(肺癌高、中、低分化中SENP1蛋白过表达的比例分别为3.6%,38.2%,和58.2%,P=0.046)。T分级越高,SENP1蛋白过表达的比例越高(T1,T2和T3的表达比例分别为10.9%,89.1%和0%；P=0.003)。SENP1蛋白过表达组的淋巴结转移率(76.4%)高于SENP1蛋白低表达组的淋巴结转移率(33.3%,P<0.001)。TNM分期越高,SENP1蛋白过表达的比例越高(Ⅰ期,Ⅱ期和Ⅲ期的表达比例分别为10.9%,61.8%和27.3%,P
研究背景

Endocrinology antagonist AG-014699供应商 胃癌是一种常见的恶性肿瘤,在美国,其发病率及死亡率位列第14位,每年新增胃癌确诊病例数约为21000人,死亡数约为10000人。胃癌患者中,男性所占比例较大,约占60%左右。胃癌是一种老年性疾病,70岁左右的人群发病率最高。在美国社会的各个种族中,非洲裔、亚洲裔以及西班牙裔美国人的胃癌发病率要高于白种人的胃癌发病率。在世界范围内,胃癌是第四大恶性肿瘤,其死亡率位居第二位。胃癌在东亚和南美洲发病率较高,但是近些年来,其发病率在发达国家呈逐年上升趋势,约占世界范围内胃癌新增病例数和死亡数的三分之二。而在美国,胃癌的发病率却在逐渐下降。在发达国家阵营中,日本和韩国的胃癌发病率则最高。胃癌在日本是最常见的恶性肿瘤。正因为如此,日本政府于上世纪七十年代启动了胃癌筛选计划,得益于该计划的实施,胃癌在日本的发病率下降了50%。尽管胃癌在日本的发病率在下降,但是其大部分都是末端胃癌。胃癌发病的危险因素主要是环境因素和基因遗传因素。1994年,国际癌症研究机构明确提出幽门螺杆菌是一种致癌物。大量的科学研究也证实胃癌发病与幽门螺杆菌感染有关。目前认为,幽门螺杆菌感染导致胃癌形成的主要机制是感染导致胃粘膜产生慢性炎症,长期的感染导致胃炎,主要集中在胃体,并伴有胃粘膜的萎缩。在一些患者中,这一病变还可导致胃肠道粘膜发生化生、异型增生,直至最后发生肠型腺癌。研究表明,在胃肠道粘膜发生化生的过程中,大量的基因存在异常表达,最终可能导致胃肠道粘膜发生癌变,例如,环氧酶2、细胞周期素蛋白D2、p53在胃粘膜化生过程中过表达,微卫星不稳定性,p27的表达降低以及CDX1、CDX2等转录因子在胃粘膜化生过程中的异常表达。这些均表明胃肠道粘膜化生是胃癌发病过程中的一个重要的危险因素。但是并不是每一个发生肠化生的患者都会发展成胃癌。研究表明,宿主炎症反应在这一过程中发挥重要作用。有文献报道,白介素1表达升高的患者发生胃癌的风险较大。此外,高盐食物,特别是一些含有大量的硝酸盐的腌制或者熏制的食物,再加上水果、蔬菜的摄入量较低,经常有这一饮食习惯的人群的发生胃癌的几率将会大大增加。这一作用机制,目前主要是认为食物中含有的硝酸盐成分在细菌的作用下转换成亚硝基化合物,而水果及蔬菜中则富含抗坏血酸,抗坏血酸能有效清除亚硝酸基化合物及氧自由基。目前,胃癌的主要治疗方式是手术切除,然后辅以放化疗,尽管这一治疗方式仍然行之有效,但是对胃癌转移患者却疗效不佳。因此,寻找胃癌新型早期诊断和预后评估因子仍然是一项迫在眉睫的任务。

一般 细胞外信号分子,如致癌基因或抑癌基因,是许多学者的研究热点。作为分子标记物,p53,钙黏蛋白E (E-cadherin)和HER-2往往提示胃癌患者预后差。值得我们注意的是,各种各样的蛋白酶类,包括基质金属蛋白酶类(MMPS)和丝氨酸蛋白酶类,因其是细胞外基质物质的降解产物,往往也在胃癌发生-发展过程中发挥重要作用。 丝氨酸蛋白酶抑制剂2(SERPINE2),别称前列腺微管连接蛋白1(PN-1),是丝氨酸蛋白家族中的一员,主要负责调节凝血酶、尿激酶、血纤维蛋白溶媒和胰蛋白酶的活性。在慢性阻塞性肺疾病和小叶性肺气肿中丝氨酸蛋白酶抑制剂2作为一个敏感因子首次被发现。最近的研究表明,丝氨酸蛋白酶抑制剂2与肿瘤形成密切相关。有文献报道,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在乳腺癌、结肠癌、口腔鳞状细胞癌等多种恶性肿瘤中呈现异常表达。此外,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在前列腺癌中同时也是一种抑癌基因,有降低肿瘤细胞增殖和血管形成的作用。而恰恰相反,另有文献报道,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在睾丸癌的移植物模型中有促进淋巴结转移的作用,提示其可能同时也是一个致癌基因。但是,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在胃癌中的表达、其与胃癌患者预后的关系以及其在胃癌细胞中的生物学功能仍然鲜有报道。 本实验通过应用实时定量免疫荧光聚合酶链式反应(real-time quantitativePCR.

0软件设计PLGF、GAPDH两者的引物和Taqman探针 (2)利用Trizol试剂提取细胞总RNA (3)重组质粒pUCmT-PLGF的构建 (4)重组质粒pUCmT-GAPDH的构建 (5)real-time PCR检测人肺癌细胞系中PLGF的mRNA表达水平 二、PLGF沉默对小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障的作用的研究 1、以腺病毒为载体的RNAi载体的构建 (1)含目的基因(siPLGF)的穿梭子(shuttle)构建 ①构建双链siPLGF：双链短发夹oligo DNA退火连接 ②线性化shuttle空载体与双链siPLGF的连接 ③重组质粒的转化、筛选和鉴定 (2)腺病毒的重组 ①线性化载体shuttle(si PLGF) ②shuttle和pAdEasy腺病毒载体共转化细菌BJ5183 ③重组子的筛选和鉴定 ④重组子(Ad-shuttle-siPLGF)的大量扩增 2、病毒颗粒的包装 (1) HEK293细胞的培养 (2)初级病毒颗粒的形成

(3)二级病毒颗粒的形成 (4)三级病毒颗粒的形成 (5)病毒颗粒滴度的测定 3、NCI-H250细胞的感染及沉默功能的鉴定 (1) NCI-H 250细胞的感染 (2) real-time PCR方法鉴定RNA干扰效果 4、具有PLGF沉默效应的NCI-H250细胞功能鉴定

(1)荧光定量方法检测有、无PLGF沉默效应的NCI-H250细胞穿过HBMEC单层的情况 更多 (2)检测有、无PLGF沉默效应的NCI-H250细胞对体外血脑屏障模型跨膜电阻抗(TEER)的影响 {Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|buy Anti-infection Compound Library|Anti-infection Compound Library半抑制浓度|Anti-infection Compound Library价格|Anti-infection Compound Library花费|Anti-infection Compound Library溶解度|Anti-infection Compound Library购买|Anti-infection Compound Library制造商|Anti-infection Compound Library查找购买|Anti-infection Compound Library订单|Anti-infection Compound Library mouse|Anti-infection Compound Library chemical structure|Anti-infection Compound Library分子量|Anti-infection Compound Library molecular weight|Anti-infection Compound Library数据表|Anti-infection Compound Library supplier|Anti-infection Compound Library体外|Anti-infection Compound Library细胞系|Anti-infection Compound Library concentration|Anti-infection Compound Library nmr|Anti-infection Compound Library体内|Anti-infection Compound Library clinical trial|Anti-infection Compound Library cell assay|Anti-infection Compound Library screening|Anti-infection Compound Library high throughput|buy Antiinfection Compound Library|Antiinfection Compound Library半抑制浓度|Antiinfection Compound Library价格|Antiinfection Compound Library花费|Antiinfection Compound Library溶解度|Antiinfection Compound Library购买|Antiinfection Compound Library制造商|Antiinfection Compound Library查找购买|Antiinfection Compound Library订单|Antiinfection Compound Library chemical structure|Antiinfection Compound Library数据表|Antiinfection Compound Library supplier|Antiinfection Compound Library体外|Antiinfection Compound Library细胞系|Antiinfection Compound Library concentration|Antiinfection Compound Library clinical trial|Antiinfection Compound Library cell assay|Antiinfection Compound Library screening|Antiinfection Compound Library high throughput|Anti-infection Compound high throughput screening| (3)检测有、无PLGF沉默效应的NCI-H250细胞对体外血脑屏障模型通透性的影响：HRP通过率分析 (4)免疫荧光法观察有、无PLGF沉默效应的NCI-H250细胞穿过HBMEC单层时对紧密连接结构蛋白ZO-1的影响 三、PLGF改变脑微血管内皮细胞间紧密连接的分子机制的研究 1、检测PLGF重组蛋白对体外培养的HBMEC单层渗透性的影响 (1) Trailswell体外血脑屏障模型的建立 (2)检测PLGF对体外血脑屏障模型跨膜电阻抗(TEER)的影响 (3)检测PLGF对辣根过氧化物酶(Horse-radish peroxidase，HRP)穿过率的影响 2、观察PLGF重组蛋白对HBMEC间紧密连接结构的影响 (1)免疫荧光法观察PLGF对体外培养的HBMEC间紧密连接(tightjunction，TJ)结构蛋白ZO-1的影响 (2) Westem blot方法检测PLGF对体外培养的HBMEC间紧密连接结构蛋白occludin的影响 3、观察PLGF重组蛋白对Rho酪氨酸激酶活化的影响 (1)观察ROCK，Rho，PI3K，PKC，ERK抑制剂作用下，PLGF对HBMEC的诱导作用 (2) Pull-down方法检测Rho酪氨酸激酶的活化情况 (3) Westernblot方法检测cofilin的变化情况 4、免疫荧光法观察HBMEC细胞骨架微丝的变化

结果 一、PLGF在肺癌中的表达 1、免疫组织化学方法检测PLGF在肺癌组织标本中的表达 (1)对72例SCLC、45例人肺腺癌、24例人肺鳞癌和5例癌旁组织标本进行免疫组织化学染色，结果显示，在小细胞肺癌、肿鳞癌和肺腺癌中均有PLGF阳性细胞表达。 (2)对免疫组织化学染色结果进行灰度扫描，对Integrated OD Average值做t-检验，PLGF在肺腺癌中高表达；在SCLC和肺鳞癌中表达略低于肺腺癌。 (3)在72例SCLC中，有20例(27.8％)PLGF高表达，52例(72.2％)PLGF低表达；对PLGF高达表组和PLGF低表达组患者淋巴结转移数目进行比较，p＜0.05，存在统计学意义。 2、RT-qPCR检测肺癌细胞系中PLGF mRNA的表达情况 六株组织学不同、来源不同的肺癌细胞系中，PLGF 不 mRNA表达水平不同：NCI-H 250细胞(来源于SCLC脑转移灶的细胞株)PLGF高表达；NCI-H 209细胞(来源于SCLC骨髓转移灶的细胞株)PLGF表达略低；NCI-H 446(来源于SCLC胸水渗漏的细胞株)PLGF低表达；A549(肺腺癌细胞系)和BE1、LH7(大细胞肺癌)PLGF也呈低表达。 二、PLGF沉默对小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障的作用的研究 1、以腺病毒为载体的RNAi系统的构建 成功构建了携带短发夹siPLGF的穿梭载体：shuttle(siPLGF)，并与腺病毒骨架载体成功重组，获得了六个腺病毒RNAi重组子(Ad-shuttle-siPLGF)。 2、完成HEK293细胞三次病毒包装并获得了纯化病毒颗粒，含量为1.5×10~11virus。 3、AD-shuttle-si PLGF感染NCI-H 250细胞 (1)利用携带si-PLGF腺病毒颗粒感染NCI-H250细胞，感染率可达80％。 (2)利用RT-qPCR检测感染病毒颗粒的NCI-H250，Ad-shuttle-si PLGF细胞与Ad-shuttle-scramble组细胞相比，PLGF mRNA表达明显降低，并存在统计学意义(p＜0.

05)；平均SCC由低到高排序为：Se-Pro组< Na2SeO3组目的：以不同浓度以及不同时程apelin干预体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察粘附分子ICAM-1 (intercellular adhesion molecule 1,细胞间粘附分子-1)和VCAM-1 (Vascular cell adhesion molecule 1,血管细胞粘附分子-1)以及趋化因子MCP-1 (Monocyte chemotactic protein 1,单核细胞趋化因子-1)在apelin干预后的表达情况。 方法：分离、培养和鉴定人脐静脉内皮细胞,以0、10-10、10-9和10-8M apelin干预12小时后提取细胞总RNA检测ICAM-1、VCAM-1和MCP-1 mRNA表达差异。并以最佳干预浓度apelin干预细胞0h、2h、4h、8h、12h和24h,收集细胞及培养上清。以荧光定量PCR检测不同时间点细胞ICAM-1、VCAM-1和MCP-1 mRNA的表达差异,以蛋白免疫印迹实验检测蛋白表达差异,以及以ELISA方法检测细胞培养上清分泌蛋白水平差异。

结果：Apelin干预人脐静脉内皮细胞后ICAM-1、VCAM-1和MCP-1 mRNA水平明显增高,10-8M作用最强。ICAM-1表达在4h达最高,表达曲线呈钟形,VCAM-1和MCP-1表达随干预时间延长渐增强,分别于12h和24h达峰值。 结论：Apelin呈浓度和时间依赖性刺激内皮细胞粘附分子ICAM-1和VCAM-1以及趋化因子MCP-1的表达,apelin所引起的内皮细胞炎症反应提示其可能是一种促动脉粥样硬化因子。 目的：应用RNA干扰技术沉默人脐静脉内皮细胞APJ基因的表达,研究APJ基因沉默后apelin调节人脐静脉内皮细胞表达粘附分子和趋化因子的变化,初步阐明apelin-APJ系统在细胞学水平上对动脉粥样硬化形成的可能调节机制。

方法：针对人APJ cDNA编码序列设计shRNA (small hairpinRNA,短发夹RNA)表达框,以pGenesil-1 vector为载体构建质粒,并设阴性对照质粒。以脂质体为介导对培养的人脐静脉内皮细胞进行稳定转染,检测转染细胞APJ RAD001 mRNA和蛋白表达鉴定基因沉默效率。以未转染空白对照、转染阴性siHK质粒和转染siAPJ-2质粒的人脐静脉内皮细胞为研究对象,apelin分别干预三组细胞后,应用荧光定量PCR检测粘附分子ICAM-1和VCAM-1以及趋化因子MCP-1mRNA表达,蛋白免疫印迹实验检测蛋白表达。 时间 结果：APJ基因沉默后,与未转染空白对照、转染阴性siHK质粒的人脐静脉内皮细胞比较,apelin诱导的内皮细胞粘附分子ICAM-1和VCAM-1以及趋化因子MCP-1表达增高被显著抑制(ICAM-1被抑制程度超过90%)。 结论：APJ作为apelin受体在内皮细胞被诱导表达粘附分子和趋化因子增高这一反应过程中的地位是不可或缺的,apelin-APJ系统所引起的内皮细胞炎症反应为其促动脉粥样硬化机制提供了细胞学证据。 目的：阐明JNK (c-Jun N-terminal Kinase, c-Jun氨基末端激酶)和NF-κB (nuclear factor-kappa B,核因子κB)信号分子是否参与以及如何参与apelin-APJ所导致的内皮细胞炎症的调节过程。 方法：apelin分别干预人脐静脉内皮细胞0、5、15、30、60和120 min。提取细胞磷酸化蛋白行蛋白免疫印迹实验检测p-JNK表达；提取细胞核蛋白和胞浆蛋白行蛋白免疫印迹实验分别检钡NF-κB-p65和IκBa表达。以JNK抑制剂SP600125和NF-κB抑制剂SN50分别预处理人脐静脉内皮细胞后提取细胞总RNA行逆转录和荧光定量PCR检测粘附分子ICAM-1和VCAM-1以及趋化因子MCP-1表达变化。

结果：Apelin在60min激起p-JNK表达高峰,胞核NF-KB-p65蛋白在60min也出现最强信号,胞浆IκBa蛋白表达水平于30min出现谷底状表达。JNK抑制剂和NF-κB抑制剂预处理细胞抑制apelin诱导的粘附分子ICAM-1和VCAM-1以及趋化因子MCP-1表达。 结论：Apelin通过磷酸化激活JNK和促进NF-κB转录因子活化核转位这两条信号通路引起内皮细胞表达粘附分子和趋化因子增强的炎症反应,为进一步研究apelin-APJ促动脉粥样硬化机制打下了基础。
胰岛素和运动均促使葡萄糖转运子4转位到细胞膜上,转运更多的葡萄糖进入细胞而调节细胞的葡萄糖摄取量。相对于胰岛素,对运动／肌肉收缩刺激骨骼肌摄取葡萄糖的机制了解较少。 目前研究运动／肌肉收缩多应用转基因动物,费用昂贵,而且不能应用基因沉默等技术。而培养的细胞株则没有诸多限制,可单独分析细胞内信号转导,排除血液循环成分和血液动力学因素的影响,更好地理解锻炼如何改善胰岛素作用。目前广泛应用的L6骨骼肌细胞不具收缩能力。具收缩能力的C2C12骨骼肌细胞仅表达少量的GLUT4,使得运动调节葡萄糖转运的研究,因缺少合适的肌肉模型而受到限制。本研究的目的是建立C2C12GLUT4myc细胞株,并应用此细胞模型探讨运动／肌肉收缩刺激骨骼肌细胞GLUT4运输的机制。研究内容和方法： selleck激酶抑制剂 第一部分建立C2C12GLUT4myc细胞株；检测分化能力和GLUT4myc的表达量,确定分化能力强并高表达GLUT4myc的细胞株。与L6GLUT4myc比较膜蛋白和信号分子以及GLUT1的表达；免疫荧光检测GLUT4myc在细胞中的定位；测定此细胞响应胰岛素刺激的GLUT4转位的时间曲线和剂量曲线。 第二部分比较carbachol、AICAR和胰岛素刺激的C2C12GLUT4myc肌管葡萄糖摄取和GLUT4转位,并观察三种刺激物作用的叠加性。通过使用各种信号蛋白的抑制剂,分析刺激GLUT4转位的信号机制。 第三部分比较三种刺激物对信号分子的作用,检测信号分子的活性。结果： 建立了C2C12GLUT4myc细胞株,GLUT4myc的表达量与L6GLUT4myc中的GLUT4myc量接近,约为小鼠骨骼肌GLUT4的10倍。C2C12GLUT4myc细胞表达IRAP和TfR的量高于L6GLUT4myc, VAMP2和VAMP7的表达在两种细胞中接近。C2C12GLUT4myc细胞表达AS160、AMPKα2和GLUT1高于L6GLUT4myc细胞,而Akt1和Akt2的表达则低于L6GLUT4myc。两种细胞表达AMPKα1、Akt3和PKC的量相近。GLUT4myc主要分布于细胞核周围。C2C12GLUT4myc细胞的葡萄糖摄取和GLUT4转位对胰岛素的作用呈剂量和时间依赖关系,最大值为基础状态的1.63±0.05倍。 比较carbachol、AICAR和胰岛素刺激的C2C12GLUT4myc肌管葡萄糖摄取和GLUT4转位,并观察三种刺激物作用的叠加性的结果显示,carbachol刺激葡萄糖摄取和增加细胞表面GLUT4myc含量,使之分别增加为基础组的1.60±0.

71%;大肠癌微淋巴管密度(microlymphatic density,MLD)显著高于正常大肠组织(t=3.624,P<0.01)。结论大肠癌β-catenin异位表达可能是诱导大肠癌淋巴管生成的重要原因。
目的探讨舒芬太尼后处理对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法健康雄性SD大鼠经结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血再灌注损伤模型后随机分为8组:假手术(A)组:只穿线,不结扎;缺血再灌注(B)组:缺血30min,再灌注120

min,再灌注前5 min单次静脉注射生理盐水1 ml;缺血后处理(C)组:缺血30 min末行缺血10 s,再灌注10 s,重复3次后再灌注120 min;舒芬太尼后处理(D～H)组:再灌注前5 min分别单次静脉注射舒芬太尼0.1、0.3、1、3、10μg/kg,5 min后再灌注120 min。于结扎线缝好后平衡30 min(T0)、缺血30 min末(T1)、后处理末(T2)、再灌注120min末(T3)记录血流动力学参数。计算心肌梗死面积(IS)与缺血危险区(AAR)比值(IS/AAR)。选取A、B、C、最佳剂量舒芬太尼后处理组于T3时取颈动脉血2 ml,采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)浓度,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与B组比较,C、E、F、G、H组IS/AAR降低(P<0.05);与B组比较,C、F组MDA降低,SOD活性升高(P<0.05)。结论舒芬太尼可模拟缺血后处理减轻在体大鼠心肌缺血再灌注损伤,并且呈剂量依赖性。
Reperfusion therapy must be applied as soon as possible to attenuate 也许 the ischemic insult of acute myocardial infarction(AMI).However reperfusion is responsible for additional myocardial damage,which likely involves opening of the mitochondrial permeability transition pore(mPTP).In reperfusion injury,mitochondrial damage is a determining factor in causing loss of cardiomyocyte function and viability.Major mechanisms of mitochondrial dysfunction include the long lasting opening of mPTPs and selleck产品 the oxidative stress resulting from formation of reactive oxygen species(ROS).Several signaling cardioprotective pathways are activated by stimuli such as preconditioning and postconditioning,obtained with brief intermittent

ischemia or with pharmacological agents.These pathways converge on a common target,the mitochondria,to preserve their function after ischemia/reperfusion.The present review discusses the role of mitochondria in cardioprotection,especially the involvement of adenosine triphosphate-dependent potassium channels,ROS signaling,and the mPTP.Ischemic postconditioning has emerged as a new way to target the mitochondria,and to drastically reduce lethal reperfusion injury.Several clinical studies using ischemic postconditioning during

angioplasty now support its protective effects,and an interesting alternative is pharmacological postconditioning.In fact ischemic postconditioning and the mPTP desensitizer,cyclosporine A,have been shown to induce comparable protection in AMI patients.
目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在胚胎癌细胞增殖中的作用及其机制。方法取小鼠胚胎癌细胞系P19进行传代培养,将细胞分为正常对照组(Con组)、添加反式维甲酸组(RA组)、添加GSK-3β特异性抑制剂SB216763组(SB组)和添加SB216763+RA组(SB+RA组)四组。采用免疫荧光染色、RT-PCR和Western GSK1210151A分子量 blot-ting法分别检测细胞中β-catenin、Oct4及C-myc的表达状况;通过BrdU标记与MTT法检测细胞的增殖。结果 加入SB216763可促进P19细胞β-catenin入核,同时促进Oct4和C-myc基因的表达,阻断RA诱导的细胞分化,并可明显促进细胞增殖。结论 激活Wnt/β-catenin信号通路可促进胚胎癌细胞P19的增殖并抑制分化,其作用机制可能是通过上调C-myc基因表达来实现的。
目的:研究脑缺血预处理(CIPC)中氯化锂对PI3K/AKT/GSK3β信号通路调节变化及影响。方法:制作脑缺血、CIPC及氯化锂干预模型,进行神经功能缺损评分;TTC法脑组织染色计算脑梗死体积;应用Western blotting检测AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的蛋白表达。结果:与脑缺血组比较,氯化锂组及CIPC组p-AKT、Mcl-1、p-GSK-3β(ser9)的蛋白表达均增高,神经功能缺损评分及脑梗死体积降低(P<0.05);与CIPC组比较,氯化锂组进一步提高了p-AKT、Mcl-1、p-GSK-3β(ser9)的蛋白表达、降低了神经功能缺损评分及脑梗死体积(P<0.

23%。 1.2细胞凋亡结果显示CML CD34+干/祖细胞对IM不敏感；经过IM处理后miR-21表达水平有一定的上调；转染antagomiR-21能显著增加IM诱导的CML CD34+干/祖细胞凋亡，细胞凋亡率由对照组的3.983±0.2973增加至9.437±0.5601。

1.3Sup-15细胞对IM诱导的细胞凋亡不敏感；在IM处理后miR-21表达也发生一定的上调；转染antagomiR-21明显地增强IM诱导Sup-b15细胞凋亡。 1.4IM对K562和Ku812细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用随着IM浓度的升高以及处理时间的延长显著升高；在IM处理后K562和Ku812细胞的miR-21表达均下调；转染agomiR-21能抑制IM诱导K562和Ku812细胞凋亡。 2.探讨miR-21调控CML CD34+干/祖细胞对IM凋亡抗性的分子机制研究 2.1IM处理后CML CD34+干/祖细胞和Sup-b15细胞的PDCD4表达水平下调，K562和Ku812的PDCD4表达水平上调；而CML CD34+干/祖细胞和三种Ph+白血病细胞（K562、Ku812、Sup-b15）的PTEN表达水平均下调；转染antagomiR-21后CML CD34+干/祖细胞PDCD4、PTEN和p-AKT的表达水平均下调。 2.2使用PI3K抑制（Wortmannin和LY294002）阻断PI3K/AKT信号通路后，IM诱导的CML CD34+干/祖细胞和Sup-b15的细胞凋亡显著增加。 2.3使用PI3K抑制剂（Wortmannin和LY294002）阻断PI3K/AKT信号通路后，IM诱导的CML CD34+干/祖细胞和Sup-b15细胞的p-AKT蛋白表达均显著下调。 结论 miR-21通过PI3K/AKT信号通路介导CD34+干/祖细胞和Sup-b15细胞对IM的凋亡抗性。
HER3与HER2同属EGFR (epidermal growth factor selleck receptor)家族的重要成员，同为跨膜酪氨酸激酶受体(RTK)，其与多种人类癌症的形成、进展有关。研究发现HER3蛋白与HER2蛋白的表达高度相关，HER3是辅助HER2形成异源二聚体及致癌作用的重要因子之一。在乳腺癌患者中，HER2、HER3阳性率分别达到50%、41.8%。当乳腺癌患者HER3、HER2同为阳性时，其对HER2靶向药物曲妥珠单抗（Herceptin）的反应效果不佳。因而，通过抑制或阻断体内HER3水平，可能是治疗乳腺癌等癌症的一种重要途径。 【目的】 此网站 本研究采用人源化抗体库构建及筛选新思路，即将免疫后的鼠源VH-CDR3库(librare of CDR3of variable region of the murine heavy chain)移植到修饰后的人源scFv(single-chain antibody fragment)框架上，构建抗HER3人源化单链抗体基因库，并对该人源化抗体基因库进行筛选，以期获得具有潜在应用价值的抗HER3人源化单链抗体。另一方面拟通过本论文的实施，建立一种新的人源化抗体筛选技术，为快速获得人源化抗体提供一个新参考。

【方法】 1.人源化抗体基因库构建：采用HER3抗原免疫Balb/c小鼠，当抗血清效价达到1：200000时，从被免疫的小鼠脾细胞中提取总RNA，经反转录PCR（RT-PCR）获得总cDNA。以总cDNA作为模板，采用兼并引物进行PCR扩增，从而获得鼠抗体重链可变区基因库（VH），然后再以VH为模板，扩增出鼠VH-CDR3基因库。将鼠VH-CDR3库通过PCR扩增技术移植到经过修饰的人源单链抗体VH3-VΚ1上，实现抗HER3人源化抗体基因库的构建。 2.核糖体展示技术富集筛选：针对HER3抗原，经三轮兔网红细胞核糖体展示富集抗HER3的单链抗体基因。为便于后续基因库的高效克隆和表达，对回收的人源化抗体库进行基因结构单元的改进，即在基因库的N-端添加T7启动子、SD序列、PelB等表达原件，C-末端添加携带2个(His)6标签的序列，构建可直接用于TA克隆和表达目标蛋白的人源化抗HER3单链抗体基因库。

3.人源化抗体筛选与鉴定：展示后回收的HER3单链抗体基因库通过TA克隆，转化至大肠杆菌BL21（DE3），用菌落PCR鉴定克隆。分别用HER3抗原和抗VH3-VΚ1兔多克隆抗体等对筛到的阳性克隆的可溶性表达产物进行ELISA筛选，随之对亲和力较高的菌株表达产物进行纯化并测定其亲和常数。 【结果】 本研究成功构建了一个库容达1012的人源化抗HER3单链抗体基因库，经过三轮核糖体展示对抗HER3抗体基因库进行了富集，通过改良的TA克隆技术对目标基因库进行了克隆、表达以及产物鉴定。通过对亲和力较高菌株的表达产物进行纯化并测定其亲和常数，成功获得亲和力达3.02110-8M的人源化抗HER3单链抗体。 还有 【结论】 本研究为开发抗HER3抗体新药研究提供了有价值的先导抗体分子。此外，通过本课题的执行，建立了一种快速筛选人源化单链抗体的新技术途径，从而为其它人源化抗体的筛选提供一个有价值的参考。
目的:探讨Pim-1及C-myc在多发性骨髓瘤发病机制中的可能作用。莫罗尼鼠白血病病毒前病毒整合基因(Proviral integration of moloney murineleukemia virus，Pim)是一种原癌基因，它编码的蛋白是丝/苏氨酸激酶中的一种，主要涉及细胞周期的调节、蛋白质的转录与翻译、促凋亡、细胞代谢的调节及介导耐药蛋白的产生，与肿瘤的发生密切相关。Pim家族由Pim-1、Pim-2、Pim-3成员组成，可根据选择不同的转录位点编码不同的蛋白，均属于钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶家族。但它们在不同组织中得表达情况却不一样：Pim-1高表达于造血细胞，Pim-2高表达于脑和淋巴细胞，而Pim-3则高表达于肾脏、乳房和脑细。已有文献显示[29]骨髓瘤细胞系中不同程度的表达Pim-1、Pim-2及Pim-3。C-myc是一种多功能的原癌基因，位于人类染色体8q24上，其不仅具备转录因子的功能促进细胞增殖，还可以抑制细胞的分化、促进细胞周期的进展并抑制细胞的凋亡。C-myc基因能够通过扩增和染色体易位重排而激活，在肿瘤的发生发展中具有重要作用，已发现在多种人类肿瘤包括乳腺癌、急性白血病、骨肉瘤中的表达上调，而在小鼠浆细胞瘤和人类多发性骨髓瘤患者中也均发现C-myc的重排和过度表达。本课题采用RT-PCR和Western Blot两种方法检测Pim-1及C-myc在多发性骨髓瘤患者及正常对照组中的表达情况并探讨Pim-1及C-myc在多发性骨髓瘤发病机制中的可能作用，为多发性骨髓瘤的诊疗提供新的思路及方法并寻找相关的理论依据。 方法:1.选取2012.07-2013.09来本院就诊的22例初诊MM患者骨髓液作为初治组，选取2013.01-2013.09初诊的10例排除恶性血液病患者（排除肿瘤、感染、免疫系统疾病等影响试验结果疾病）骨髓液作为正常对照组。2.

678例IgA肾病肾小管间质损害与临床指标的相关分析收集经临床及肾活检证实的678例原发性IgA肾病患者的病理与临床资料。光镜下观察方法:参考Lee分级标准和Haas分型标准,并根据小管间质损害病理学特点,对肾小管间质病变严重程度采用半定量积分评价。比较不同类型肾小管间质病变IgA肾病患者之间临床表现、实验室检查及肾活检病理的特点。 Selleckchem PF-06463922 2.IgA肾病患者CTGF、P38MAPK在TGF-β1致肾脏纤维化中的作用 肾小管-间质病理指标参考Haas分型标准,将IgAN患者分为下列三组:1.轻度增生组(HaasⅠ、Ⅱ型)2.局灶增生组(HaasⅢ型)3.增生硬化组
本实验室自1985年起，即开展了以白三烯(LTs)为靶点的抗炎抗哮喘药物的研发工作。先后筛选了数百个化合物和中草药成分，发现从山葡萄根中得到的有效部位—Vams具有对抗LTD_4引起的支气管平滑肌扩张和过敏作用。Vams属天然二苯乙烯低聚体类化合物，结构完全不同于国外新上市的白三烯受体拮抗剂。Vams的主要成分为Vam3、Vam4和Vam21，其中Vam3为白藜芦醇二聚体，可通过化学合成，为Vams中主要的抗炎活性成分。本论文工作从抗哮喘、抗过敏以及免疫调节等几方面考察了Vams的药理活性，同时系统地考察了Vam3抗哮喘和抗COPD的活性及机制。研究结果包括以下几部分：

1．Vams药理活性初步研究 1．1 Vams抗哮喘作用 1．1．1 Vams抗卵白蛋白(ovalbumin，OVA)致豚鼠哮喘 Vams 200、120和80mg／kg口服给药，连续5天，延长了OVA致豚鼠哮喘的抽搐潜伏期，延长率分别为45.3％、47.2％和36.2％；给药组抽搐和死亡动物的发生率为0％、37.5％和50.0％，降低率分别为100％、52.3％和36.4％。阳性药齐留通200mg／kg口服给药，连续5天，抽搐潜伏期延长率为83.5％，抽搐和死亡动物发生率为33.3％，降低率为57.6％。对照组动物抽搐和死亡发生率为78.6％。本研究结果说明，Vams对抗OVA诱导的豚鼠哮喘效果较齐留通好。 查找更多 1．1．2 Vams抗组胺致豚鼠哮喘 Vams 100和50mg／kg口服给药，连续5天，对组胺致豚鼠哮喘的抽搐潜伏期延长率为484.4％和237.0％，抽搐和死亡动物发生率均为0％，降低率均为100％。孟鲁斯特4mg／kg口服给药，连续5天，抽搐潜伏期延长率为49.5％，抽
一、MEKK2参与T细胞受体信号中JNK激活和IL-2基因表达

JNK(c-Jun N-terminal kinases)是MAPK(mitogen-activated protein kinase)家族基因的成员，对细胞增殖、分化和凋亡十分重要。以前的研究发现T细胞JNK激活需要T细胞受体和辅助受体如CD28的共刺激。本研究探讨MEKK2是否是T细胞中特异的JNK上游活化激酶，是否涉及转导来自TCR／CD3的T细胞信号激活JNK MAPK级联和T细胞特异基因IL-2的表达。利用多组织poly(A)杂交模板，用1kb N-末端人MEKK2做探针行Northern杂交。Jurkat

T-细胞用电击法转染，COS-1细胞用Lipo-fectamine转染检测不同的基因表达或作用。抗JNK抗体免疫沉淀法，GST-cJun为作用底物体外检测JNK激酶活性；抗HA抗体、GST-JNKK2为作用底物体外检测MEKK2激酶活性。荧光酶报告基因检测IL-2和AP—1基因的表达。抗HA抗体12CA5、抗MEKK2抗体11281129、抗磷酸化抗体Pty20和ECL试剂盒进行蛋白印迹检测。 购买Palbociclib Northern杂交分析显示MEKK2在外周血细胞中有高水平表达。用AP-1报告基因在Jurkat细胞和COS-1细胞检测AP-1的转录活性，结果显示在T细胞MAPK级联中MEKK2位于JNK的上游。全长MEKK2 DNA的表达能导致JNK1强烈激活，而对Erk2没有作用。MEKK2也是JNK的强烈激活物，能激活JNK依赖的AP-1和IL-2报告基因表达。当用抗CD28抗体刺激时MEKK2介导的JNK活性无变化，而随着抗CD3抗体刺激，MEKK2介导的JNK活性显著增加。说明MEKK2参与抗CD3抗体激活JNK的信号通路。抗CD3抗体刺激后用抗磷酸化酪氨酸抗体分析MEKK2，发现CD3刺激能够迅速诱导MEKK2酪氨酸磷酸化。抗CD3和抗CD28抗体共刺激诱导的JNK激活能被无功能的MEKK2突变体抑制，而TPA(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)和Ca~(2+)激动剂A23187的JNK激活不能被抑制。 以上结果显示人MEKK2在TCR／CD3介导的JNK MAPK激活和IL-2基因表达中是一重要信号分子。
研究背景与目的:心房纤颤(房颤)是最常见的心律失常之一,目前对于房颤的治疗还缺乏十分有效的措施,其主要原因是对房颤发生、持续以及维持的病理生理机制还不完全清楚。近年来的研究发现心房电重构在房颤的发生、维持以及复发中起关键作用,而离子通道、特别是L-型钙通道和钾通道Kv4.

0软件进行统计分析,用χ2检验判断Nodal表达在各组表达的组间差异,P75%计4分；2)染色强度分为淡黄色,棕黄色,棕褐色三个等级,依次计分1-3分,阴性为成积积分为0者,只要成积积分≥1即可判断为阳性,其中阳性中：1-2分,3-4分,>4分,依次判定为弱阳性(+),阳性(++),及强阳性(+++)。对照为已知的子宫内膜癌强阳性切片,一抗体的阴性对照以PBS代替。 实验结果： 1、正常前列腺组织未见Nodal蛋白表达,表达率为0%(0/20)；良性前列腺增生组织中呈部分阳性表达,表达率为33%(10/30),表达部位位于增生活跃的上皮细胞,前列腺癌肿瘤组织均阳性表达,阳性表达病理染色表现为细胞胞浆内棕黄色的阳性染色颗粒,且其表达率达到100%,(40/40),随着病理分级及临床分期逐渐增加,胞浆内染色颗粒逐渐加强,直至棕褐色,说明Nodal蛋白强表达于分化程度低及临床分期晚的前列腺癌组织中。 2、Nodal蛋白的阳性表达在前列腺癌中随着病理分级的增高及临床分期的增加呈正相关性的改变：G3-4>G2>G1(P均T1-T2期(P均
在世界范围内,前列腺癌的发病率在所有男性恶性肿瘤中位居第二位,死亡率在男性恶性肿瘤中位居第六位。前列腺癌发病率有明显的地域和种族差异,发达国家发病率高于发展中国家。亚洲前列腺癌的发病率虽然远远低于欧美国家,但近年来呈上升趋势,且增长比欧美发达国家更为迅速。早在1941年,雄激素剥夺治疗(ADT)便作为前列腺癌的主要治疗方式,通过阻碍雄激素与雄激素受体结合从而达到治疗目的。但这种治疗方式存在一个问题：一部分经过ADT治疗的激素依赖性前列腺癌(ADPC)经过1-2年的标准治疗后转变为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。在此过程中,研究发现肿瘤细胞的化疗抵抗、转移、侵袭及复发能力增强,这可能与肿瘤干细胞(CSCs)增多和上皮-间质转化(EMT)的发生密切相关。然而有关此方面的证据仍较少。

Doxorubicin临床试验 Stem Cell Compound Library 第一部分ADT激活TGF-β1信号通路 目的：探讨ADT与TGF-β1信号通路的关系 方法： 1.研究人群分为三组：ADPC、ADT和CRPC组。 2.免疫组化检测上述三组中TGF-β1表达。 结果：三组结果比较,在CRPC组肿瘤标本中,TGF-β1表达增高。 结论：ADPC经ADT治疗后转变为CRPC的过程中激活了TGF-β1信号通路。 第二部分TGF-β1诱导EMT发生的同时增加了CD44的表达 目的：研究TGF-β1对EMT和CD44的作用 方法：体外培养激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP)和去势抵抗性前列腺癌细胞株(CWR22RV1),经TGF-β1(5ng/ml)分别刺激上述细胞后,应用蛋白免疫印迹法(Western

blot)分别检测0、3、6、9小时CD44、p-Smad2和Smad2的表达水平；应用Western blot分别检测0、12、24、36、48小时E-cadherin、 vimentin的表达水平。 GSK1210151A 结果： 1.TGF-β1增加了CD44的表达。 2.

TGF-β1对EMT的发生有促进作用。 结论：TGF-β1诱导EMT发生的同时增加了CD44的表达。 第三部分TGF-β1通过调节CD44诱导EMT 目的：TGF-β1诱导EMT机制的研究 方法： 1.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,将上述细胞分别分为四组。先将SB431542(TGF-β1受体抑制剂)加入第三、第四组,2小时后再向第二、第四组加入TGF-β1(5ng/ml),3小时后提取蛋白,应用Western blot检测四组中CD44、 p-Smad2和Smad2的表达水平。 2.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,将上述细胞分别分为三组：对照组、实验组1、实验组2。向对照组转入sicontrol质粒,向实验组1转入siCD44质粒处理24小时,向实验组2转入siCD44质粒处理48小时,分别提取蛋白,应用Western blot检测三组中CD44表达水平。 3.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,将上述细胞分别分为四组。先将sicontrol质粒转入第一、第二组,将siCD44质粒转入第三、第四组,48小时后向第二、第四组加入TGF-β1(5ng/ml),24小时后分别提取蛋白,应用Western blot分别检测CD44、E-cadherin和Vimentin表达水平。 结果： 1.在LNCaP和CWR22RV1细胞中,单加TGF-β1组与对照组比较CD44表达水平明显增高；单加SB431542组和SB431542、TGF-β1两者都加组分别与对照组比较,CD44表达水平无明显改变。 2.在LNCaP和CWR22RV1细胞中,转染质粒后CD44表达水平由高到低依次为转入sicontrol质粒组、转入siCD44质粒处理24小时组、转入siCD44质粒处理48小时组。 3.在LNCaP和CWR22RV1细胞中,单加TGF-β1组与对照组比较,CD44和Vimentin表达水平增高,E-cadherin表达水平降低；转入siCD44质粒组和转入siCD44质粒、TGF-β1两者都加组分别与对照组比较,CD44、Vimentin表达水平降低、E-cadherin表达水平增高。 结论：TGF-β1通过上调CD44表达水平诱导EMT的发生。 第四部分前列腺癌鼠模型建立和体内靶向抑制CD44阻碍前列腺癌转移 目的：建立前列腺癌鼠模型并体内研究靶向抑制CD44与前列腺癌转移的关系。 方法： 1.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,用盐霉素(salinomycin)分别处理0、24、48小时后分别提取蛋白,应用Western blot检测CD44表达水平。 2.建立前列腺癌鼠模型,随机分为实验组(腹腔注射盐霉素)和对照组(腹腔注射玉米油)。取原位瘤及转移灶,比较两组间转移情况。 3.免疫组化检测上述两组CD44、E-cadherin和Vimentin表达水平。 结果： 1.盐霉素抑制CD44表达。 2.实验组转移灶数量明显少于对照组。 3.

17，与LIP+BI组相比，HG明显升高（P＜0.01），ND值明显降低（P＜0.01）。上述结果表明，肢体缺血预处理明显减轻了大鼠全脑缺血再灌注引起的海马CA1区迟发性神经元死亡、发挥了脑保护作用，而分别或联合切断双侧股神经和坐骨神经均可以部分阻断LIP的上述脑保护作用，提示神经途径参与了LIP诱导的脑缺血耐受。

TUNEL染色结果显示，脑缺血的sham组海马CA1区偶有棕黄色深染的TUNEL阳性细胞，神经元体积变小，核固缩，呈圆点状或扇形，染色质呈新月形或条形聚集于核周。脑缺血组海马CA1区可见大量的TUNEL阳性细胞，与sham组相比细胞数目明显增加（P＜0.01），提示8min的全脑缺血对大鼠海马CA1区锥体细胞的打击是致命的，引起大量的神经元细胞凋亡。LIP+BI组TUNEL阳性神经元数与脑缺血组相比明显减少（P＜0.01），说明LIP明显抑制全脑缺血引起的海马CA1区锥体细胞凋亡，诱导了脑缺血耐受。与LIP+BI组相比，FNS+LIP+BI组、SNS+LIP+BI组和FNS+SNS+LIP+BI组，海马CA1区TUNEL阳性细胞数明显增加，表明分别或联合切断双侧股神经和坐骨神经可拮抗LIP抑制凋亡的作用。 AZD2281供应商 2股神经和或坐骨神经在肢体缺血预处理上调海马CA1区p38MAPK表达中的作用 90只Wistar大鼠永久凝闭双侧椎动脉恢复两天后，随机分为以下9组：①全脑缺血的sham组（n=10）：只暴露双侧颈总动脉，不阻断血流；②全脑缺血组（brain ischemia, BI）（n=10）：夹闭双侧颈总动脉8min后恢复再灌注；③LIP+BI组（n=10）：夹闭双侧股动脉10min、再灌注10min、反复3次作为肢体缺血预处理后，即刻夹闭双侧颈总动脉8min作为损伤性缺血，然后恢复再灌注；④股神经切断（femoral nerve resection, FNS）+全脑缺血组（n=10）：切断双侧股神经，即刻给予8min全脑缺血；⑤股神经切断+LIP+全脑缺血（FNS+LIP+BI）组（n=10）：LIP前切断双侧股神经，即刻给予8min全脑缺血。⑥坐骨神经切断（sciatic nerve resection,SNS）+全脑缺血组（n=10）：切断双侧坐骨神经，即刻给予8min全脑缺血；⑦坐骨神经切断+LIP+全脑缺血（SNS+LIP+BI）组（n=10）：LIP前切断双侧坐骨神经，即刻给予8min全脑缺血；⑧股神经切断+坐骨神经切断+全脑缺血（FNS+SNS+BI）组（n=10）：切断双侧股神经及双侧坐骨神经，即刻给予8min全脑缺血；⑨股神经切断+坐骨神经切断+LIP+全脑缺血（FNS+SNS+LIP+BI）组（n=10）：LIP前切断双侧股神经及双侧坐骨神经，即刻给予8min全脑缺血。以上各组大鼠在sham手术或末次缺血再灌注12h断头取脑，各组分别取5只用于免疫组织化学、5只用于Western

更多 blotting，检测大鼠海马CA1区p-p38MAPK的表达。 免疫组化结果显示，全脑缺血的sham组和全脑缺血组海马CA1区p-p38MAPK阳性表达较少，阳性细胞胞核着色，呈棕黄色，染色浅，积分光密度分别为3.37±0.12、3.30±0.03，阳性细胞总面积分别为6056.23±522.3、6106.62±458.43（μm2,下同）。LIP+BI组海马CA1区神经元p-p38MAPK的表达明显增多，胞核着色加深，呈深棕黄色，其积分光密度和阳性细胞总面积分别为11.90±0.27和12036.60±693.91，与BI组相比有显著的统计学意义（P<0.01），表明LIP能够上调脑缺血大鼠海马CA1区p-p38MAPK的表达。与LIP+BI组相比，FNS+LIP+BI组海马CA1区神经元中p-p38MAPK的表达量较少，胞核染色较浅，有显著统计学差异（P<0.01），其积分光密度和阳性细胞总面积分别为4.63±0.07和6561.17±301.5。SNS+LIP+BI组海马CA1区神经元中p-p38MAPK的表达量降低，与LIP+BI组相比，阳性细胞积分光密度（5.07±0.13）和阳性细胞总面积（6835.91±401.47）均有明显统计学差异（P<0.01）。FNS+SNS+LIP+BI组海马CA1区神经元中p-p38MAPK的表达量少，胞核着色浅，阳性细胞积分光密度和总面积分别为3.15±0.22和6361.81±210.41，与LIP+BI组相比有明显统计学差异（P<0.01）。FNS+LIP+BI组、SNS+LIP+BI组和FNS+SNS+LIP+BI组中p-p38MAPK的表达量较少，与LIP+BI组相比有统计学差异（P
目的： Fasudil核磁共振 探讨硫酸镁对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）细胞经60Co γ射线照射后细胞增殖、周期、凋亡的影响，并分析其可能的机制。同时观察硫酸镁对胶质瘤U251细胞照射后细胞周期、凋亡的影响。研究结果为硫酸镁的临床应用提供实验依据和支撑。 方法： 1、取对数生长期的HUVEC细胞，采用CCK-8法检测硫酸镁对细胞存活率及增殖的影响，筛选合适浓度的硫酸镁。用流式细胞仪检测细胞周期分布和AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡情况。 2、用NO试剂盒和SOD试剂盒分别测定NO含量和SOD活性，硫代巴比妥酸法（thiobarbituric acid,TBA）测定丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量变化。 3、Real-Time PCR方法检测ICAM-1mRNA、NF-κB mRNA表达。 4、不同浓度的硫酸镁预处理对数生长期的脑胶质瘤U251细胞，经γ射线照射后不同时间点收集细胞，采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率的变化。 5、数据分析采用SAS8.