Despite significantadvances in therapy over the last decade CLL remains incurable. Current front-line therapy often consists of chemoimmunotherapy-based regimens,

most commonly the fludarabine, cyclophosphamide plus rituximab combination, but rates of relapse and refractory disease are high among these patients. Several key signaling pathways are now known to mediate the survival and proliferation of CLL cells 并且 in vivo, the most notable of which are the pathways mediated by the B-cell receptor(BCR) and cytokine receptors. A better understanding of the pathogenesis of the disease, the underlying biology of the CLL-cell and the roles of the tumour microenvironment has provided the rationale

for trials of a range of novel, more targeted therapeutic agents. In particular, clinical trials of ibrutinib and idelalisib, which target the Brutons tyrosine kinase and the delta isoform of phosphoinositol-3 kinase components of the BCR signaling pathway respectively, have shown extremely promising results. Here we review the current literature on the key signaling pathways and interactions of CLL cells that mediate the survival and proliferation of the leukemic 哪里 cells. For each we describe the results of the recent clinical trials and in vitro studies of novel therapeutic agents.
蛋白激酶B(AKT),在细胞存活、代谢、迁移和侵袭等信号通路中起着重要的调控作用。细胞信号转导抑制因子3(SOCS3)主要参与酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号传导子和转录激活子3(STAT3)传导途径的负反馈调节,可能参与AKT的磷酸化,进而调控肿瘤的发生。根据SOCS3蛋白的生物学特性和AKT信号通路的激活途径,综述了SOCS3在AKT信号通路中的调控作用,以期针对SOCS3靶向AKT信号通路进行抗肿瘤研究,为肿瘤的治疗提供一种新的思路。
目的:探讨蛋白激酶B(protein

CAL-101订单 kinase B,Akt)抑制剂MK-2206对胃癌细胞SGC-7901DNA损伤的影响。方法:不同浓度的MK-2206作用于SGC-7901细胞后,免疫荧光检测细胞内DNA损伤标记分子磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)焦点的生成,Western blot检测DNA损伤相关蛋白的表达水平,同时观察MK-2206对自噬标志蛋白LC3-II表达量的影响,用以确定MK-2206是否促进细胞发生自噬。结果:MK-2206能够诱导SGC-7901细胞发生DNA损伤,促进细胞内γ-H2AX焦点生成,并且激活DNA损伤相关蛋白的表达;MK-2206作用细胞后,LC3-II的生成增加;抑制细胞的自噬显著增强了MK-2206诱导的H2AX磷酸化水平。结论:Akt抑制剂MK-2206能够诱导细胞发生DNA损伤和自噬,抑制自噬促进了MK-2206诱导的DNA损伤。
目的探讨PI3K-AKT信号通路靶向抑制剂AKTiⅣ对慢性粒细胞白血病(CML)急变期细胞K562的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法取处于对数生长期的K562细胞,分别加入0、2.5、5、10μmol/L的AKTiⅣ进行处理,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,甲基纤维素克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,Western blotting检测K562细胞中p AKT(Thr308)、p GSK-3β(Ser9)蛋白表达情况,荧光定量PCR和Western blotting检测β-catenin及其下游靶基因c-myc、cyclin D1 m RNA和蛋白表达情况。结果 AKTiⅣ作用6、10、16h后,K562细胞的增殖能力以及克隆形成能力明显受抑,且作用10h时抑制效果最好。2.

12±0.72,SP600125+LPS组为0.66±0.36,对照组为0.59±0.30。SP600125+LPS组与对照组Z值均小于LPS组(P<0.05或P0.05)。 4.3Western blot检测JNK、P-JNK蛋白 Western blot曝光灰度扫描结果(Z值)显示,LPS组为1.26±0.09,SP600125+LPS组为0.49±0.18,对照组为0.95±0.21。SP600125+LPS组Z值均小于其它2组(P<0.05或P<0.05),LPS组Z值显著大于对照组(P
目的：特发性肺纤维化是以间充质细胞增生和细胞外基质异常沉积为特点的渐进性疾病，正常肺组织主要由肺泡上皮细胞组成，肺泡上皮细胞分Ⅰ型和Ⅱ型。肺泡Ⅱ型上皮细胞有干细胞特性，可在细胞因子TGF-β1的作用下转分化为间质细胞（EMT），表达间质细胞表型标志物肌动蛋白（ACTA2）和V-波形蛋白(Vim)，从而加快肺纤维化进程，其可能机制为活化TGF-β1底物Smad、P38MAPK。青蒿琥酯为传统的抗疟疾药，前期研究证实其有抗纤维化作用。本研究拟用青蒿琥酯为工具药，探讨在青蒿琥酯作用下对TGF-β1诱导的EMT过程的影响及其可能机制，从而研究青蒿琥酯与肺纤维化的关系。 方法：实验分两部分。第一部分研究青蒿琥酯对TGF-β1诱导的肺泡上皮-间质细胞转分化过程中TGF-β1/smad通路影响的剂量效应及时间效应：体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（RLE-6TN）；预实验检测TGF-β1诱导浓度；MTT法检测青蒿琥酯作用于TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞12小时、24小时、48小时后的半抑制浓度（half

maximal inhibitory concentration，IC50），根据IC50选择青蒿琥酯干预浓度；细胞分6组（剂量效应），①空白组；②TGF-β1（3ng/ml）组；③TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(1ug/ml)组；④TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(2ug/ml)组；⑤TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(4ug/ml)组；⑥TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(8ug/ml)组，培养24小时后，在倒置显微镜下观察细胞形态；收集细胞，提取总RNA，RT-PCR法检测各组Smad3、Smad7、ACTA2、Vim的mRNA表达情况；提取总蛋白，Western 不 已经 bloting法检测各组P-Smad3、Smad7、ACTA2、Vim蛋白表达情况；细胞分成4组（时间效应），①空白组（1%FBS）；②TGF-β组（3ng/ml）；③TGF-β（3ng/ml）联合青蒿琥酯（1ug/ml）组；④青蒿琥酯组（1ug/ml），培养12、24、48小时后；收集细胞，提取总RNA，

RT-PCR法检测各组Smad3、Smad7、ACTA2、Vim的mRNA表达情况；培养24小时后，提取总蛋白，Western bloting法检测各组P-Smad3、Smad7、ACTA2、Vim蛋白表达情况。 第二部分研究不同剂量的青蒿琥酯对TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞-间质细胞转分化过程中TGF-β1/P38MAPK通路的影响：体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（RLE-6TN）；细胞分6组，①空白组；②TGF-β1（3ng/ml）组；③TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(1ug/ml)组；④TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(2ug/ml)组；⑤TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(4ug/ml)组；⑥TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(8ug/ml)组，培养24小时后，收集细胞，提取总RNA，RT-PCR法检测各组P38MAPK、ACTA2、Vim

mRNA表达情况；提取总蛋白，Western bloting法检测各组P38MAPK、ACTA2、Vim蛋白表达情况。 结果：第一部分：青蒿琥酯作用于TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞12小时后无抑制作用，24小时后的IC50为8.86ug/ml，48小时IC50为5.04ug/ml；镜下观察结果示与正常组相比，TGF-β1组RLE-6TN细胞由铺路石状上皮形态变成梭形、纺锤形，而且其细胞间隙略变大，青蒿琥酯作用于TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞24小时后，与TGF-β1组比较，细胞的梭形结构减少，部分恢复铺路石状上皮形态，但细胞之间连接仍松散，其中TGF-β1联合青蒿琥酯1ug/ml组表现最明显；RT-PCR及Western bloting结果示与空白组比较，TGF-β1组Smad3、Smad7、ACTA2、Vim mRNA及蛋白均表达增加（P<0.05）；与TGF-β1组比较，TGF-β1联合青蒿琥酯组Smad7mRNA及蛋白均表达增加（P<0.05）；Smad3、ACTA2、VimmRNA表达降低（P<0.05），P-Smad3、ACTA2、Vim蛋白表达降低（P
一、研究背景 因为 气道平滑肌细胞(Airway smooth muscle cell, ASMC)异常过度增殖是支气管哮喘(哮喘)气道重塑的重要特征。自1922年首次在尸检中发现哮喘致死患者的气道平滑肌层显著增厚,接下来的众多研究也证实了各阶段哮喘患者均存在不同程度的气道平滑肌容量增加。增厚的气道平滑肌收缩能力增强,且对变应原的反应性增加；同时平滑肌层增厚导致气道管径变窄,气流受限程度加剧。气道平滑肌过度增殖与哮喘严重程度相关,是导致气流受限向不可逆发展的关键环节。目前治疗哮喘的瓶颈在于,虽然糖皮质激素、支气管舒张剂能够很好地控制和缓解哮喘发作,但无法阻止和逆转不可逆气流受限的发展。抑制气道平滑肌增殖可能成为治疗哮喘的新靶点,因此,研究ASMC增殖的机制十分必要。在哮喘的炎性气道环境中,多种因素可引起ASMC增殖增加,主要有：生长因子、细胞因子、炎症介质、以及多种酶类。这些有丝分裂原作用于细胞膜上的相应受体,引起下游一系列信号通路的激活,其中研究的最多的是细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)通路。细胞外信号经传导、放大、整合后入核,导致转录因子释放,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达,推动细胞进入有丝分裂周期而完成增殖过程。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是肾素-血管紧张素系统(RAS)的重要成员,以往认为其主要作用是调节血压及体液平衡。近年来的大量研究证实,AngⅡ还与细胞增殖、凋亡、迁移、分化、炎症反应及免疫调节等多种生物学行为有关。有研究表明,哮喘发作时伴有肺脏局部RAS的活化,血浆AngⅡ水平升高。AngⅡ与ASMC增殖是否存在关联,目前的研究结果并不明确,且其机制尚未充分阐明。本研究将Ang Ⅱ、Ang Ⅱ受体拮抗剂Losartan、ERK激酶抑制剂PD98059分别或同时作用于原代培养的人ASMC,从活细胞酶水平、细胞周期两个层面检测细胞增殖情况,检测Cycling D1mRNA及蛋白表达水平,并检测ERK磷酸化水平,旨在探讨AngⅡ对ASMC增殖的影响并初步探讨其作用机制。 二、研究目的 1.

AGE-LDL对人肾小管上皮细胞MAPK的影响

1. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞MAPK表达的影响 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL和10μg/ml LPS于0、5min、15min、30min及1小时收集细胞。Western-blot检测MAPK激酶(p38、JNK、ERK)和磷酸化MAPK激酶(p-p38、p-JNK、p-ERK)的蛋白表达情况。 2.抑制MAPK后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞IL-6 mRNA的变化 人小管细胞上皮(HK-2细胞)DMSO、PD98059、SB203580 (p38)、SP420119 (JNK). UO126(ERK)各10μmol/ml预孵2小时后,用AGE-LDL(100μg/ml)刺激6小时,收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测IL-6 mRNA。 3.阻断TLR4后,AGE-LDL对人肾小管上皮细胞MAPK表达的影响 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用TLR4 siRNA 100pmol有效干扰后或者是20μmol/L鼠抗人TLR4抗体预孵2小时后,分别加入100μg/ml AGE-LDL刺激15min后收集细胞。Western-blot检测MAPK激酶(p38、JNK、ERK)和磷酸化MAPK激酶(p-p38、p-JNK、p-ERK)的蛋白表达情况。 九.AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-KB的影响 1. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-KB/p65表达的影响 也许 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL和10μtg/ml LPS于0、5min、15min、30min、1h、3h及6小时收集细胞。Western-blot检测NF-κB/p65和磷酸化NF-κB(p-p65)的蛋白表达情况。 2. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-KB/p65的核转移 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)培养于置有盖玻片的6孔细胞培养板上分别加入100μg/ml AGE-LDL或10μg/ml LPS刺激0、15min和30min。固定,封闭后,加入抗人NF-κB/p65抗体一抗过夜,用非免疫兔IgG作阴性对照,Alex488荧光标记的羊抗兔二抗避光孵育45分钟,Hochest

33258染核,树脂封片。在共聚焦显微镜下观察、拍片。 3.阻断TLR4后,AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-κB表达的影响 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用TLR4 siRNA 100pmol有效干扰后或者是20μtmol/L鼠抗人TLR4抗体预孵2小时后,分别加入100μg/ml AGE-LDL刺激15min后收集细胞。Western-blot检测NF-κB/p65和磷酸化NF-κB(p-p65)的蛋白表达情况。 4. Myd88/TRIF siRNA干扰后,AGE-LDL对小管上皮细胞NF-KB表达的影响 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用Myd88/TRIF siRNA 100pmol有效干扰后,分别加入100μg/ml 这个 AGE-LDL或10μg/ml LPS刺激15min后收集细胞。Western-blot检测NF-KB/p65和磷酸化NF-κB(p-p65)的蛋白表达情况。 5.阻断NF-κB干扰后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞IL-6 mRNA的变化肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用NF-KB/p65 siRNA 100pmol有效干扰后或者是10(imol/L NF-κB/p65抑制剂Bay11-7082预孵2小时后,分别加入100μtg/mlAGE-LDL刺激6h后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测IL-6 mRNA。 十.CD36参与AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用CD36 siRNA 100pmol有效干扰后,或者是20μmol/L鼠抗人CD36抗体预孵2小时后,分别加入100μg/ml AGE-LDL刺激6小时后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测。

十一.统计学方法 所有数据均代表3次重复实验的结果,以X±S表示。多个样本均数的比较采用One-Way ANOVA,两两比较采用LSD和SNK。实验中不同时间点之间的同一变量比较采用独立样本t检验。所有统计由统计软件SPSS13.0完成,P0.05)。 3.3 TLR4中和抗体抑制(?)AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6 mRNA 使用鼠抗人TLR4中和抗体,可以抑制(?)AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6mRNA (F= 142.096, P=0.000)。结果示10μg/ml和20μg/ml抗体预孵细胞后,可以有效的降低AGE-LDL诱导HK-2产生IL-6 mRNA水平。 3.4阻断或中和TLR4受体,可以减少AGE-LDL促进的HK-2细胞分泌IL-6 使用鼠抗人TLR4中和抗体或siRNA干扰TLR4表达,可以抑制AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6蛋白分泌(F=165.849,P=0.000) 此网站 3.5 AGE-LDL对人肾小管上皮细胞TLR4表达的影响 本实验结果显示,AGE-LDL 100μg/ml对人肾小管上皮细胞的TLR4蛋白表达上没有影响(F=0.543,P=0.740) 四.Myd88/TRIF在AGE-LDL刺激HK-2细胞产生IL-6中的作用 4.1 AGE-LDL对HK-2细胞Myd88和TRIF表达的影响 本实验结果显示,AGE-LDL 100μg/ml对人肾小管上皮细胞的Myd88和TRIF蛋白表达没有影响(F=0.122,P=0.992) 4.2 Myd88和TRIF SiRNA分别抑制HK-2细胞表达Myd88和TRIF 使用上海吉泰生物科技公司的合成的人Myd88和TRIF siRNA,可以有效抑制HK-2细胞表达Myd88和TRIF SiRNA蛋白。 4.3 Myd88和TRIF SiRNA干扰后抑制(?)AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6 Myd88 siRNA干扰HK-2细胞后,可以有效的降低AGE-LDL和LPS诱导的HK-2所产生的IL-6 mRNA水平升高(F=l 10.374, P=0.000); TRIF siRNA干扰HK-2细胞后,对于AGE-LDL诱导的HK-2说产生IL-6 mRNA的没有明显的影响(P>0.05),而可以有效的降低LPS诱导的HK-2所产生的IL-6 mRNA水平升高(P0.05) 5.3阻断TLR4受体后,对AGE-LDL引起的HK-2细胞MAPK亚基磷酸化的影响 使用鼠抗人TLR4中和抗体或siRNA干扰TLR4表达后,可以降低AGE-LDL1001μg/ml在15min引起的HK-2细胞p38/MAPK(F=218.083,P=0.000)和JNK/MAPK磷酸化(F=67.954,P=0.000) 六.

05)。 结论：小胶质细胞作为脑内重要的抗原提呈细胞(APC)，在HSV1感染后被大量激活、增殖，细胞表面MHC抗原表达增加，发挥抗原提呈作用，CD40表达增加，有助于淋巴细胞通过血脑屏障和活化，并进一步激活小胶质细胞，分泌大量细胞因子，TH1及TH2型细胞因子反应在HSE中均起重要作用，并相互协调和制约，过氧化反应也是HSE的一个重要方面。 第二部分单纯疱疹病毒性脑炎免疫炎性机制研究 目的：以小胶质细胞系BV2作为小鼠单纯疱疹病毒性脑炎的替代研究对象，了解小胶质细胞激活并分泌细胞因子的刺激信号，及细胞因子分泌的细胞内信号途径。 方法：MTT选择合适的细胞上药物稀释浓度，RT-PCR法检查细胞因子(IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α、iNOS)mRNA含量。小鼠颅内注射HSV1(10~(-3)／0.1ml)制造小鼠单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)模型，与接种HSV1病毒(10~(-2)／0.1ml)的小胶质细胞系BV2细胞比较接种病毒前后以及用药前后细胞表面抗原表达及细胞因子mRNA含量改变。Western Autophagy activator blot检测HSV1感染前后细胞JNK MAPK表达情况，及RT-PCR法检测ERK

MAPK和P38 MAPK的抑制剂作用前后细胞因子表达变化及预后改变。

结果：BV2细胞具有和Balb／c小鼠脑组织相似的免疫反应特性。JNK Screening Library MAPK在病毒感染后激活，ERK MAPK和P38 MAPK的抑制剂PD98059和SB203580均可改善BV2细胞在HSV1感染后的生存率，并可减少TNF mRNA表达；阿司匹林和地塞米松均可减少iNOS mRNA表达。 结论：BV2细胞可作为小鼠单纯疱疹病毒性脑炎的替代研究对象。3条MAPK的主要途径(JNK，ERK和P38 MAPK)在HSE的免疫反应中均发挥作用，ERK和P38 MAPK参与HSV1感染后细胞TNF mRNA表达，TNF的表达认为与病毒感染造成细胞死亡有关。阿司匹林和地塞米松可能具有减少组织过氧化损伤的潜在神经保护作用。 第三部分 临床用药对单纯疱疹病毒性脑炎疗效研究 目的：了解几种临床常用药物对HSE预后及细胞因子分泌的影响。 方法：小鼠颅内注射HSV1(10~(-3)／0.1ml)制造小鼠单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)模型，BV2细胞直接接种病毒作为细胞模型，根据MTT结果选用合适的细胞药物浓度及了解细胞生存率，RT-PCR法检测小鼠脑内细胞因子(IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α、iNOS)mRNA表达，流式细胞术检测小胶质细胞表面CD11b、CD40、MHCⅠ、MHCⅡ抗原表达，比较在病毒感染后和几种药物作用后小鼠脑组织和BV2细胞生存率、免疫抗原表达和细胞因子表达差异。 结果：黄芪、干扰素和脑多肽可显著改善BV2细胞和模型小鼠在HSV1感染后的生存率，同时各种细胞因子表达降低(T_(H1)／T_H型细胞因子)；阿司匹林、菲克维兹和地塞米松不能改善HSV1感染后的生存率，各种细胞因子分泌仍明显偏高，以地塞米松明显；药物作用后脑组织免疫抗原CD11b、CD40、MHCⅠ、MHCⅡ变化各异。

结论：HSV1感染的初期，提高机体抗病毒免疫能力是治疗的主要方向，具有免疫抑制的药物如阿司匹林、地塞米松由于不能抑制病毒复制反而造成晚期的细胞因子表达显著增高，免疫损伤更严重，应避免使用；在HSV1感染晚期病毒复制控制的情况下，可适当选用具有免疫抑制作用的药物。不同神经营养剂的免疫调节作用不同。 第四部分单纯疱疹病毒性脑炎治疗中的预后评估及用药指导 目的：找到可通过检测的细胞因子指导HSE感染后的预后评估及用药方案制定的有效工具。 和 方法：RT-PCR方法检测在多种实验药物及条件下BV2细胞表达细胞因子mRNA含量，MTT检测细胞存活率。将得到的以上数据进行相关及回归分析以得到一元线性回归方程，通过此方程得到BV2细胞的预后估计值。以2nsoftEditor神经网络建模工具软件作为神经网络软件工具，神经网络通过前38组训练集进行训练后，将剩下的23组数据作为盲法测试集，代入已经训练好的神经网络，得到相应的预后估计值。将以上2种方法得到的预后分析结果与实际生存率比较，以计算值与实测值之间误差在15％为标准，15％以内为符合，＞15％为不符。了解2种不同方法对HSE感染预后分析的符合率。 结果：对61组数据进行相关性分析，得到相关系数，同时作实际细胞生存率与各细胞因子关系散点图，发现与生存率相关性最好的参数是TNF-α，IL-23，IL-4，而其中以TNF-α和IL-23较优。但它们之间的关系也并非纯粹的线性关系，或多或少存在一定的非线性关系。回归分析得到的一元线性回归方程为SR=0.184+0.043×(IL-2)-0.013×(IL-4)-0.016×(IL-10)-0.022×P19—0.018×TNF-0.

00%)。而80例膀胱尿路上皮癌组织中有59例(73.75%)为表达阳性。这说明相比于正常膀胱移行上皮组织,OPN具有一定的特异性,有希望成为膀胱尿路上皮癌早期筛查和诊断的协同分子标记物。 最后,通过免疫组化结果的统计学分析可以看出CIP2A的表达,与病人的年龄、性别、临床的分期、分级、组织病理类型等这些临床指标,无明显的相关性。但CIP2A与OPN在膀胱尿路上皮癌组织样本中的蛋白表达有明显的相关性,提示两者在蛋白协同表达方面具有统计学意义。同时CIP2A.OPN蛋白表达主要在细胞胞浆、同时部分细胞核也有阳性表达的定位,也显示了两者在位置及表达强度上具有一致性。CIP2A和OPN在临床标本蛋白水平免疫组化的协同表达结果,提示了两者结合作为膀胱肿瘤的标记物的研究应用前景。

MEK抑制剂 综上所述,我们从临床实际问题出发,采用临床组织样本和临床资料,从标志物的遗传和生化调控的视角,深入揭示CIP2A和骨桥蛋白(肿瘤或间质来源的)两者之间可能具有的协同表达机制和临床应用价值。既往研究中CIP2A和骨桥蛋白多效性的功能在肿瘤发生发展中的作用,及本课题临床标本检测的突出意义显示出,CIP2A和OPN作为膀胱尿路上皮癌诊断分子标记物的可能。进一步深入了解有关CIP2A和骨桥蛋白调节的信号转导通路,将有助于这两种分子标记物作为对抗癌症的新型分子诊断和靶向治疗标记物的可能。
目的： 探讨高容量血液滤过(high volume hemofiltration, HVHF)对脓毒症伴急性肾衰竭犬的疗效,并观察血清及肝、肺、肾组织高迁移率族蛋白1(HMGB1)、 TNF-α、IL-6等因子的变化,HVHF对肝、肺、肾病理改变的影响。 方法： 12只雄性Beagle犬双侧输尿管结扎后静脉注射内毒素(LPS)1.0mg/kg,制作脓毒症伴急性肾衰竭犬模型。随机均分为模型组和HVHF组(注射LPS后立即行HVHF治疗24h)。注射LPS前及注射后2、4、8、16、24h取静脉血检测血常规、肝肾功能、电解质,注射LPS前及注射后24h行动脉血气分析,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各时间点血清及注射后24h肝、肺、肾组织上清液中HMGBl、 TNF-α、IL-6的浓度,并行24h肝、肺、肾组织HE染色观察组织损伤程度。

结果： 一般情况改变：与模型组相比,HVHF组所有犬体温、呼吸、心率、缺氧表现及大便情况明显改善。 细胞炎症因子的变化：与模型组相比,HVHF组血清HMGB1、TNF-α、IL-6的峰值及维持值降低,HMGB1达峰值时间延迟；肝、肺、肾组织上清液中HMGB1、TNF-α、IL-6浓度降低(P<0.05)。注射LPS后24h两组动物均出现呼吸衰竭；HVHF组注射LPS后24h的PaO2高于模型组,PaCO2低于模型组(P<0.05)；HVHF组肺脏炎性细胞浸润、肺泡破裂等组织学改变明显减轻,量化评分(2.04±0.62比2.50±0.51),差异有统计学意义(P0.05)。 购买AG-014699 结论： 1.HVHF可以改善脓毒症伴急性肾衰竭犬呼吸、心率、缺氧、大便等一般情况。 2. HVHF可以降低脓毒症伴急性肾衰竭犬血清Cr、BUN、ALT、AST水平,改善肺功能。 selleck 3. HVHF可以降低脓毒症伴急性肾衰竭犬血清及肝、肺、肾组织HMGB1、TNF-α、IL-6的浓度,减轻肝、肺、肾组织损伤。
子痫前期（PE）多发生于妊娠20周后，以高血压和蛋白尿为主要特征，伴全身多器官功能损害或功能衰竭，严重者可出现抽搐、昏迷，甚至死亡。目前，诱发子痫前期的病因及病理机制仍是围产医学中广泛研究的重要课题。因此，子痫前期中胎盘组织内信号转导途径的改变，是研究PE发生发展的关键性环节之一。

促分裂素原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases, MAPK）是广泛存在于真核生物细胞内的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，其家族主要由c-Jun-N-终端激酶（JNK）、p38激酶和细胞外信号转导激酶（ERK）等组成。MAPK通过将细胞外的刺激信号传导至细胞内，从而引起细胞发生增殖、分化、转化及凋亡等生物学反应。ERK主要介导细胞增殖、分化、转化，而JNK和p38则与细胞损伤、炎症、梗死、氧化应激反应密切有关，三者之间既各自独立，也相互作用，共同参与完成细胞内各种信号的转导。 子宫螺旋动脉和管腔中滋养细胞层的重铸障碍，导致胎盘缺氧缺血灌注不足，胎盘炎性因子等过度激活，使得滋养细胞、血管内皮细胞等发生功能障碍，最终导致PE发生。通过以往对子痫前期胎盘滋养细胞的体外培养发现，p-ERK的表达较正常下降而p-p38的表达却与滋养细胞毫无关系。然而通过动物实验发现p38α的高表达与胎盘的形成缺陷相关，可引起胎盘滋养细胞、间质细胞凋亡增加，最终导致胎鼠的死亡率上升。因此，PE中MAPK信号转导通路蛋白对滋养细胞的调节仍需进一步研究。 本课题以子痫前期和正常妊娠妇女的血清和胎盘组织进行研究，检测PE组和正常妊娠组血清中TNF-α、IL-6，胎盘组织中MAPK转导通路相关蛋白（p38、JNK、ERK）、凋亡蛋白以及MMP-9和TIMP-1的表达。通过对MAPK信号转导通路及凋亡蛋白的研究，探明引发子痫前期的主要靶蛋白，为子痫前期发生的病理机制及病理生理学研究提供实验依据。本研究总共包括三个部分： 实验一子痫前期患者胎盘组织中MAPK信号转导通路相关蛋白的表达 目的：研究在子痫前期外周血肿瘤坏死因子TNF-α与胎盘组织MAPK信号转导通路相关蛋白的相关性，探明子痫前期的主要靶蛋白，为子痫前期的病理机制提供依据。方法：采用病例对照研究，选择西京医院妇产科住院分娩的子痫前期孕妇和正常妊娠妇女各45例，通过ELISA分析两组孕妇血清中TNF-α、IL-6，免疫组化与蛋白印记检测胎盘组织中MAPK信号转导通路相关蛋白以及NF-κBp65、c-fos、c-Jun，并进行相关性分析。结果：（1）子痫前期血清中TNF-α、IL-6水平明显高于正常妊娠组1.56±0.3vs0.85±0.1pg/ml、95.31±1.38vs56.40±1.45pg/ml，P<0.01；(2)子痫前期组胎盘滋养细胞中p-p38、p-JNK的表达均高于正常妊娠组（P<0.01），而p-ERK的表达则低于正常妊娠组（P<0.

猪诱导多能性干细胞的转录组分析 对LFB2i-piPSCs进行了mRNA和sRNA测序，并且和PEF、FGF2-piPSCs（能够产生嵌合体动物的piPSCs）数据进行了比较。mRNA-seq结果显示LFB2i-piPSCs表达高水平的SOX2,

L-MYC, ESRRB等基因以及相对低水平的POU5F1(OCT4), KLF4和NANOG基因。miRNAs分析表明LFB2i-piPSCs高表达与多能性相关的miR-17-92、miR-302b-367、miR-106a-363、miR-290家族中的miRNAs，低表达let-7家族中的miRNAs。 4.山羊NANOG启动子报告载体的构建和细胞多能性监控 ABT-888核磁共振 首先尝试用不同的培养条件进行了山羊ES样细胞的分离和iPS样细胞的诱导，并对获得的细胞进行了初步鉴定。之后克隆并验证了山羊NANOG近端启动子，将其与EGFP相连接构建了报告载体。通过细胞转染和显微注射证明该报告载体具备表达功能和组织特异性。将该载体稳定转染到山羊成纤维细胞中作为重编程的受体细胞，从而对山羊体细胞重编程过程进行监控。同时将该报告载体显微注射到山羊胚胎中用于监控山羊早期胚胎的发育进程。
胚胎干细胞（Embryonic stem cells, ESCs）主要来源于胚胎囊胚期的内细胞团，具有分化的多潜能性和自我更新能力。转录因子调控网络和表观修饰调节，包括microRNA（miRNA）调控，在ESC的多能性维持和分化调节中都发挥着重要的作用。2010年，研究发现维生素C能促进诱导干细胞（induced pluripotent stem cells, 而且 iPSC）产生，此后维生素C在诱导细胞重编程和ESCs调控领域的研究引起了广泛关注。研究表明，维生素C有利于促进ESCs多能性维持，改善iPSC的诱导效率以及提高iPSC的重编程质量。目前研究表明，维生素C主要调控干细胞的表观修饰，包括DNA甲基化和组蛋白修饰等。 本研究以小鼠胚胎干细胞J1（J1mESCs）和小鼠畸胎瘤细胞系F9为研究对象，结合转录组表达谱芯片分析、miRNA测序分析以及实验验证等方法，探索维生素C调控干细胞多能性维持的作用机理。 1.维生素C促进无饲养层J1mESCs的自我更新和克隆形态。在无LIF的干细胞培养液中培养J1mESCs，加入维生素C后，J1mESCs的克隆形态变大，碱性磷酸酶（alkalinephosphatase, AP）活性升高。而维甲酸（retinoic acid, RA）诱导分化后，J1mESCs克隆形态明显变小，周围出现大量分化细胞，AP活性也显著降低。重新加入维生素C后，干细胞克隆形态明显恢复，AP活性也恢复较高水平。表明维生素C有助于促进干细胞的自我更新，并能够拮抗RA诱导的干细胞分化。 2.维生素C能够促进小鼠J1mESCs多能性基因的表达，并下调一些与分化相关的细胞信号转导途径。 a）基因表达谱芯片证实维生素C有利于小鼠J1mESCs多能性基因表达。收集维生素C处理的J1mESCs，进行基因表达谱芯片分析，以寻找维生素C的下游调控基因。利用在线软件DAVID（Database

for Annotation, Visualization and Integrated Discovery）对实验数据进行GO（Gene Ontology）和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes andGenomes）分析，结果发现，维生素C广泛促进多能性基因的表达，其中包括Esrrb、Utf1、Klf4、Tcl1、Eras、Nanog等重要的多能性因子，同时下调分化相关转录因子的表达。上述结果得到实时定量PCR（qPCR）的验证。

b）维生素C激活核心多能性基因转录。分别构建小鼠Nanog、Oct4、Sox2、Klf4基因近端启动子萤光素酶报告载体，检测维生素C处理对这些启动子活性的影响。结果发现，维生素C能促进Nanog和Oct4近端启动子活性上升。同时qPCR和Western Blot验证表明，维生素C能够促进Nanog基因表达上升。 c）维生素C下调部分与细胞分化相关的信号转导途径。采用信号通路报告载体转染J1mESCs和小鼠F9细胞，加入维生素C后检测信号通路效应元件的变化。结果发现，维生素C下调NF-κB、JNK、Myc等与细胞凋亡、分裂、周期调控相关的细胞信号转导途径。 3.维生素C促进mESC中特异性miRNA的表达，并通过miRNA介导的基因表达调控，抑制与细胞分化和发育相关基因。 a） miRNA深度测序结果表明维生素C能促进mESC中特异性miRNAs的表达。收集维生素C处理的J1mESCs，在Illumina HiSeq2000平台上进行小RNA深度测序分析。结果发现，维生素C促进干细胞中miRNA整体表达水平，发生显著变化的miRNAs中，超过70%被上调，尤其是干细胞特异性miRNA簇，包括miR-290–295、miR-17–92、miR-106b–25等，许多Dlk1-Dio3印记区编码的miRNAs也能被维生素C显著上调，包括miR-143、miR-434、miR-540、miR-433等，而与分化相关的miRNAs表达则下调，如miR-470。上述结果得到miRNA PD0325901 花费 qPCR的验证。 b）筛选上述实验中维生素C上调的miRNAs，利用在线软件TargetScan预测靶标，并进行GO分析，发现这些靶标主要富集于调控细胞分化与发育相关途径。筛选miR-296,miR-361, miR-143, miR-331, miR-434部分靶标，利用双萤光素酶报告检测miRNA对靶标抑制作用以及qPCR验证靶标mRNA表达水平。结果表明，预测到的11条靶标序列，其中有9条能被相应的miRNAs抑制，同时，qPCR检测的4个靶基因mRNA水平，其中3个靶基因表达显著下调。说明预测具有较高的准确性，预测结果可以反映出miRNA的调控作用。 c）维生素C上调miR-296, miR-361, miR-143, miR-331, miR-434的表达，维生素C下调Kdm6b、Sox6、Klf13、Sox17等与调控发育相关基因，同时，这些上调的miRNA靶向抑制这些下调的基因。上述结果表明，维生素C通过介导miRNA表达抑制干细胞中与分化和发育相关的基因。 4.

目的 肺成纤维细胞是放射性肺纤维化的效应细胞,基于前期的实验研究,本研究拟采用血清药理学的方法,通过观察养阴清肺方和激素对钴60射线照射后的人胚肺成纤维细胞的不同影响,证实养阴清肺方是否能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,改变细胞生长周期,减少细胞因子TGF-β1及α-肌动蛋白的表达。阐明养阴清肺方是否通过影响细胞生长、细胞因子的分泌及蛋白的表达来减轻肺纤维化的发展,探讨养阴清肺方对放射性肺纤维化的作用,从而证实本方临床治疗放射性肺纤维化的有效性,为药物的进一步开发应用提供实验依据,推动中医药在治疗放射性肺纤维化中的应用。 这个 2.方法 本实验分为4组：中药组、激素组、中药加激素组、空白对照组,采用血清药理学方法,分别给4组Wistar大鼠灌胃,然后采集血清,分装、保存。采用钴60射线照射人胚肺成纤维细胞,然后用不同含药血清对照射后的肺成纤维细胞进行干预。 先采用不同照射剂量(分别为0Gy、3Gy、5Gy、8Gy)钴60射线照射人胚肺成纤维细胞,然后用MTT法检测不同照射剂量对细胞增殖的影响,选用对细胞增殖作用最强的照射剂量作为以下实验的照射量。 采用前一实验所得出的最佳照射剂量照射肺成纤维细胞,然后分别加入不同组别的含药血清培养,分别于24、48、72小时后检测每组细胞的增殖情况,评估不同药物对肺成纤维细胞的抑制率。 采用最佳照射剂量照射后,加不同含药血清培养,采用流式细胞技术分析肺成纤维细胞的凋亡及周期情况,分析细胞生长周期受不同药物干预后的变化情况以及不同药物对细胞凋亡的影响。 TGF-β1在肺纤维化的发生、发展过程中起着非常重要的作用,将细胞通过照射和含药血清培养后,采用ELISA试剂盒检测培养24、48、72小时后不同组细胞分泌的细胞因子TGF-β1的含量；分析不同药物对肺成纤维细胞自身分泌TGF-β1的影响。

α-肌动蛋白是肌成纤维细胞的特异性表达,而肌成纤维细胞在肺纤维化的发生发展过程中也起着很重要的作用。将细胞经过上述实验中的方法处理后,高内涵筛选方法观察α-肌动蛋白的变化情况,以分析不同药物对α-肌动蛋白表达的影响。 3.结果 经不同剂量(OGy、3Gy、5Gy、8Gy)射线照射后的各组的OD值与阴性对照组相比均有显著性差异(P<0.05),各实验组之间也有差异(P<0.05),且中药组、激素组、中药加激素组之间分别都有差异(P<0.05),且中药组、激素组、中药加激素组之间也有差异(P<0.05),中药组的作用最突出。在48小时这一时相,中药、激素、中药加激素组与空白组均有差异(P0.05),但这一时间点细胞的凋亡率均明显小于24小时的细胞凋亡率。在72小时这一时间点,中药、激素、中药加激素组各组与空白组均有差异(P<0.05);中药、激素、中药加激素组之间亦有差异(P0.05),其余各组之间均有差异(P0.05),其余各组之间均有差异(P0.05),中药组与激素组之间无差异(P>0.05),其余各组之间均有差异(P<0.05)；中药、激素两组分别与中药加激素组都有显著差异(P0.05)。

MDV3100购买 4.结论 肺成纤维细胞经射线照射后,增殖明显加快,且在0-8Gy的照射范围内,这一趋势与照射剂量成正相关,随着照射剂量的加大,细胞的增殖和存活率也增加。 中药加激素抑制细胞增殖的能力最明显,激素对细胞的抑制能力强于中药。在48小时内,药物对细胞的抑制率呈上升趋势；在48小时达到高峰；之后呈下降趋势。 各药物组均具有明显的促进照射后肺成纤维细胞凋亡的能力。在24小时时相,中药促进细胞凋亡的能力明显强于其它两组(激素组和中药加激素组),且这一时相各组药物促进细胞凋亡的能力最突出。

各组药物可能均是通过阻滞GO/G1期和G2/M期,减少S期而改变细胞周期,从而减少细胞的增殖并促进细胞的凋亡。 24小时内,中药组抑制细胞分泌TGF-β1的能力很微弱,激素联合中药组的作用较强。在48小时时相,中药抑制肺成纤维细胞分泌TGF-β1的作用最强。在72小时时相,激素联合中药组抑制其分泌TGF-β1的作用减弱,中药和激素均能抑制细胞分泌TGF-β。 各药物组均能减少经钴60照射后的肺成纤维细胞表达α-肌动蛋白,中药联合激素组抑制α-肌动蛋白表达的作用最强,中药和激素二者没有差异。
植物的耐逆性是信号网络中多个基因相互作用、共同调控的结果,为了更好地理解植物耐逆性相关机制,有必要研究植物基因在非生物胁迫情况下的表达模式。 利用基因芯片,本实验室建立了盐和非盐胁迫下的大豆基因表达图谱,比较了它们的表达差异,筛选出与耐盐胁迫有关的多个候选基因。本文从候选基因中克隆了一个锌指蛋白转录因子基因和一个蛋白激酶基因,对它们在耐逆性中的作用进行了研究。 主要研究内容和结果包括： 通过比较大豆盐及非盐胁迫下的基因表达差异,发现17个锌指蛋白家族基因和26个蛋白激酶家族基因在盐胁迫下上调表达。在上述上调表达的2类基因中筛选并克隆了1个锌指蛋白基因GmZnFl和1个蛋白激酶基因GmPK6,并进行了功能研究。 1GmZnF1的克隆与初步功能分析 EPZ-6438浓度 1.1GmZnF1基因的芯片结果验证 半定量RT-PCR分析表明,GmZnFl基因在盐胁迫下,表达量随着胁迫时间的延长,表达量逐渐增加。 1.2GmZnFl蛋白结构、性质及系统进化分析 GmZnF1基因编码的蛋白是典型的C2H2-ZnF蛋白,具有一个跨膜结构域,一个复杂性较低的区域和一个DPBB-1样结构域。GmZnF1蛋白的疏水性较强,推测可能含有跨膜结构域。GmZnFl和油菜RING型E3泛素连接酶的同源性较高(99.0%),与拟南芥中玉山筷子芥锌指家族蛋白有同源性(48.0%),并且与蒺藜苜蓿E3泛素蛋白连接酶有同源性(38.0%)。 1.3GmZnF1转录激活活性分析 利用酵母转录激活体系证明该蛋白具有转录激活活性,从而佐证了该基因是转录因子。 1.4GmZnFI基因表达模式分析 qPCR结果表明GmZnFI在大豆的根、茎和花中表达量最高,在叶片和种子中表达量较低,且其表达受ABA、盐胁迫、干旱和冷胁迫的明显诱导,在盐和旱诱导条件下的上调表达尤其明显。 1.5GmZnF1的克隆及拟南芥过表达株系的获得 从“圣豆9号”中首次分离了1个锌指蛋白基因CDS序列,命名为GmZnF1,序列长度分别为834bp,分别编码278个氨基酸。 克隆GmZnF1基因CDS全长,构建植物过表达载体,并转化筛选拟南芥,得到该基因的过表达纯系植株。 1.

体外原代培养的HUVECs，分为对照组和Notch信号阻断组，利用DCFH-DA荧光探针结合用流式细胞技术，检测细胞内ROS水平。分别在生理状态下以及缺血再灌注条件下细胞内活性氧（ROS）水平，并使用相关的抑制剂作用血管内皮细胞确定生理状况下，ROS的主要来源。 3.体外培养人原代HUVECs被分为六组：对照组（DMSO组），单纯Notch阻断组（GSI组），Notch阻断加NADPH氧化酶阻断组（GSI+DPI），Notch阻断加抗氧化剂组（GSI+NAC），单纯NADPH氧化酶阻断组(DPI)和单纯抗氧化剂组(NAC)。刺激后分别用MTT法检测细胞增殖；划痕法检测细胞迁移；结晶紫染色检测细胞黏附；细胞外基质胶（Matrigel）检测管腔形成。 4.体外原代培养的HUVECs，分为照组和Notch信号阻断组，经刺激48h，RIPA裂解收取蛋白，定量并变性后，蛋白印记法（Western-Blots）检测HUVECs相关蛋白表达水平变化。

【结果】 1．采用改良体外培养HUVECs培养方法，获得大量稳定血管内皮细胞，应用含5%胎牛血清的内皮细胞专用培养基（ECM）培养细胞，MTT法观察细胞生长曲线表明：细胞生长旺盛2-3d生长最快，4-6d可融合。利用流式细胞技术进行APC-CD31细胞Marker以及免疫组织化学进行Ⅷ因子染色鉴定，血管内皮细胞的纯度高达99.56%。 LY294002购买 2.体外原代培养的HUVECs，经GSI阻断Notch信号后，利用DCFH-DA荧光探针结合用流式细胞技术，结果表明：在生理状态下以及缺血再灌注条件下细胞内活性氧（ROS）水平明显升高。随后使用相关的抑制剂作用血管内皮细胞后，利用DCFH-DA荧光探针结合用流式细胞技术，结果发现：生理状况下，ROS的主要来源于细胞膜上的NADPH氧化酶。 3.体外培养的HUVECs，各组经刺激后分别用MTT法检测细胞增殖、划痕法检测细胞迁移、检测黏附及体外管腔形成。结果显示：阻断Notch信号通路后，HUVECs增殖明显增加；细胞迁移速度加快；黏附以及管腔生成增加；利用ROS清除剂以及NOX抑制剂后，细胞增殖明显减慢；划痕法检测细胞迁移；细胞迁移，黏附及管腔形成实验均得到相似结果。 4.体外原代培养的HUVECs经GSI阻断Notch信号48h后，蛋白印记法（Western-Blots）检测HUVECs相关蛋白结果显示：阻断Notch后，NOX4蛋白含量明显增加；VEGFR2，P38及ERK的磷酸化水平增加；SOD1蛋白水平未见明显变化。 【结论】 1．采用改良外培养HUVECs培养方法，获得大量稳定高纯度的HUVECs，为后续实验提供充足的细胞来源。 2.体外培养HUVECs，经GSI阻断Notch信号后，在生理状态下以及缺血再灌注条件下细胞内活性氧（ROS）水平明显升高；使用相关的抑制剂后，证实血管内皮细胞内ROS的主要来源来细胞膜上的NADPH氧化酶。 3.体外培养HUVECs，经GSI阻断Notch信号及各组经刺激后， HUVECs细胞增殖、迁移、黏附及管腔生成明显增加；利用ROS清除剂以及NOX抑制剂后，细胞增殖明显减慢；划痕法检测细胞迁移；细胞迁移，黏附及管腔形成实验均得到相似结果，说明Notch信号时通过调细胞内ROS的水平来影响血管内皮细胞生物学行为。 购买Ibrutinib 4.体外原代培养的HUVECs经GSI阻断Notch信号48h后，Western-Blots结果显示：HUVECs经GSI阻断Notch信号后，ROS水平增加是NOX4蛋白激活引起其产生增多而非SOD1对其清除减少引起的；增加的ROS通过引起下游VEGFR2，P38及ERK的磷酸化水平增加而引起下游一系列信号反应。
目的：

肝纤维化是多种慢性肝脏病变最终进展到肝硬化的一个重要中间过程，以肝星状细胞(hepatic

stellate cell，HSC)的活化和细胞外基质（extracel lular matrix,ECM）的大量沉积为主要特征。研究证实，Wnt信号通路在肝纤维化的过程当中起到了重要的作用，其中以Wnt/β-catenin研究的最多。中药肝复康是我校病理生理教研室经多年实验总结出的抗肝纤维化的经验方，已证实对Wnt/β-catenin通路和非经典的Wnt/Ca2+信号通路均有抑制作用。目前，在对肿瘤一些的研究中发现，Wnt/Ca2+信号通路能够对Wnt/β-catenin通路起到抑制的作用，即说明了这两条通路在有些肿瘤中并不是单一的产生作用，而两条通路之间也是可能存在某种相互关系，能够相互影响，但在对肝纤维化的研究中则主要研究的是每条通路与肝纤维化的发生发展可能存在的某些机制，但对这两条通路之间的相互关系却还不十分明确。SB216763是GSK-3β的抑制剂，使胞浆中β-catenin大量累积并入核，从而激活Wnt/β-catenin通路。本实验通过使用中药肝复康药物血清和SB216763干预培养的HSC，然后分析在肝纤维化发生发展过程中Wnt/β-catenin通路与Wnt/Ca2+信号通路之间的相互关系。 没有 方法： 用含10%胎牛血清的DMEM培养基在5%CO2混合气体、37℃的孵箱中培养，传代大鼠HSC-T6细胞株。待细胞条件成熟后，再用不含血清的DMEM培养基饥饿培养24h后分组加药。 在六孔板中将细胞随机的分为以下五组：正常血清组（含10%正常大鼠血清的DMEM培养基）；SB21676320μM组(含10%正常大鼠血清，SB2167632umol/L的DMEM培养基）；SB21676310μM组（含10%正常大鼠血清，SB2167631umol/L的DMEM培养基）：肝复康治疗组（含10%肝复康治疗组大鼠血清的DMEM培养基）；SB21676320μM加肝复康治疗组（SB21676320μM基础上用10％肝复康药物血清干预），用孵箱在37℃，5%CO2混合气体的环境中培养48h。 逆转录-聚合酶链反应（reverse transcriptase polymerase chain reaction，RT-PCR)法检测HSC细胞中collagen I，collagen Ⅲ，a-SMA的表达和Wnt/Ca2+信号通路中的相关指标Wnt5a， Frizzled2，CAMKII， MPP-7mRNA相对表达量,免疫蛋白印迹法（western blot）检测细胞中MPP-7的蛋白表达量。实验结果均采用SPSS13.0统计软件分析。 结果： 1、SB216763与肝复康对大鼠HSC-T6细胞活性及a-SMA、I型、III型胶原的影响 1.1RT-PCR检测SB216763对大鼠HSC-T6细胞活性及a-SMA、I型、III型胶原的影响 SB21676310μM与SB21676320μM组HSC明显活化, I型胶原、 Ⅲ型胶原、a-SMA表达量与正常血清组相比显著增加，其中又以SB21676320μM组增多的更为明显，说明使用SB216763后HSC-T6细胞株有明显的纤维化倾向。 1.

These cells were pretreated with BSO for 24 h and then with AZA for different times. We examined the effects of this combination on some proteins and on cellular death. We also studied the eff icacy and the safety of AZA (6 mg/kg per day) and BSO (90 mg/kg per day) 寻找更多 in HepG2 tumor growth in vivo using athymic mice. We measured safety by serological markers such as aminotransferases and creatine kinase.RESULTS: The in vitro studies revealed a new mechanism of action for the

AZA plus BSO combination in the cancer cells compared with other thiopurines (6-mercaptopurine, 6-methylmercaptopurine, 6-thioguanine and 6-methylthioguanine) in combination with BSO. The cytotoxic effect of AZA plus BSO in HepG2 cells resulted from necroptosis induction in

a mitochondrial-dependent manner. From kinetic studies we suggest that glutathione (GSH) depletion stimulates c-Jun amino-terminal kinase and Bax translocation in HepG2 cells with subsequent deregulation of mitochondria (cytochrome c release, loss of membrane potential), and proteolysis activation leading to loss of membrane integrity, release of lactate dehydrogenase and DNA degradation. Some of this biochemical and cellular changes could be reversed by N-acetylcysteine (a GSH replenisher). In vivo studies showed that HepG2 tumor growth was inhibited when AZA was combined with BSO.CONCLUSION: Our studies suggest that a combination of AZA plus BSO could be useful for localizedtreatment of hepatocellular carcinoma as in the currently used transarterial

chemoembolization Stem Cell Compound Library method.
目的:探讨利用p38抑制剂SB203580(SB)抑制p38通路对6Gy受照小鼠免疫细胞辐射损伤的作用。方法:取雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为对照组、照射组和SB组,每组10只。SB组和照射组小鼠接受以6Gy137Csγ射线的全身照射。SB组小鼠照射24h后腹腔注射SB(15mg/kg),每2d1次,共给药5次,其余2组小鼠腹腔注射对照溶液。小鼠受照10d后处死,取外周血计数,流式细胞仪检测CD4、CD8、B220表达,取骨髓细胞测定ROS水平。结果:照射组外周血白细胞(WBC)、CD8、B220细胞比例较对照组明显下降,骨髓ROS水平升高(P<0.01)。SB组外周血CD8比例较照射组上升,骨髓ROS水平下降(P<0.01)。结论:SB对小鼠6Gy照射后造血免疫损伤有一定的缓解作用,其机制可能与其降低照射后骨髓细胞ROS水平有关。
目的:探讨葡萄籽提取物原花青素对隐睾生精细胞凋亡的影响,为临床治疗某些特发性男性不育症药物的开发研究提供实验依据。方法:将雄性健康SD大鼠40只随机分为隐睾+原花青素(高、中、低剂量)组、隐睾+生理盐水组、假手术组5组,每组8只大鼠,每天定时定量灌胃3次,7天后断颈处死大鼠,双侧睾丸称湿重并取手术侧睾丸HE染色观察组织学变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:与生理盐水组比较,原花青素各剂量组的生精细胞凋亡程度显著减轻(P<0.05),且呈剂量效应。结论:原花青素能够减轻雄性SD大鼠实验性隐睾生精细胞凋亡的程度。
Background Nutlin-3a售价 This study aimed to determine the effects of tumor necrosis factor(TNF-a) on endothelial cytoskeleton morphology and permeability,and to detect the underlying signaling mechanisms involved in these responses. Methods Cultured endothelial cells(ECs) were exposed to TNF-a,and EC cytoskeletal changes were evaluated by observing fluorescence of F-actin following ligation with labeled antibodies.Endothelial permeability was detected by measuring the flux of HRP-albumin across the EC monolayers.

01)；加味通腑汤高剂量组与补脾益肠丸组及加味通腑汤中剂量组、加味通腑汤低剂量组比较，AI值明显下降，Bcl-2蛋白表达明显升高，Bax蛋白表达明显下降(P<0.01)，加味通腑汤高剂量组与柳氮磺胺吡啶组比较，AI值明显下降，Bax蛋白表达明显下降(P0.05)。 结论：加味通腑汤可以通过调节Bcl-2与Bax蛋白表达来减少溃疡性结肠炎大鼠模型结肠上皮细胞凋亡，以达到治疗作用，其中加味通腑汤高剂量治疗效果最好。
目的 观察原花青素（procyanidin，PC）对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响，并探讨其可能机制。

方法 40只雄性SD大鼠随机等分为对照组，缺血再灌注（I/R）组，原花青素低剂量组（原花青素50mg·kg-1·d-1），原花青素高剂量组（原花青素100mg·kg-1·d-1）。每天清晨灌胃，2周后结扎冠状动脉左前降支(LAD)30min再灌注120min，制作在体大鼠心肌缺血再灌注模型。再灌注后测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)；活性氧荧光探针二氢乙啶测定心肌组织中活性氧（ROS）的含量；Western blotting测定缺血心肌p53、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的蛋白表达； TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平。 结果 CK-MB水平：与对照组相比，I/R组的ck-mb明显增加（5044.72±317.53vs983.47±185.86，P＜0.01），与I/R组相比，原花青素高、低剂量剂量组的ck-mb水平降低（2907.69±260.59vs5044.72±317.53，3885.34±213.66vs5044.72±317.53，P＜0.01），与原花青素低剂量组相比，原花青素高剂量组ck-mb水平降低（2907.69±260.59vs3885.34±213.66，P＜0.01）； 并且 ROS：与对照组相比，I/R组的ROS的量明显增加（22.63±1.60vs4.58±0.67，P＜0.01），与I/R组相比，原花青素高、低剂量剂量组的ROS量降低（12.42±0.95vs22.63±1.60，16.84±1.37vs22.63±1.60，P＜0.01），与原花青素低剂量组相比，原花青素高剂量组ROS水平降低（12.42±0.95vs16.84±1.37，P＜0.01）；

P53、caspase-9蛋白表达：与对照组相比，I/R组的P53蛋白表达明显升高（65.83±2.99vs29.23±2.39，P＜0.01），caspase-9蛋白表达也明显升高（57.46±3.97vs22.93±2.11，P＜0.01），与I/R组相比，原花青素高、低剂量剂量组的P53蛋白表达水平降低（37.76±1.67vs65.83±2.99，43.48±2.64vs65.83±2.99， P＜0.01）， caspase-9的表达表达水平降低（33.12±2.52vs57.46±3.97，40.86±2.65vs57.46±3.97，P＜0.01），与原花青素低剂量组相比，原花青素高剂量组p53蛋白表达减少（37.76±1.67vs43.48±2.64， P
第一部分 www.selleckchem.cn/products/MLN-2238.html 非动情期自体移植法子宫内膜异位症大鼠模型的建立 目的：用自体子宫内膜移植法构建子宫内膜异位症大鼠模型,为进一步的实验奠定基础。 方法：健康雌性未孕SD大鼠48只,周龄8-10周,体重200-250g。参考Vernon等的方法进行自体子宫内膜移植。建模后3周进行第二次剖腹探查,观察子宫内膜种植生长情况和组织形态学变化。移植灶体积增大,呈透明结节状或囊状,内有淡黄色透明囊液积聚者视为造模成功。 结果：共做48只SD大鼠模型,有40例大鼠在移植处可见透明小囊肿,表面有血管形成。SD大鼠的内异症模型成模率为83.33%(40/48),有4例大鼠没有成模,考虑在取内膜片段时内膜面积太小或内膜与浆肌层分离不够有关,有2例大鼠死于麻醉意外,还有2例死于腹腔脓肿。其中有10例大鼠异位病灶处腹膜与大网膜粘连,有8例大鼠异位病灶与肠管粘连,余内异症病灶结构清晰,与周围组织无粘连。 结论：非动情期自体子宫内膜移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型是可行的。旨在通过这种建模方法建立理想的子宫内膜异位症动物模型,为临床治疗子宫内膜异位症提供实验模型。

第二部分 来氟米特治疗子宫内膜异位症大鼠模型的实验研究 目的：初步探讨来氟米特对EMT大鼠模型异位灶中MAPK及NF-κB的影响,采用酶联免疫法(enzyme-linked immnuno sorbent assay, ELISA)测定大鼠血清中工L-1β的含量,同时观察其对EMT大鼠异位灶体积的抑制作用及对异位内膜病理形态学的影响,并对其可能的机制进行探讨。进一步证实免疫调节剂治疗子宫内膜异位症是可行的,为子宫内膜异位症的临床治疗提供新的治疗策略和靶点以及实验依据。 方法： 1.模型建立3周后,首先抽取实验动物的尾静脉血,用ELISA法检测血清中IL-1β的水平;接着剖腹观察异位子宫内膜的生长情况,测量移植内膜病灶的大小,根据公式体积V=0.52×长×宽×高,计算体积V1,同时把造模成功的40只大鼠随机分为2组：LEF组(n=20)：给予来氟米特35mg/kg/d灌胃,每天同一时间给药,连续用药3周；模型对照组(n=20)：给予生理盐水lml/kg/d灌胃,每天同一时间给药,连续用药3周；给药期间观察大鼠的活动、饮食、排便、及体重变化等情况。 Erlotinib订单 2.喂药3周后,再次抽取实验大鼠的尾静脉血,并剖腹观察大鼠移植内膜病灶的生长情况并测量异位内膜病灶的体积V2,收集移植内膜病灶后处死大鼠：(1)V2与V1进行比较；(2)用免疫组化检测大鼠模型异位灶MAPK及NF-κB的含量；(3)采用ELISA测定大鼠血清中IL-1β的含量；(4)比较各组大鼠治疗前后的体重。 结果： 1.移植模型复制成功,造模成功率83.33%。移植灶体积增大,呈透明结节状或囊状,内有淡黄色透明囊液积聚。 2.用药后LEF组移植内膜病灶体积(54.18±17.67)小于模型对照组(98.03±9.74),差异有统计学意义(P<0.05);用药后LEF组血清IL-1β含量明低于用药前,差异有统计学意义(P0.05)。 结论： 1.LEF可使大鼠移植内膜病灶中MAPK和NF-κB的含量降低,使血清IL-1β含量降低。 2.