7细胞产生的TNF-α,低于这个剂量则对相应LPS刺激产生的TNF-α无明显抑制作用。 2.在无LPS刺激的情况下,低氧(0.5%O_2)或者氯化钴模拟低氧刺激仅使TNF-α的基线值大约升高2倍(p＜0.05,n=3)。与正常氧浓度下相比,LPS在低氧浓度状态下刺激TNF-α产生仅有微小的增加(无统计学意义),并且氯化钴具有很好的模拟低氧的效果。SB203580(10μM)不但可以在正常氧浓度下完全抑制LPS诱导的TNF-α产生(p＜0.05,n=3),而且可以抑制单独由低氧诱导的TNF-α产生。但是在低氧或者氯化钴模拟低氧状态下观察不到SB203580对LPS诱导的TNF-α蛋白表达的明显抑制作用。

点击此处 3.SB203580能降低TNF-α在正常氧浓度状态下的转录水平(p＜0.05,n=3)。低氧和氯化钴刺激能提高LPS诱导的TNF-αmRNA表达,从而对抗SB203580的抑制作用。 4.低氧状态下LPS刺激TNF-α产生增多和达到峰值水平的时间比正常氧浓度状态下均提早约2 h。SB203580在正常氧浓度状态下可以抑制TNF-α的产生一直维持在基线水平;SB203580在低氧浓度下抑制TNF-α产生的动态曲线与正常氧浓度下LPS单独刺激的诱生曲线平行。 5.Western blot结果显示,在正常氧浓度下,磷酸化有活性的p38 MAPK(p-p38)可在加入LPS后10min检测到,30 min达到峰值状态,60 min有所减弱。在氯化钴模拟低氧状态下可观察到p-p38类似的表达模式。但在不同氧状态下SB203580并没有影响p38和p-p38的表达量。 在正常氧浓度状态下,磷酸化的MAPKAPK2(p-MK2)在接受LPS刺激10min可检测到,30 min检测到p-MK2最大量的表达,60 min表达衰减。低氧状态下p-MK2在30和60 min时间点的表达量比正常氧浓度状态下明显增加,而SB203580对此表达模式没有明显影响。 6.Real-time PCR比较显示低氧可以提高TNF-αmRNA的稳定性。分析TNF-αmRNA在30 min时间点的相对表达量,SB203580在正常氧浓度下并不影响TNF-αmRNA的稳定性(p＞0.05,n=3),在低氧状态下可以一定程度的降低其稳定性(p＜0.05,n=3)。 7.低氧刺激对小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的基线水平没有明显影响(p＞0.05,n=3)。LPS在正常氧浓度状态下以剂量依赖方式刺激腹腔巨噬细胞产生TNF-α,在低氧状态下不同剂量LPS的刺激效果没有明显区别(p＞0.05,n=3)。小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α受低氧和SB203580影响的的模式与RAW264.7相似,低氧可使SB203580的抑制能力大约降低50%。

8.小鼠在正常氧浓度环境下接受不同剂量LPS

90 min后,血清TNF-α水平与正常对照组小鼠比较均有明显升高(p＜0.05,n=3)。 在正常氧浓度和低氧环境下(10%O_2),15 没有 mg/kg和25 mg/kg剂量的SB203580均不能降低0.5 mg/kg LPS诱导的内毒素血症小鼠血清TNF-α水平(p＞0.05,n=3)。 小鼠在注射LPS 0.5mg/kg后240 min与90 min急性期比较,血清TNF-α水平有所下降(p＜0.05,n=3),24 h基本降至正常水平。 9.小鼠接受LPS注射90 min肺组织中已经可检测到HIF-1αmRNA。Real-timePCR比较发现HIF-1αmRNA的表达水平在SB203580治疗组和对照组之间没有明显差别(p=0.34)。同时Western blot和免疫组化染色均可检测到HIF-1α蛋白的表达。免疫组化染色显示LPS注射90 min后HIF-1α蛋白主要位于在肺间质组织中。LPS注射240 min后,免疫染色阳性的细胞数目减少。与Western blot检测结果一致,SB203580并没有影响HIF-1α蛋白的表达量。 研究结论 1.低氧可以增强p38 MAPK的活性。p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580在正常氧浓度下可以完全抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7中TNF-α表达,但在低氧(0.5%O_2或氯化钴模拟低氧)状态下却失去了这种抑制能力。 Alisertib制造商 2.低氧影响小鼠腹腔巨噬细胞对LPS反应和SB203580的抑制效果的模式与RAW264.7细胞相似。 3.低氧可以增强TNF-α的转录活动及mRNA的稳定性。SB203580在正常氧浓度下可以抑制TNF-α的转录,但并不能影响mRNA的稳定性。 4.低氧并不影响p38 MAPK和p-p38 MAPK的表达量,而是通过增强p38的活性,增加下游底物p-MK2的表达,从而增加TNF-α的合成。 5.HIF-1α在内毒素血症模型小鼠肺组织中表达,并且其表达水平不受SB203580的影响。SB203580不能有效降低伴随低氧状态的内毒素血症小鼠血清TNF-α水平。 6.低氧可能通过HIF-1α介导TNF-α的生物合成,并且调节通路不受p38抑制剂的影响,可能与p38通路起到协同作用。 创新及意义 1.本研究阐述了低氧在脓毒症TNF-α生物合成中起重要作用,低氧可提高p38 MAPK的活性,解释了p38抑制剂SB203580在脓毒症及脓毒性休克中具有争议性的体内应用效果。 2.本研究提示HIF-1α可能参与调节TNF-α的生物合成,低氧通过HIF-1α的信号传导可能独立于p38信号通路,并且两条通路有协同作用。我们的发现为理解低氧在脓毒症和脓毒症休克病理过程中的作用提供了新视角。 3.

G12D c.35G>A，1例13号密码子GGC>GAC突变，p.G13Dc.38G>A，12号密码子突变率占总突变的80%。而LNA-PCR-Sanger法测序，检测的30例胸水样中KRAS突变为6例，突变率为20%(6/30)，其中12号密码子突变4例，3例为GGT>GAT突变，p.G12D c.35G>A，1例为GGT>TGT突变，p.G12C c.34G>T，另2例为第14号密码子GTA>ATA，12号密码子突变占总突变的66.67%。LNA-PCR-Sanger法测序检测出KRAS突变的阳性高于焦磷酸法，但P=0.093，无统计学意义。同时进行焦磷酸测序和LNA-PCR-Sanger检测的样本共30例，焦磷酸测序检出KRAS突变为3例，全部为12号密码子突变，GGT>GAT突变，p.G12D c.35G>A，突变率10.00%(3/33)，与LNA-PCR-Sanger检测法结果比较，P=0.470，也无统计学意义。 3.肿瘤组织的EGFR/KARS基因突变检测及与胸腔积液检测结果的比较 利用焦磷酸测序对64例NSCLC组织样本进行检测，EGFR基因突变率为34.38%(22/64)，与胸腔积液EGFR突变检检出率30.16%(19/63)比较，无统计学意义(P=0.705)。

其中配对的组织和胸腔积液样本24例EGFR突变率分别为37.50%(9/24)和33.33%(8/24)，P=0.500，无统计学意义。 利用焦磷酸测序对64例组织样本进行检测，KRAS基因突变率为4.69%(3/64)，12号密码子突变2例，占66.7%，13号密码子突变1例，占33.3%。与胸腔积液KRAS突变检检出率(7.93%，5/63)比较，无统计学意义(P=0.350)。 时间 其中配对的组织和胸腔积液样本24例KRAS突变率分别为12.5%(3/24)和8.33%(2/24)，P=0.500，无统计学意义。 4. EGFR基因检测与临床相关指标分析 组织样本和胸水标本EGFR基因突变与吸烟史(组织P=0.013，胸水P=0.014)、病理组织学类型(组织P=0.022，胸水P=0,020)相关，非吸烟者、肺腺癌患者更易发生EGFR基因突变。用RECIST标准，对接受TKI靶向治疗的18例患者进行了疗效评价，其中EGFR敏感性突变(19外显子缺失突变和21外显子L858R)共5例，TKI治疗后无CR，PR5例，缓解率RR(CR+PR)为100%；EGFR野生型共13例，TKI治疗后无CR，PR为5例，SD3例，PD5例，缓解率RR(CR+PR)为38.5%。与EGFR野生型患者相比，EGFR敏感性突变患者对TKI临床疗效更加敏感，二者有显著的统计学差异(P=0.029)。

Rigosertib购买 5. KRAS基因检测与临床相关指标分析 组织样本和胸水标本KRAS基因突变与患者的性别、年龄、病例组织学类型、吸烟史等临床病理特征均无明显统计学差异(P>0.05)。用RECIST标准，对接受TKI靶向治疗的18例患者进行了疗效评价，其中KRAS基因突变共1例，达到PR，缓解率RR(CR+PR)为100%；KRAS野生型患者共17例，TKI治疗后无CR，达到PR为9例，SD3例，PD5例，缓解率RR(CR+PR)为56.25%。KRAS基因突变与TKI疗效无明显关系(P=0.556)。该结果与KRAS突变为TKI原发性耐药的西方文献报道有所不同，表明KRAS突变与否与TKI临床疗效相关性可能存在地区差异，需要更大样本的进一步证实。

而且 结论 1.在无法获取组织标本的情况下，胸腔积液可成为NSCLC患者的EGFR/KRAS检测良好的替代。 2.焦磷酸测序可作为EGFR基因突变的检测方法；LNA-PCR-Sanger测序和焦磷酸测序法均可作为胸腔积液的KRAS突变检测，前者更为敏感。 3.与EGFR野生型相比，EGFR基因19、21外显子突变对TKI治疗更敏感。 4. LNA-PCR-Sanger法检测出KRAS突变阳性率高于文献报道，KRAS突变与否与TKI临床疗效无明显关系，与文献报道的KRAS突变为耐药性突变的研究结果有所不同，显示KRAS突变率及与TKI临床疗效相关性可能存在地区差异，需要更大样本的研究。
目的对全反式维甲酸(ATRA)耐药基因HA117在肺癌组织中的表达进行分析,并结合其临床病例资料探讨HA117介导的耐药功能。 材料与方法 一、一般材料 28例非小细胞肺癌组织蜡块来自山东大学齐鲁医院2008-2010年间手术切除的肺癌组织,病史回顾无其他恶性肿瘤史。所有标本均经病理确诊。所有标本均经10%福尔马林液固定,石蜡包埋,行4p连续切片,备用。 二、主要试剂和来源 Ambion RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation kit试剂盒OIAGEN公司,M-MLV反转录酶试剂盒购自PROMEGA公司,2×SYBR Premix DimerEvaser试剂盒、Dnase I(Rnase Free)、PCR扩增引物、DL2000DNA Marker分别购自TAKARA公司、Promega公司、ToYoBo公司和Invitrogen公司。 三、方法 应用QRT-PCR技术检测28例肺癌蜡块组织、7例癌旁组织中HAll7基因表达水平,探讨HA117基因在肺癌组织中表达特点。 四、统计学分析 所有数据均采用统计软件SPSS17.0进行处理,非小细胞肺癌与癌旁组织HA117mRNA表达量的比较以及临床病理因素两组间比较采用X2检验和Fisher精确检验,生存分析采用Kaplan-Meier方法,检验水准P取0.05,P60岁)患者组较≤60岁患者高,两组比较有显著统计学差异(P=0.037),腺癌患者高于鳞癌,有统计学差异(P=0.022)；HA117mRNA表达在患者性别、分化程度、淋巴结是否转移以及病理分期等因素方面的比较无统计学差异,以上均采用X2检验或Fisher精确检验。HA117mRNA高表达组与低表达组与肿瘤的复发(p=0.372)、预后(p=0.605)无统计学差异(Log-Rank test). 六、结论 1.HA117mRNA在非小细胞肺癌组织中的表达高于癌旁组织,有统计学差异(p60岁)及肺腺癌患者中高表达。 3.HA117mRNA表达水平的高低与患者病情的复发、患者死亡无明显相关性。 4.

48±0.15)和(0.09±0.01)μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11)μmol/L。0.5μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,Annexin V/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24

h细胞凋亡率为(4.18±0.70)%,48 h细胞凋亡率为(22.53±4.67)%,均高于对照组的(1.35±0.34)%(P
真核延伸因子2激酶(e EF2K)是一种Ca2+/Ca M依赖性蛋白激酶,e EF2是其已知的唯一底物。e EF2K催化e EF2的Thr56位点发生磷酸化,导致降低e EF2与核糖体的结合能力进而抑制肽链延伸。现已发现,e EF2K在多种肿瘤细胞中高表达或高度活化,参与肿瘤进程的调控,因此e EF2K可能是一个潜在的肿瘤治疗靶点。本文就e EF2K的结构、功能、与肿瘤的关系及其抑制剂的研究进展进行综述。
The phosphatidylinositol 3 kinase(PI3K)/AKT pathway is genetically targeted in more pathway PD0325901核磁共振 components and in more tumor types than any other growth factor signaling pathway,and thus is frequently activated as a cancer driver.More importantly,the PI3K/AKT pathway is composed of multiple bifurcating and converging kinase cascades,providing

many potential targets for cancer therapy.Renal cell carcinoma(RCC) is a high-risk and high-mortality cancer that is notoriously resistant to traditional chemotherapies or radiotherapies.The PI3K/AKT pathway is modestly mutated but highly activated in RCC,representing a promising drug target.Indeed,PI3 K pathway inhibitors of the rapalog family are approved for use in RCC.Recent large-scale integrated analyses of a large number of patients have provided a molecular basis for RCC,reiterating 有 the critical role of the PI3K/AKT pathway in this cancer.In this review,we summarize the genetic alterations of the PI3K/AKT pathway in RCC as indicated in the latest large-scale genome sequencing data,as well as treatments for RCC that target the aberrant activated PI3K/AKT pathway.
骨肉瘤(Osteosarcoma)也称成骨肉瘤,是常见的骨原发性恶性肿瘤,具有恶性程度高、侵袭性强、易复发转移等特点[1]。随着新辅助化疗、手术、术后化疗的开展,骨肉瘤5年生存率提高到近80%,但仍有半数以上的患者死于骨肉瘤的转移和复发[2]。有效控制骨肉瘤细胞的转移对延长患者生存期有着深远意义。PI3K/AKT细胞信号转导通路在肿瘤的发生、增殖、迁移、耐药等生物过程中发挥着重要作用。
De

一般 novo neoplasms account for almost 30% of deaths 10 years after liver transplantation and are the most common cause of mortality in patients surviving at least 1 year after transplant. The risk of malignancy is two to four times higher in transplant recipients than in an age- and sex-matched population, and cancer is expected to surpass cardiovascular complications as the primary cause of death in transplanted patients within the next 2 decades. Since exposure to immunosuppression is associated with an increased frequency of developing neoplasm, long-term immunosuppression should be therefore minimized. Promising results in the prevention of hepatocellular carcinoma(HCC) recurrence have been reported with the use of m TOR inhibitors including everolimus and sirolimus and the ongoing open-label prospective randomized controlled SILVER. Study will provide more information on whether sirolimus-containing vs m TOR-inhibitorfree immunosuppression is more efficacious in reducing HCC recurrence.

67%(47／75),胞膜为2.67%(2／75)；癌组织中,胞浆的表达为80.00%(60／75),胞膜为45.33%(34／75)(见图1B)。两种组织胞浆内的表达有差异(x2=5.51,p=0.02),胞膜上的表达有显著性的差异(x2=37.43,p=0.00)。(2)DEC1主要在细胞浆和细胞核上表达,极少在细胞膜上表达。癌旁组织中,胞浆内的表达为100.00%(75／75),胞核为2.67%(2／75)；癌组织中,胞浆内的表达为98.67%(74／／75),胞核上的表达为54.67%(41／75)。胞浆内的表达在两种组织上无差异(x2=1.01,p=0.50),但胞核的表达有显著性的差异(x2=40.64,p=0.00)。(3)DEC2信号主要定位于细胞的胞浆,少量定位于细胞核,细胞膜上无表达；胞浆DEC2在癌组织和癌旁组织的表达均为98.67%(74／75),两种组织无差异(x2=0.00,p=0.75)；胞核DEC2在癌组织中的阳性表达率为20.00%(15／75)显著高于癌旁组织的1.33%(1／75),两者相比较,差异显著(x2=13.71,p=0.00)。4)HIFl

a阳性信号主要定位于细胞的胞浆,少量定位于细胞核。癌组织中HIFl a的阳性表达率为66.67%(50／75),显著高于癌旁组织的10.67%(8／75),两种组织差异有统计学意义(x2=48.88,p=0.00)。(5)STAT3蛋白阳性信号主要分布在细胞浆和细胞核,细胞膜上无表达。癌旁组织中STAT3浆表达的阳性表达率为9.33%(7／75),显著低于癌组织65.33%(49／75),两种组织差异显著(x2=29.64,p=0.00)；癌旁组织无STAT3核表达,癌组织的核表达率为22.67%(17／75),两者差异显著(x2=19.17,p=0.00。(6)VEGF蛋白阳性信号只在细胞浆中表达,细胞膜和细胞核中均无阳性表达；癌组织的阳性表达率为86.67%(65／75),显著高于癌旁组织的16.00%(12／75)。两种组织差异显著(x2=75.00,p=0.00)。(7)除组织的病理分化(x2=6.81,p=0.03)、淋巴结转移(x2=7.44,p=0.01)和远处转移(x2=4.44,p=0.04)外,EGFR膜表达与性别、年龄、肿瘤大小和TNM分期无关。(8)除年龄(x2=4.72,p=0.03)和肿瘤大小(x2==3.71,p=0.047)外,DECl核表达与性别、组织的病理分化和TNM分期无关。(9)DEC2的核表达与性别、年龄、组织的病理分化程度、肿瘤大小和TNM分期均无统计学关联,但DEC2表达阳性的患者中,肿瘤大于3cm的例数明显少于阴性表达组(8例、vs.46例,x2=3.24,p=0.07)。(10)HIFl

点击此处 selleck合成 a的表达与患者的远处转移(x2=5.25,p=0.04)密切关联,与性别、年龄、组织的病理分化程度、肿瘤大小、TNM分期和淋巴节转移无统计学关联。(11)STAT3的核表达与肿瘤大小(x2=14.69,p=0.00)和TNM分期(x2=7.07,p=0.03)有关联,与性别、年龄和病理分化程度、淋巴结转移和远处转移均无关。STAT3在细胞浆中的表达同上述临床特征无统计学关联。(12)VEGF的表达与患者的性别(x2=5.60,p=0.02)、远处转移(x2=10.10,p=0.02)有统计学关联,与年龄和病理分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移均无关。但与组织分化程度的比较处于统计学的边缘值(x2=5.72,p=0.06)。2、EGFR、DEC1、DEC2、HIF-1α、STAT3和VEGF相互之间的关联性(1)在发生淋巴结转移的病人中,EGFR-/DEC1+的阳性表达率为33.00%(7／21),EGFR-／DECl-为45.00%(9／14),EGFR+/DEC1-为57.00%(12／21),EGFR+/DEC1+为80.00%(16／20)；EGFR+／DECl+与EGFR-/DEC1-表达模式比较,有统计学差异(x2=5.23,p=0.02)(见表2)；EGFR+/DEC1+与EGFR+/DEC1表达模式比较,无显著性差异(x2=2.07,p=0.14)；EGFR+/DEC1+与EGFR-/DEC1+表达模式比较,有统计学差异(x2=9.06,p=0.03)。(2)在癌组织中,DECl核表达同DEC2的表达有显著相关性(x2=6.97,p=0.01)。在DEC2阳性表达的16例中,DECl阴阳性表达分别有2例和14例；在DEC2阴性表达的59例中,DECl阴阳性表达分别有29例和30例。(3)对肺腺癌患者肿瘤大小的分析中,DECl+／DEC2-与DEC1+/DEC2+表达模式比较,阳性率无统计学差异(x2=2.31,p=0.12)；DEC1-/DEC2+与DEC1+/DEC2+表达模式比较,无统计学差异(z。=1.78,p=0.30)；DEC1-/DEC2-与DEC1+/DEC2+表达模式比较,肿瘤大于3cm的例数明显增加,分别为24例和7例,有统计学差异(x2=5.04,p=0.03)。(4)在对TNM分期的分析中发现,DEC1-/DEC2与DEC1+/DEC1+两种表达模式比较,有统计学差异(x2=6.48,p=0.04)。(5)EGFR膜表达同HIFl

PLX3397 a的表达(x2=4.55,p=0.03)有统计学关联；同VEGF表达处于统计学的边缘值(x2=2.99,p=0.08)；(6)HIFl a同EGFR膜表达(x2=4.55,p=0.03)、DEC1核表达(x2=6.09,p=0.01)、STAT3浆表达(x。=10.63,p=0.001)、STAT3核表达(x2=7.45,p=0.004)存在统计学相关性；同VEGF表达的相关性分析处于统计学的边缘值(x2=3.69,p=0.06)；HIFla同DEC2核表达无统计学相关性(x2=2.42,p=0.11)。(7)STAT3在细胞核上的表达和细胞浆内的表达有显著性差异(x2=11.66,p=0.00)；STAT3的核表达同DECl(x2=12.96,p=0.00)、DEC2(x2=10.06,p=0.004)和HIFl a表达(x2=7.45,p=0.004)有统计学相关性；STAT3的浆表达同DECl核表达(x2=4.97,p=0.02)及HIFl a表达(x2=,10.63,p=0.

12×109fu.L-1。重组慢病毒质粒pNL-HSP27-IRES2-EGFP-1的RNA干扰效率最高,为0.771。结论成功构建靶向大鼠HSP27基因RNAi慢病毒载体。为进一步研究HSP27功能和用慢病毒进行基因治疗奠定基础。
JNK作为丝裂原激活蛋白激酶家族成员,能使某些蛋白结构中丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化,使其活化或改变其原有活性而产生异常效应。目前认为,JNK参与肥胖、胰岛素抵抗和炎症等代谢过程,阻断JNK通路可改善胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗,诱导活化JNK通路可导致2型糖尿病(T2DM)的发生发展,本文总结近年关于JNK的研究状况,旨在说明其已经成为糖尿病研究方面一个新的关注点,阻断JNK信号转导通路可能成为糖尿病新的治疗途径。
帕金森病是常见的神经系统退行性疾病之一,帕金森病的发病与细胞凋亡有关,而p38丝裂原激活蛋白激酶信号传导途径参与了细胞凋亡的调控。本文主要对p38与帕金森病之间的关系予以综述。
基因敲除技术,是利用同源重组的基因打靶技术,将打靶构建物与野生型的等位基因同源重组并交叉互换,经筛选得到所需的某一目的基因缺失的DNA片段,并创建出表达特异性状的动物模型。由于干细胞培养和稳定转染技术的发展,使基因敲除在JNK-2的基因功能、酶学功能研究中的作用日益受到重视。本文就该技术及其在JNK-2研究中的应用、进展及存在的问题做一综述。
蓖麻毒素属于Ⅱ型核糖体失活蛋白,由具有催化活性的A链和凝集活性的B链组成,二者之间经二硫键连接。本研究旨在探讨蓖麻毒素在诱导小鼠淋巴细胞凋亡过程中信号转导通路的激活反应。通过MTS法检测蓖麻毒素的细胞毒性后,用流式细胞术分析胞内活性氧(ROS)水平,进而通过westernblot研究信号分子的表达。结果表明:在蓖麻毒素诱导小鼠淋巴细胞凋亡的过程中,胞内活性氧水平显著增高(P
目的:观察细胞外信号调节激酶(ERK)在肝纤维化组织中的表达变化及其与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的相关性,并探讨其在肝纤维化发生中的作用.方法:二甲基亚硝胺(DMN)诱导大鼠肝纤维化,于用药1、2、3wk分别取肝组织;收集临床肝手术标本,包括纤维化肝组织和远癌的纤维化肝组织,以正常肝组织做对照.采用免疫组化法检测ERK在肝纤维化组织中表达和定位及其与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的相关性.结果:随着大鼠注射DMN时间的延长,ERK、Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达逐渐增加,且在各时间组肝组织中ERK的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达呈正相关(1wk:r=0.75,0.68,P<0.05).同样,ERK在人肝纤维化组较对照组表达增加(1.068±0.258vs0.035±0.011,P<0.05).结论:ERK可能与肝纤维化的发生机制及胶原合成密切相关.
Nrf2是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子。Keap1是Nrf2的胞浆蛋白伴侣分子。Nrf2-Keap1组成的抗氧化系统在细胞抗氧化应激反应中发挥重要的作用。氧化/抗氧化失衡是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的主要发病机制之一。研究Nrf2-Keap1抗氧化系统在COPD中的作用日益受到重视。本文对Nrf2-Keap1抗氧化系统的组成与信号调控,及其在COPD中的作用进行了综述,提示其在治疗和预防COPD中可能发挥作用。
目的动态观察糖尿病(DM)大鼠肾小管骨形态发生蛋白-7(BMP-7)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在糖尿病肾病(DN)发病机制中的相互关系。方法将SD大鼠分为正常对照组(N组)、糖尿病组(DM组)和糖尿病胰岛素治疗组(DMT组),分别于成模后2、4、8、12、16和24周测定生化指标和肾脏指数,PAS染色观察肾脏病理形态改变,免疫组织化学检测BMP-7、p-p38MAPK、α-SMA和FN蛋白的表达;RT-PCR方法检测肾皮质BMP-7mRNA的表达。结果随DM病程延长,BMP-7蛋白和mRNA的表达较N组低,至24周时BMP-7蛋白仍有少量表达但mRNA无表达,DMT组表达显著增多;p-p38MAPK蛋白于N组无表达,DM组显著增多,8周时达高峰,DMT组则显著减少;α-SMA开始表达于DM16周组,而DMT组无表达。24周DM组和DMT组BMP-7蛋白表达与24h尿蛋白、肾脏指数、α-SMA、FN和p-p38MAPK呈显著负相关。结论BMP-7与p38MAPK之间可能相互调节,共同参与糖尿病肾病的发生发展过程。
青蒿素类衍生物包括二氢青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚和青蒿琥酯等,它们具有诸多治疗呼吸系统疾病的药理活性,包括治疗卡氏肺孢子虫肺炎、支气管哮喘、对肺组织损伤的保护作用。青蒿素类药物在治疗肺动脉高压以及肺纤维化方面具有潜在的药用价值。本文就近年来对青蒿素类药物治疗肺部疾病的研究现状及展望予以综述。
目的探讨中药方剂益肾活血汤通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导途径对肾小球系膜细胞纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(COLⅣ)表达的影响。方法采用血清药理学方法制备中药血清,体外培养肾小球系膜细胞分组为:对照组(正常鼠血清)I、L-1β组(正常鼠血清+10%IL-1β)、中药血清组(中药血清+10%IL-1β)。采用双抗体夹心ELISA法检测大鼠系膜细胞FN、COLⅣ表达,蛋白印记法(Western

此网站 NSC683864制造商 5FU blot)检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)及α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)水平。结果与IL-1β组相比,中药血清组FN、p-p38MAPK蛋白的表达量降低(P<0.01)。-αSMA、COLⅣ的表达亦降低(P<0.05)。结论中药益肾活血汤可降低肾小球系膜细胞-αSMA的表达,从而抑制肾小球系膜细胞的表型转化,减少细胞外基质FN、COLⅣ的表达,该作用可能是通过抑制p-p38MAPK信号通路而实现的。
肝纤维化是慢性肝损伤后的修复反应过程,肝硬化是肝纤维化的最终发展阶段。目前研究表明,肝纤维化发生的中心环节是肝星状细胞(HSCs)的增生和激活。激活后的HSCs产生大量以胶原为主的细胞外基质(ECM)成分和细胞因子(CK)。本综
目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路对胰岛βTc3细胞脂性凋亡的影响及吡格列酮(PGZ)的干预作用.方法:采用游离脂肪酸(FFA)诱导小鼠βTc3细胞凋亡;以MTT法观察FFA对细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学和Western Blot法检测在FFA、特异性JNK抑制剂SP600125及PGZ作用下磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化c-jun(p-c-jun)的表达.

5、15、30、60、120 mg/L)能浓度依赖性地抑制HSCs增殖及I型α1前胶原(procollagen, type I, alpha1,Col Iα1)、III型α1前胶原(procollagen, type III, alpha1,Col IIIα1)、Col I和Col III的转录、合成和分泌。 4. PAE在转录和合成水平抑制HSCs中Smad3的表达 RT-PCR和Western blotting显示PAE对TGFβ1-Smads信号转导通路中的Smad2、Smad4和Smad7无明显作用,而对Smad3具有浓度依赖型性的抑制。提示,抑制Smad3转录和合成可能是PAE抗血吸虫病肝纤维化的机制之一。 结论: 1. TGFβ1可促进小鼠日本血吸虫病肝纤维化; 2.早期给予PAE可预防小鼠日本血吸虫病肝肉芽肿、肝纤维化的形成和TGFβ1表达; 3. SEA可刺激PMs分泌TGFβ1,后者可促进HSCs增殖和胶原分泌; 4. PAE预防血吸虫病肝纤维化可能与下述机制有关 a)抑制PMs分泌TGFβ1 b)抑制HSCs的增殖 c)通过抑制Smad3 mRNA的表达抑制HSCs产生胶原 RAD001分子量 总之,在血吸虫病肝纤维化中,SEA能刺激巨噬细胞产生TGFβ1,后者可使HSCs增殖和分泌胶原。PAE通过抑制巨噬细胞分泌TGFβ1、HSCs的增殖、Smad3的转录和合成而最终抑制胶原的产生,发挥其抗纤维化的作用。以上研究结果将为PAE开发成治疗血吸虫病肝纤维化中药新药提供了实验依据。
TGFβ家族的信号转导由TGFβ受体ALK4或ALK7介导,在脊椎动物胚胎的中胚层和内胚层诱导以及神经外胚层的前-后轴线分化中起着重要作用。母体来源的这些TGFβ信号在胚胎发育的什么时期被激活、如何影响胚胎的发育,一直没有明确的答案。

SB-431542是一种小分子化合物,在培养的哺乳动物细胞中的实验表明,它能够特异性地阻断ALK4、ALK5、ALK7介导的TGFβ信号的转导。本研究证明,SB-431542在斑马鱼体内同样可以特异性地抑制ALK4、ALK7介导的TGFβ信号。主要证据包括:首先,SB-431542处理的斑马鱼胚胎在表型上与Nodal缺失的突变体的表型类似;其次,SB-431542可以抑制响应Activin/TGFβ的荧光酶报告系统在斑马鱼体内的表达,而对响应ΒΜP的荧光酶报告系统在斑马鱼体内的表达则无抑制作用;第三,SB-431542可以抑制在斑马鱼体内过量表达activin或sqt对中胚层标记基因的诱导作用,但不抑制过量表达bmp2对腹部外胚层标记基因gata2的诱导作用;第四,在SB-431542存在的情况下,过量表达smad3a和smad3b引起的gsc的表达增强受到抑制;第五,SB-431542处理导致的表现型可以被持续激活型的Smad2蛋白所逆转。

为了确定斑马鱼中母源TGFβ信号的激活时间,本研究用50μM SB-431542在中囊胚过渡期前(即合子基因开始表达之前)的不同时期处理胚胎,随后观察胚胎形态和检测分子标记的变化。结果说明,诱导中胚层发育的母源TGFβ信号在受精后就开始激活,并在合子基因表达之前不断地传导其信号。当用SB-431542短时间处理卵裂期胚胎,24小时的胚胎仍表现出中轴组织发育缺陷,说明合子基因表达前激活的母源TGFβ信号是胚胎正常发育所必不可少的。本实验还证明中囊胚过渡期前激活的母源TGFβ信号不足以保证胚胎的正常发育,其正常发育还需要中囊胚过渡期后激活的TGFβ信号。 很少 此外,本研究还从缺失Nodal信号的MZoep突变体、过量表达Nodal基因sqt的胚胎、以及野生型胚胎中提取mRNA,与斑马鱼基因芯片杂交,发现了许多受Nodal信号调控的基因,为深入研究Nodal信号调控胚胎发育的机理打下了基础。
研究背景及目的 LY294002半抑制浓度 脓毒症(sepsis)是感染、严重创伤及大手术等多种应激状态时的常见并发症。近年随着滥用抗生素使耐药菌增多,介入性治疗及有创性监护增多,以及医院内感染的增多等因素,脓毒症死亡率居高不下,约28%～50%,合并休克及脏器功能不全时可达50%～70%,甚至很快死亡。儿科严重脓毒症和脓毒性休克(septic shock)至今仍处于高发病率、高病死率状态。2002年,国际儿科脓毒症共识会议专家组按严格科学的程序,首次在儿科界确定了脓毒症的相关概念[包括儿科全身炎症反应综合征、感染、脓毒症、严重脓毒症、脓毒性休克和多器官功能障碍综合征(MODS)]。经3年实践,2005年1月发表。严重脓毒症由于病死率高(是美国儿童患病及死亡的主要原因之一)、治疗费用昂贵,已构成对人类健康的严重威胁和经济发展的巨大负担。 革兰阴性菌(G~-)感染是引起脓毒症的重要原因之一,其外膜的活性成分内毒素即脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)与宿主细胞膜上的模式识别受体模式识别受体TLR2和TLR4(toll-like

receptor,TLR)结合,启动一系列信号传导反应,引起多种细胞因子和炎症介质的表达和释放。众多实验研究证实前炎症细胞因子TNF-α(tumor necrosis factor-α)是脓毒症和脓毒性休克发病的重要介质,巨噬细胞是脓毒症TNF-α产生的主要来源。大量TNF-α的产生可引起多种细胞因子和炎症介质的过度表达和释放,诱发全身炎性反应,导致血管通透性增加、体液渗出和淋巴细胞移行到炎症部位,影响到心血管、呼吸、血液等多系统的功能。其中,肺是最普遍受影响的器官,脓毒症病人经常发展为急性肺损伤(acute lung injury,ALI)或者急性呼吸窘迫综合症(acute respiratory distress syndrome,ARDS)。肺功能损伤使脓毒症病人必然伴随低氧的病理状态。低氧、低糖、高水平的炎症细胞因子和活性氧代谢产物等是炎症和损伤组织微环境的特点。缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor 1,HIF-1)是哺乳动物和人体内细胞存在着一类介导低氧适应性反应的转录因子,它的氧调节亚单位HIF-1α仅在低氧状态表达,能激活许多低氧反应性基因(hypoxia responsive genes,HRG)的表达。尽管低氧与脓毒症相关,对TNF-α的产生是否与脓毒症低氧过程及HIF-1α诱导相关,这些问题只有很少的研究。 p38 MAPK(mitogen activated protein kinase)被认为是“应激诱导”的MAPK,可在转录和转录后水平调控TNF-α表达,在LPS诱导的TNF-α信号传导通路中占据重要地位,抑制p38通路有希望成为炎症性疾病的新的治疗策略。以SB203580为代表的吡啶异咪哒唑化合物是p38 MAPK的特异性抑制剂,但是对其体内应用效果却仍然存在争议。对氧浓度是否参与p38激活的报道较少见。 本研究通过培养小鼠巨噬细胞RAW264.

3USP2b对TBK1的K63位点泛素化影响 HEK293细胞转染Flag-USP2b或者USP2干扰RNA,以及Myc-TBK1、HA-Ub,使用Myc标签抗体做IP, Western blot检测TBK1的泛素化水平。 HEK293细胞转染Flag-USP2b和Myc-TBK1以及HA-Ub (K48)或者HA-Ub (K63),使用Myc标签抗体做IP,Western blot检测TBK1的泛素化水平。 HEK293细胞转染Myc-TBK1, HA-Ub和Flag-USP2b或者USP2bC67A,使用Myc标签抗体做IP,

Western blot检测TBK1的泛素化水平。 3.4USP2b对TBK1激酶活性的影响 HEK293细胞转染Flag-USP2b表达质粒或者USP2干扰RNA, SeV刺激6h,使用TBK1抗体做IP,检测TBK1激酶活性。 4. USP2b的抗病毒作用 HEK293细胞转染Contrl质粒、USP2b或者USP2b C67A,24h后进一步转染poly(I:C)或者PBS,8h后,VSV感染24后,收集培养细胞的上清(含VSV),剩余细胞提取RNA,上清做空斑试验,检测病毒滴度；RNA反转录成cDNA, E7080 real-time PCR检测细胞内VSV RNA复制。 HEK293或THP1细胞转染对照或者USP2干扰RNA,方法同上,分别检测病毒滴度以及VSV RNA复制。 5. USP2b在其他天然免疫信号通路中的作用 HEK293细胞转染USP2b质粒或者干扰RNA,同时转染TRIF, cGAS加STING和IFN-β-luc报告基因质粒,报告基因检测IFN-β-luc的活化。

THP1细胞转染对照或者USP2干扰RNA48h,分别用LPS、poly(I:C)刺激或者转染ISD12h, PCR检测IFN-β基因表达。 研究结果： 1.SeV感染HEK293或THP1细胞后,USP2表达下调 2. USP2b负向调控病毒诱导的I型干扰素IFN-β的表达。 2.1过表达USP2b抑制SeV诱导的IFN-β-luc的活性 2.2过表达USP2b抑制SeV诱导的IFN-β基因的表达 2.3过表达USP2b抑制SeV诱导的IRF3-luc的活性 2.4USP2b的点突变C67A不能抑制SeV诱导的IFN-β-luc以及IFN-β基因表达。 3.干扰掉USP2b后,增强IFN-β的表达 3.1USP2b的特异性siRNA可以干扰掉USP2b的表达(mRNA和蛋白水平)。 3.2干扰掉USP2b后,SeV诱导的IFN-β-luc活性以及IFN-β基因都增加。 4. USP2b靶向TBK1 USP2b抑制RLRs信号通路中的接头分子RIG-I,

MDA5, MAVS,TBK1活化的IFN-β-luc和IFN-β基因,而对IRF3-5D活化的IFN-β-luc和IFN-p基因表达没有影响。 DNA Damage抑制剂 5. USP2b能够对TBK1的K63位去泛素化 5.1USP2b与TBK1相互作用。 Selleck HKI272 5.2过表达USP2b降低TBK1泛素化水平,USP2b的点突变C67A则不能降低BK1泛素化。相反,干扰掉USP2b后,TBK1的泛素化水平增加。作为对照,USP2b对RIG-I和MAVS的泛素化水平没有影响。 5.3过表达USP2b能够减少TBKl的K63位泛素化水平。 6. USP2b消弱TBK1激酶活性 过表达USP2b消弱SeV诱导的TBK1激酶活性,相反,干扰掉USP2b后,SeV诱导的TBK1激酶活性增加。 7. USP2b负调细胞的抗病毒反应 过表达USP2b后,VSV病毒滴度以及VSV的RNA复制增加,相反,干扰掉USP2b后,VSV病毒滴度以及VSV的RNA受到抑制。 8. USP2b负调TLR3/4和DNA诱导的I型干扰素信号通路 过表达USP2b抑制TRIF(TLR3通路)以及cGAS加STING (DN A通路)诱导的IFN-p-luc活性,相反,干扰掉USP2b后,IFN-β-luc活性增加。THP1细胞中,干扰掉USP2b后,LPS (TLR4配体)、poly(I:C)(TLR3配体)以及ISD (DNA受体活化剂)刺激的IFN-β基因表达增加。 结论： 1.SeV刺激后,USP2b表达下调,USP2b负向调控病毒诱导的I型干扰素通路。 2. USP2b靶向TBK1,通过与TBK1相互作用,对TBK1进行K63位去泛素化。 3. USP2b负向调控细胞的抗病毒反应。 4. USP2b负调TLR3/4和DNA诱导其他天然免疫信号通路。 创新点和意义： 1.本研究首次证明USP2b可以负向调控IFN-β的产生及细胞的抗病毒反应。研究发现USP2b负向调控IFN-β的产生的机制是通过与关键激酶TBK1相互作用,进而去其进行K63位的去泛素化,从而抑制TBK1的活性。 2.由于TBK1作为病毒(包括RLRs,TLR3和DNA受体)诱导I型干扰素产生的关键激酶,USP2b可以广泛参与调控I型干扰素的表达及抗病毒反应。 3.

5μg/ml)、索拉非尼(1.25μmol/L)、奥沙利铂(0.25μg/ml)单药、两药联合(人参皂苷Rg3+索拉非尼,索拉非尼+奥沙利铂,奥沙利铂+人参皂苷Rg3)、三药联合(人参皂苷Rg3+索拉非尼+奥沙利铂)对SMMC-7721细胞均有抑制增殖的作用,各组药物在作用24h时对细胞的增殖抑制率均小于15%。(2)用MTT法检测黏附于FN上1h、2h的SMMC-7721细胞,人参皂苷Rg3作用2h与1h比较,黏附抑制率具有统计学差异(P1.15)；黏附2h时,索拉非尼联合奥沙利铂或人参皂苷Rg3,其抑制黏附作用均好于索拉非尼单药(P0.05)。用MTT法检测黏附于Matrigel上1h、2h的SMMC-7721细胞,当三药相互两两联合时黏附1h,表现为协同作用(Q>1.15)；黏附2h时,索拉非尼联合奥沙利铂或人参皂苷Rg3抑制黏附作用均好于索拉非尼(P<0.05),黏附2h时,三药联合比两药联合体现了更好的抗黏附作用(P<0.01)。(3)细胞迁移实验表明,奥沙利铂、索拉非尼单药对SMMC-7721细胞的迁移抑制作用较好；奥沙利铂+人参皂苷Rg3比人参皂苷Rg3单药抑制迁移作用明显(P<0.01)；奥沙利铂+索拉非尼比索拉非尼单药抑制迁移作用明显(P<0.01)；人参皂苷Rg3+索拉非尼比人参皂苷Rg3单药抑制迁移作用明显(P<0.01)；奥沙利铂+人参皂苷Rg3表现为相加作用,人参皂苷Rg3+索拉非尼与奥沙利铂+索拉非尼表现为协同作用。王药联合抑制迁移作用优于人参皂苷Rg3+索拉非尼组及奥沙利铂+人参皂苷Rg3组(P<0.01)。(4)细胞侵袭实验表明,奥沙利铂、索拉非尼单药对SMMC-7721细胞的侵袭抑制作用较好；奥沙利铂+人参皂苷Rg3比人参皂苷Rg3单药抑制侵袭作用明显(P<0.01)；奥沙利铂+索拉非尼比索拉非尼单药抑制侵袭作用明显(P<0.01)；人参皂苷Rg3+索拉非尼比人参皂苷Rg3单药抑制侵袭作用明显(P<0.01)；奥沙利铂+人参皂苷Rg3与奥沙利铂+索拉非尼表现为相加作用；三药联合比人参皂苷Rg3+索拉非尼组及奥沙利铂+人参皂苷Rg3抑制侵袭作用明显(P<0.05)。(5)免疫细胞化学法结果表明,人参皂苷Rg3可使SMMC-7721细胞CD44V6及MMP-9表达减弱(P<0.05),奥沙利铂可使SMMC-7721细胞CD44V6、VEGF-C、MMP-9表达减弱(P<0.05)；索拉非尼可使VEGF-C、MMP-9表达减弱(P<0.05)；两药联合(人参皂苷Rg3+索拉非尼,索拉非尼+奥沙利铂,奥沙利铂+人参皂苷Rg3)对VEGF-C蛋白的影响,明显高于单药(P<0.01)；对CD44V6蛋白的影响,索拉非尼+奥沙利铂及奥沙利铂+人参皂苷Rg3两药组优于单药(P<0.05),人参皂苷Rg3+索拉非尼联合优于索拉非尼(P<0.05)；对MMP-9蛋白影响方面,索拉非尼+奥沙利铂优于索拉非尼单药(P<0.05),奥沙利铂+人参皂苷Rg3优于人参皂苷Rg3(P<0.05)；三药联合组较两药联合组使相关蛋白CD44V6、VEGF-C、MMP-9的表达减弱更明显(P
[研究背景和目的]

和 selleck怎么样 获悉更多 结直肠癌(colorectal cancer, CRC)容易发生肝转移。如何预测及防治结直肠癌肝转移(colorectal liver metastases, CLM)是一大世界性难题。趋化因子作为肿瘤微环境的重要成份之一,在CLM中发挥重要作用。现有的研究表明,巨噬细胞炎性蛋白3a (macrophage inflammatory protein-3a, MIP3a或CCL20)和白介素-8(interleukin-8, IL-8或CXCL8)与CLM最为密切。然而,相关分子机制尚未完全明了。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是一个由上皮细胞向间质细胞转变的暂时性和可逆性过程。这个过程被广泛定义为从上皮形态向间质形态转变时不同标志物表达的改变,以及细胞获得迁移及侵袭力增强的功能性改变。本研究旨在明确趋化因子CCL20和CXCL8与EMT之间的关系,深入探讨CCL20与CXCL8联合诱导肠癌细胞发生EMT的分子机制。检测临床CRC组织标本,寻找支持CCL20与CXCL8联合诱发EMT的临床证据,分析CCL20与CXCL8共表达与CRC患者临床病理指标及预后的相关性。 [研究方法] 1.CCL20与CXCL8促进肠癌细胞增殖、侵袭的体外实验研究。 (1)细胞增殖试验。 (2)细胞侵袭试验。 (3)细胞划痕试验。 2.CCL20与CXCL8联合诱导肠癌细胞发生EMT及其分子机制的体外实验研究。 (1)细胞免疫荧光试验。 (2) Western Blot. (3)中和试验。 (4)RNA干扰试验。 3.肠癌标本CCL20与CXCL8共表达的临床意义研究。 (1)免疫组织化学检测肠癌组织及其配对癌旁组织中CCL20、CXCL8、E-cad表达。 (2)肠癌组织CCL20与CXCL8共表达与E-cad表达及临床病理学特征之间的相关性分析。 (3)肠癌组织CCL20与CXCL8共表达与肠癌患者生存之间相关性分析。 [实验结果] 1.

三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导的HSC细胞中Smad4细胞内定位的影响 GDC-0449订单 TGF-β1可诱导Smad4表达增加,并促进其入核；三种MAPK抑制因子均可抑制Smad4入核,但对其表达无显著影响。 3Western blot法检测三种MAPK抑制因子对TGF-p,诱导HSC细胞内Imp7/Imp8蛋白表达的影响 3.1Western blot去检测三种MAPK抑制因子对TGF-β,诱导HSC细胞内Imp7蛋白表达的影响 在无TGF-β1刺激条件下,Imp7蛋白表达程度很低且核内表达很弱。TGF-β1可诱导Imp7表达及入核；三种MAPK抑制因子均可抑制Imp7表达及入核。

3.2Western blot法检测三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导HSC细胞内Imp8蛋白表达的影响 在无TGF-β1刺激条件下,Imp8蛋白表达程度很低且核内表达很弱。TGF-β1可诱导Imp8表达及入核；三种抑制因子均可抑制Imp8表达,p38抑制因子可减少Imp8入核。 4.三种MAPK抑制因子对TGF-p,诱导的HSC细胞内PAI-1mRNA表达的影响 TGF-β1可明显诱导PAI-1mRNA表达,ERK、JNK及p38抑制因子均能抑制TGF-p1诱导的PAI-1mmRNA表达。 5.三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导的HepG2细胞内MAPK通路活化的抑制作用 5.1ERK抑制因子(PD98059)对TGF-β1诱导的HepG2细胞内ERK通路活化的抑制作用 在无TGF-β1刺激时,HepG2细胞内的ERK通路已有一定程度磷酸化；TGF-β1则进一步增强pERK的表达。而ERK抑制因子(PD98059)可明显抑制pERK的表达。

5.2JNK抑制因子(SP600125)对TGF-β1,诱导的HepG2细胞内JNK通路活化的抑制作用 在无TGF-β1刺激时,HepG2细胞内的JNK通路已存在明显磷酸化；TGF-β1则进一步增强pJNK的表达。而JNK抑制因子(SP600125)可明显抑制pJNK的表达。5.3p38抑制因子(SB203580)对TGF-β,诱导的HepG2细胞内p38通路活化的抑制作用 在无TGF-β1刺激时,HepG2细胞内的JNK通路已存在明显磷酸化；TGF-β1则进一步增强pp38的表达。而p38抑制因子(SB203580)可明显抑制pp38的表达。 6.三种MAPK抑制因子对HepG2细胞内TGFβp1诱导的磷酸化Smad3C、Smad3L转位的影响 在无TGF-p1刺激条件下,Smad3C及Smad3L磷酸化程度很低且核内表达很弱。TGF-β1可诱导Smad3C、Smad3L磷酸化,并促进pSmad3C、pSmad3L入核。ERK抑制因子、JNK抑制因子显著可抑制Smad3L磷酸化及其入核,p38抑制因子抑制Smad3L磷酸化,但对其核浆分布无明显影响。TGF-β1及三种MAPK抑制因子对Smad3C磷酸化均未见显著影响,但TGF-β1增加pSmad3C入核,三种MAPK抑制因子可抑制pSmad3C入核。7.三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导HepG2细胞内Smad2/3/4复合物形成的影响 Tenofovir分子量 在无TGF-β1刺激的对照组HepG2细胞中,无Smad2/3/4复合物形成,TGF-β1可显著诱导Smad2/3/4复合物形成；p38抑制因子(SB203580)几乎完全阻断Smad2/3/4复合物的形成；JNK抑制因子(SP600125)呈浓度依赖性抑制TGF-β1诱导的S1mad2/3/4复合物形成；ERK抑制因子(PD98059)对复合物形成没有明显影响。各组HepG2细胞内Smad2/3蛋白的表达量没有变化,同时细胞提取物中Smad4蛋白的表达量在各组间也没有差异。 8.Western blot法检测三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导HepG2细胞内Imp7/Imp8蛋白表达的影响 8.1Western blot法检测三种MAPK抑制因子对TGF-β,诱导HepG2细胞内Imp7蛋白表达的影响 在无TGF-β1刺激条件下,Imp7蛋白表达程度很低且核内表达很弱。TGF-β1可诱导Imp7表达及入核；三种MAPK抑制因子均可抑制Imp7入核,尤其是p38抑制因子。

8.2Western blot法检测三种MAPK抑制因子对TGF-β1,诱导HepG2细胞内Imp8蛋白表达的影响 在无TGF-β1刺激条件下,Imp8蛋白表达程度很低且核内表达很弱。TGF-β1可诱导Imp8表达及入核。ERK抑制因子、JNK抑制因子可抑制Imp8入核,p38抑制因子对Imp8核浆分布无明显影响。 9.三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导的HepG2细胞内PAI-1mRNA表达的影响 很少 TGF-β1可明显诱导PAI-1mRNA表达,ERK、JNK及p38抑制因子均能抑制TGF-β1诱导的PAI-1mRNA表达。 结论 5.1TGF-β1诱导HSC细胞及HepG2细胞中Smad3C及Smad3L磷酸化、进而促进Smad2/3/4复合物形成及其转位入核和靶基因PAI-1mmRNA表达可能是肝纤维化-肝癌发病的重要机制,而其中TGF-β1诱导的Smad3L的磷酸化可能是肝纤维化-肝癌发病的最关键环节。 5.2在HSC细胞中ERK、.INK、P38抑制因子均可明显抑制TGF-p1诱导pSmad3L的表达,JNK抑制因子可抑制pSmad3L入核；提示,Smad3蛋白连接区的磷酸化依赖于ERK、JNK、p38通路的激活,而pSmad3L转位入核则主要与JNK通路的激活有关。而在HepG2细胞中ERK抑制因子、JNK抑制因子显著可抑制Smad3L磷酸化及其转位入核,p38抑制因子抑制Smad3L磷酸化,但对其核浆分布无明显影响。三种MAPK抑制因子均可抑制pSmad3C转位入核。提示,在HepG2细胞中Smad3L磷酸化依赖于ERK、JNK、p38通路的激活,而pSmad3L转位入核则主要与ERK、JNK通路的激活有关。pSmad3C的转位入核则与ERK、JNK、p38通路的激活有关。 5.

9×10~4CFU/mL；脂质体法所获得的病毒滴度为4×10~4CFU/mL。 使用单细胞培养法和组织块培养法培养MEFs，对丝裂霉素C处理MEFs制备饲养层细胞的浓度和处理时间进行摸索。结果表明，制备饲养层时最佳条件为10μg/mL的丝裂霉素C处理MEFs2h。 将逆转录病毒颗粒感染两次的hFFCs接种饲养层上，以培养iPSCs的方式培养，观察其变化。结果表明，含目的基因的逆转录病毒颗粒感染后的hFFCs与空白对照相比，细胞形态从典型的长梭形变成圆形、半椭圆、三角形或不规则形态，说明目的基因以逆转录病毒为载体导入hFFCs后，能引起hFFCs发生变化。
目的

点击此处 慢阻肺(COPD)患病率上升已成严重的公共卫生问题，该病主要机理为肺部慢性炎症，现无理想的治疗药物。羟基红花黄色素A（HSYA）为红花有效成分，预试发现它可抑制COPD大鼠炎症损伤及小鼠肺纤维化与TGF-β1表达上调、抑制TNF-α引发细胞炎症因子表达升高。本课题观察HSYA抑制COPD大鼠肺部炎症信号转导、细胞因子表达异常、炎症损伤及组织重构的药效，探索HSYA缓解烟熏-脂多糖诱发的大鼠慢性阻塞性肺病不同时间损伤的作用和HSYA缓解TGF-β1诱导NIH/3T3细胞的活化作用，探索HSYA缓解COPD慢性炎症和肺纤维化的机制，为开发抗COPD的新药提供依据。 方法 1.动物实验：以烟熏-脂多糖刺激wistar大鼠建立COPD模型。120只wistar大鼠按体重分层随机分为12组（N=10）：2周正常对照组、2周COPD组、2周COPD+35mg/kg HSYA低剂量组、2周COPD+70mg/kg HSYA高剂量组；3周正常对照组、3周COPD组、3周COPD+35mg/kg HSYA低剂量组、3周COPD+70mg/kgHSYA高剂量组；4周正常对照组、4周COPD组、4周COPD+35mg/kg HSYA低剂量组、4周COPD+70mg/kg HSYA高剂量组。病理切片HE染色在光学显微镜下观察各组大鼠肺组织结构； Masson染色光镜下观察各组大鼠肺组织及微小气管形态改变及胶原沉积情况；用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、 IL-1β、 IL-6和TGF-β1的蛋白表达水平，用免疫组化的方法来检测各组大鼠肺组织中核因子p65和α-SMA的水平。 2.细胞实验：以TGF-β1诱导NIH/3T3细胞的活化为细胞模型，细胞分8组：正常对照组、 HSYA对照组、 TGF-β1组、 TGF-β1+0.5μmol/L HSYA组、TGF-β1+1μmol/L HSYA组、 TGF-β1+2μmol/L HSYA组、 TGF-β1+2μmol/LSB-431542组和TGF-β1+2μmol/L SB-431542+2μmol/L HSYA组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况；细胞划痕实验观察各组细胞的迁移情况。 结果 1、动物实验： HE染色结果：显微镜下可见三个时间点的正常对照组大鼠的肺泡壁薄，肺泡腔清晰可见、结构完整，肺间质无炎症细胞浸润，细支气管无分泌物；与同一时间点的正常对照组相比，三个时间点COPD组肺组织HE染色光学显微镜下观察到均有炎性细胞浸润明显、细支气管渗出明显、肺泡壁增厚，三个时间点的COPD组相比较，2周COPD组的炎细胞浸润比3周COPD组和4周COPD组较明显，而肺泡壁增厚的情况随着烟熏时间的增加而逐渐加重，4周COPD组最为明显；与同一时间点的COPD组相比不同剂量的HSYA给药组的这些损伤均可见减轻，其中COPD+70mg/kg

EX 527数据表 HSYA高剂量组改善情况比COPD+35mg/kg HSYA低剂量组改善情况较明显。Masson染色结果：同一时间点的各组相比， COPD组与正常对照组比较， COPD组的Masson染色小气道周围胶原沉积明显增加，三个时间点的COPD组的小气道周围胶原沉积随着烟熏时间增加而逐渐增加；与同一时间点的COPD组相比，给予不同剂量的HSYA后炎症因子的高表达均受到抑制，其中COPD+70mg/kg HSYA高剂量组改善情况比COPD+35mg/kg 而且 HSYA低剂量组改善情况较明显。

ELISA法检测肺泡灌洗液结果：同一时间点的各组相比， COPD组与正常对照组比较， COPD组的肺泡灌洗液中炎症细胞因子IL-6、 IL-1β、 TNF-α和TGF-β1水平均明显升高(p均
目的:缺氧是许多临床常见疾病的共同病理生理过程,当机体尤其是心脏和大脑等重要器官遭受严重缺氧时甚至会导致死亡。氯化钴作为一个广为人知的缺氧模拟剂,它可以通过增加活性氧(Reactive oxygen species,ROS)产生、降低细胞活力、改变线粒体膜电位、激活Caspase-3和诱导凋亡产生缺氧/缺血性应答。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是一种具有多种生物学活性的细胞外分泌型信号多肽,可以通过调节细胞的增殖、分化、黏附、移行及凋亡,在生物体的发育过程中发挥重要作用。TGF-β1在心脏保护中的作用也一直是研究的热点,诸多报道表明其在心肌细胞损伤中通常扮演抗凋亡的角色。大鼠ZFP580是由本组克隆的一种C2H2型锌指蛋白,前期研究表明TGF-β1可诱导其表达,且ZFP580在缺氧/复氧损伤诱导的H9c2心肌细胞损伤中具有促进细胞存活及抗凋亡等细胞保护作用。然而,ZFP580在H9c2心肌细胞缺氧损伤中是否具有类似作用及具体机制,以及是否受到TGF-β1的调控仍不清楚。本实验拟通过氯化钴处理H9c2心肌细胞建立化学缺氧诱导的细胞损伤模型,探究ZFP580在TGF-β1抗H9c2心肌细胞缺氧损伤保护效应中的作用及具体机制。方法:MTT法检测细胞存活率;Real time-PCR测定ZFP580和HIF-1α的m RNA表达水平;Western-blot检测ZFP580、HIF-1α、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Bax、Bcl-2和Active Caspase-3的蛋白表达;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;DCFH-DA检测活性氧生成;使用SB431542阻滞剂及慢病毒干扰技术后检测相关指标。结果:1氯化钴处理降低细胞存活率并上调ZFP580和HIF-1α的表达氯化钴可呈时间和剂量依赖方式降低细胞存活率。给予H9c2心肌细胞不同剂量的氯化钴(400、600、800、1000μM)处理24 h,细胞存活率随着氯化钴浓度的升高而降低,结果显示600μM氯化钴处理24 h时细胞存活率接近50%。然后使用600μM氯化钴分别处理细胞0、4、8、12、16、20和24 h,发现细胞存活率与对照组相比在8、12、16、20和24 h显著降低(P<0.05);当转染过的细胞在暴露于氯化钴之前预先用TGF-β1处理,RNA干扰ZFP580抑制其表达会明显减弱TGF-β1的抗凋亡效果,凋亡细胞的比例显著增加(P<0.