Moreover, in TLR2 knockout mice the main symptoms of morphine wit

Moreover, in TLR2 knockout mice the main symptoms of morphine withdrawal were significantly attenuated. Our data demonstrate that TLR2 is critical for opioid dependence and is a factor in response to innate immune response. As resveratrol derivatives, resveratrol aliphatic acids were synthesized in our laboratory. Previously, we reported the improved pharmaceutical properties of the compounds compared to resveratrol, including better

solubility in water and much tighter binding with human serum albumin. Here, we investigate the role of resveratrol aliphatic acids in Toll-like receptor Pfizer Licensed合成 Library cell assay 2 (TLR2)-mediated apoptosis. We showed that resveratrol aliphatic acid (R6A) significantly inhibits the expression of TLR2. In addition, overexpression of TLR2

in HEK293 cells caused a significant decrease in apoptosis after R6A treatment. Moreover, inhibition of TLR2 by R6A decreases serum deprivation-reduced the levels of phosphorylated Akt and phosphorylated glycogen synthase kinase 3(3 (GSK3β). Our study thus demonstrates that the resveratrol aliphatic acid inhibits cell apoptosis through TLR2 by the involvement of Akt/GSK3βpathway. TLR4 (Toll-like receptor-4), a key member of the TLRs family, has been well characterized by its function in induction of inflammatory products of innate immunity. However, the involvement of TLR4 in a variety of apoptotic events with an unknown 或者 mechanism recently interests great research focus. Our investigation found that TLR4 promoted apoptotic signaling through affecting glycogen synthase kinase-3β(GSK-3(3)

pathway in the serum deprivation (SD)-induced apoptotic paradigm. SD induces GSK-3βactivation in a pathway that leads to subsequent cell apoptosis. Intriguingly, this apoptotic cascade is amplified in presence of TLR4 whereas greatly attenuated byβ-arrestin 2, another critical molecule implicated in TLR4 mediated immune responses. Our data suggest the association ofβ-arrestin 2 with GSK-3βcontributes to the stabilization of phospho-GSK-3(3, an inactive form of GSK-3p. It becomes a critical determinant for the attenuation of TLR4-initiated apoptosis byβ-arrestin 2. Taken together, we demonstrate that the TLR4 possesses the 所以 capability of accelerating GSK-3βactivation thereby deteriorating SD-induced apoptosis;β-arrestin 2 represents an inhibitory effect on TLR4-mediated apoptotic cascade, through controlling the homeostasis of activation and inactivation of GSK-3p. Stress, either physical or psychological, can modulate immune function. However, the mechanisms associated with stress-induced immune suppression remains to be elucidated. P-arrestin 2 serves as adaptors, scaffolds, and/or signal transducers. The role ofβ-arrestin 2 in stress-induced immune suppression is not known yet. Here, we demonstrate thatβ-arrestin 2 deficiency in mice increases the sensitivity of chronic stress-induced lymphocyte reduction.

采用RT-PCR技术检测20例正常卵巢组织、19例良性卵巢上皮性肿瘤和52例上皮性卵巢癌组织中MACC1 mRNA的表达情况。 2

采用RT-PCR技术检测20例正常卵巢组织、19例良性卵巢上皮性肿瘤和52例上皮性卵巢癌组织中MACC1 mRNA的表达情况。 2.采用免疫组化和western blot技术检测20例正常卵巢组织、19例良性卵巢上皮性肿瘤和52例上皮性卵巢癌组织中MACC1、HGF和C-met蛋白的表达情况。 3.分析MACC1、HGF和C-met的异常表达与卵巢癌临床病理参数的关系。 4.探讨卵巢癌组织中MACC1、HGF和C-met的异常表达的相关性。 结果 1. MACC1 mRNA在卵巢癌组织中的表达显著高于良性肿瘤和正常卵巢组织中的表达(F=142.45,P=0.000);卵巢癌临床分期越晚,MACC1

mRNA表达越高(F=51.305,P=0.000)。 2.卵巢癌组织中MACC1、HGF和C-met蛋白的阳性率显著高于良性肿瘤和正常卵巢组织(χ2=35.845,P=0.000;χ2=24.532,P=0.000;χ2=28.893,P=0.000)。卵巢癌临床分期越晚,MACC1蛋白阳性率越高(χ2=9.707,P=0.024) 3.卵巢癌组织中MACC1、HGF和C-met蛋白的相对表达量均显著高于良性肿瘤和正常卵巢组织(F=465.790,P=0.000;F=326.289,P=0.000;F=280.871,P=0.000)。 Imatinib体内 4.在卵巢上皮性癌中,MACC1、HGF和C-met异常高表达与临床分期、组织分化和淋巴结转移相关,临床分期越晚、组织分化越差、伴随腹腔淋巴结转移的癌组织中MACC1、HGF和C-met表达越高(P
背景: 伯基特淋巴瘤(Burkitt’s

lymphoma, BL)是一种高度侵袭性的B淋巴细胞肿瘤,其发病机制尚不清楚。研究发现,在BL细胞中存在细胞周期蛋白、凋亡蛋白、癌基因表达及细胞信号传导通路等方面的异常,而确切的发病机制还有待进一步研究。RON (Recepteur d’ Origine Nantais)属于原癌基因MET的家族,该家族是受体型酪氨酸激酶大家族中一组具有独特生物学功能的原癌基因。RON在生物种属的进化中不仅隶属于保守蛋白的范畴,同时亦在哺乳动物细胞的恶性转化和肿瘤形成中发挥重要的作用。RON主要表达在人体的各种上皮细胞,如肠,肺,乳腺上皮细胞,其配体是人巨嗜细胞刺激蛋白(MSP)。RON除在大肠癌、乳腺癌和细支气管肺泡癌中异常表达外,在淋巴瘤中也呈高度的异型性表达。RON可以调节细胞的迁移,侵袭和增殖,在侵袭性表型和促进肿瘤恶性转化中发挥重要作用。ZT/F2(2F2)是来源于鼠的IG2a单抗,特异性地识别RON PARP cancer β链的11号外显子,针对RON胞外段抗原决定簇。 在BL中,RON是否存在异常表达以及其分子机制均未见报道。以及RON的单克隆抗体ZT/F2(2F2)2,在BL中能否抑制RON介导的信号传导以及致瘤效应?对于上述问题的研究,目前是不清楚的。 鉴于此,我们从三个方面对原癌基因RON在伯基特淋巴瘤中的致瘤作用及其潜在的药靶效应进行了研究。

此网站 第一部分RoN在淋巴瘤中的表达研究 目的: 研究RON在不同血液淋巴系统肿瘤组织及淋巴细胞系统细胞株中的表达情况。 方法: 通过免疫组织化学染色法检测浆细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤和T细胞淋巴瘤等患者以及正常和炎性淋巴组织的高密度组织芯片上RON蛋白的表达,计算RON阳性组织比例及RON蛋白表达阳性标记强度特征。蛋白免疫印迹法检测正常组织、炎性组织、弥漫大B细胞淋巴瘤组织、T细胞淋巴瘤组织、伯基特淋巴瘤组织、霍奇金淋巴瘤组织、慢性淋巴细胞白血病组织、骨髓瘤组织,以及用蛋白免疫印迹法检测淋系细胞株,包括阴性对照细胞株(3T3细胞株)、阳性对照细胞株(转染RON基因的3T3细胞株)、霍奇金淋巴瘤细胞株(L428细胞)、T细胞淋巴瘤细胞株(Jurkat细胞)、T细胞淋巴瘤细胞株(Molt-4细胞)、伯基特淋巴瘤细胞株(Raji细胞)、弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株(Pfeffier细胞和Farage细胞)、多发性骨髓瘤细胞株(RPMI8226细胞)中RON的表达情况。并且用原位杂交的方法检测EBER在伯基特淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤的表达情况。 结果: (1)RON在霍奇金淋巴瘤和伯基特淋巴瘤组织中表达阳性率较高(p<0.05),在其他淋巴瘤组织以及正常淋巴组织中表达较低或者不表达。进一步对RON蛋白表达阳性的组织芯片进行阳性标记强度特征分析,发现霍奇金淋巴瘤和伯基特淋巴瘤组织芯片中RON蛋白过度表达率均在30%以上(p<0.05),但是EB病毒阳性同时伴随RON阳性的比例,伯基特淋巴瘤较高(p0.05)。 (2)MSP处理72小时,能够明显刺激RON表达的Raji细胞集落形成增多p0.05),ZT/F2(2F2)也无抑制集落形成的效应(p>0.

05);6nM和12nM TL处理组穿过人工基底膜的细胞数均无明显变化(P均>0 05); 6 18 nM TL处理HT-1080

05);6nM和12nM TL处理组穿过人工基底膜的细胞数均无明显变化(P均>0.05); 6.18 nM TL处理HT-1080细胞72小时后,MMP-9基因甲基化水平明显上调(P<0.05);6nM和12 nM TL处理组MMP-9基因甲基化水平均无明显变化(P均>0.05); 7.18 nM TL处理HT-1080细胞72小时后,DNMT-1和-3A mRNA及蛋白表达明显上调(P均<0.05),DNMT-3B mRNA及蛋白表达无明显变化(P>0.05);6nM和12nM TL处理组DNMT-1、-3A和-3BmRNA及蛋白表达均无明显变化(P均>0.05)。

Cytoskeletal Signaling抑制剂 结论 1.TL抑制HT-1080细胞的增殖; 2.TL可能通过抑制MMP-9的表达及活性而抑制肿瘤细胞体外侵袭能力; 3.首次证实TL上调MMP-9基因甲基化水平; 4.首次证实TL上调DNMT-1和-3A的表达。
目的:探讨针刺对脑出血急性期脑损伤及脑水肿拮抗作用的机理。本课题通过观察“百会”透“曲鬓”头针疗法对急性脑出血大鼠脑组织形态学及脑组织中GDNF、MMP-9、AQP-4和VEGF表达的影响来揭示对脑损伤及脑水肿拮抗作用的相关机理,为治疗急性脑出血的临床方法奠定实验基础。

方法:选取健康雄性Wistar大鼠320只(其中160只大鼠用于光镜、电镜、原位杂交和免疫组化测定,另160只大鼠只用于检测脑水含量),随机分为三组:模型组、针刺组、西药组,每组100只大鼠;每组再随机分为6h、1d、2d、3d、7d五个亚组,每个亚组20只大鼠;制备脑出血模型;另设20只正常大鼠作为空白组。针刺组大鼠针刺患侧“百会”透“曲鬓”穴。在光镜和电镜下观察各组大鼠脑组织形态学改变;应用干-湿重法测定各组大鼠脑水含量;运用原位杂交及免疫组化等方法检测各组大鼠脑组织中GDNF、MMP-9、AQP-4和VEGF阳性细胞的表达。 并且 结果:1.光镜下可见模型组血肿周围脑组织坏死、水肿、炎性细胞浸润,神经细胞核固缩、空泡化,毛细血管扩张、充血,3天时最严重。针刺组脑组织逐渐修复,水肿程度较轻,炎性细胞减少。西药组与模型组比较,改变不显著。2.电镜下可见模型组神经细胞肿胀,染色质凝聚成块状或核成溶解状,线粒体肿胀、空泡化,嵴断裂,粗面内质网扩张,多聚核糖体解聚,突触结构肿胀。针刺组较模型组神经细胞肿胀减轻,线粒体结构破坏较轻,突触结构较清晰。西药组与模型组比较,改变不显著。3.各造模组大鼠术后均出现不同程度的脑水肿现象。模型组大鼠术后6h出现轻度脑水肿现象;3d脑水肿达高峰;7d仍有轻度脑水肿现象。针刺组较模型组和西药组脑水肿程度减轻,与模型组比较在1d-7d时差异明显(P<0.01);与西药组比较在1d-3d时差异明显(P<0.01)。西药组较模型组脑水肿程度减轻,在1d-3d时差异明显(P<0.01)。4.GDNF原位杂交方法检测结果:各造模组大鼠术后均出现不同程度的GDNFmRNA阳性表达增多现象。模型组大鼠术后6h即出现较明显的GDNFmRNA阳性细胞表达增多现象;1d时达高峰;2d时呈现下降趋势;7d时接近正常。针刺组GDNF的表达明显高于模型组和西药组,在相同时间点差异均有统计学意义(P<0.01),7d时仍有很高表达。西药组与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。5.MMP-9免疫组化方法检测结果:各造模组大鼠术后均出现不同程度的MMP-9阳性细胞表达增多现象。模型组大鼠术后6h即出现明显的MMP-9表达增加;2d时达高峰;3d时出现缓慢下降;7d时MMP-9表达仍高于空白组。针刺组MMP-9阳性细胞表达低于模型组和西药组,与模型组比较在相同时间点均差异明显(P<0.01);与西药组比较在6h-2d时差异明显(P<0.01)。西药组MMP-9表达在1d-7d时低于模型组(P<0.01)。6.AQP-4免疫组化方法检测结果:各造模组大鼠术后均出现不同程度的AQP-4阳性表达上升现象。模型组大鼠术后6h即出现AQP-4阳性细胞表达增多;3d时达高峰7d时仍高于空白组。针刺组AQP-4表达低于模型组和西药组,在1d-3d时差异明显(P<0.01)。西药组与模型组比较,2d时稍有差异(P<0.05)。7.VEGF免疫组化方法检测结果:各造模组大鼠术后均出现不同程度的VEGF阳性表达增多现象。模型组大鼠术后6h即出现大量的VEGF阳性细胞表达并出现第一个高峰;1d、2d出现缓慢下降态势;3d突然增高并达峰值;7d时阳性表达仍高于空白组。在1d-3d时间点,针刺组VEGF的表达明显低于模型组(P<0.01);在7d时间点,针刺组VEGF阳性表达反而较模型组明显增多(P<0.01)。西药组与模型组比较,在7d时较模型组增多明显(P<0.01)。

时间 结论:1.“百会”透“曲鬓”头针疗法在脑出血急性期能明显减轻神经细胞损伤及超微结构的破坏、减少炎性细胞浸润、降低血肿周围脑组织脑水肿程度,提示对脑组织损伤及脑水肿有拮抗作用。2.

38±145 24)、血清MDA水平(66 04±13 67 vs 0 77±0 23)明显高于无并发症组(P<0 05)。 3

38±145.24)、血清MDA水平(66.04±13.67 vs 0.77±0.23)明显高于无并发症组(P<0.05)。 3.各组HO-1表达的比较:正常对照组的外周血单核细胞HO-1mRNA(0.44±0.26)和蛋白(16.37±15.01)表达水平均低于两个糖尿病组(P<0.01),而并发症组HO-1mRNA(1.02±0.27 vs 0.77±0.23)及其蛋白(85.74±10.89 vs61.45±21.81)表达水平均显著高于无并发症组(P<0.05)。 4.相关分析显示,HO-1蛋白表达水平与HO-1mRNA(r=0.750,P=0.000)、ROS(r=0.608,P=0.000)、MDA(r=0.623,P=0.000)呈显著正相关。HO-1mRNA与MDA(r=0.449,P=0.010)、FPG(r=0.364,P=0.041)及2hPG(r=0.477,P=0.016)呈显著正相关。MDA与ROS呈显著正相关(r=0.788,P=0.000)。 5.偏相关分析显示,在控制BMI、FPG、2hPG、HbAlc影响因素后,HO-1蛋白表达仍与ROS产量(r=0.567,P=0.027)、MDA(r=0.613,P=0.015)呈显著正相关,MDA与ROS产量呈显著正相关(r=0.911,P=0.000)。 Selleck NVP-AUY922 【结论】 1.初诊T2DM患者的血糖、血清MDA、外周血单核细胞ROS产量及HO-1表达均显著高于正常对照组,提示初诊T2DM可能由于机体抗氧化防御机制的代偿性增高仍不足以对抗高血糖引起的氧化损伤,导致机体处于氧化应激状态。 2.并发症组的血糖水平、氧化应激指标及HO-1表达均显著高于无并发症组,提示高血糖及其引起的氧化损伤可能参与了初诊T2DM患者慢性并发症的发病机制,在排除BMI及血糖水平等因素的影响后,氧化应激指标仍与HO-1表达呈显著正相关,提示HO-1作为一种应激反应蛋白,在糖尿病所致氧化应激情况下代偿性表达增高,但仍不足以对抗该氧化应激。提示除严格控制血糖外,通过适当的手段诱导HO-1高表达将是极具潜力的糖尿病慢性并发症防治的新靶点之一。
研究背景

动脉粥样硬化是慢性炎症性疾病。高脂血症时,血浆低密度脂蛋白(LDL)进入动脉壁氧化成为氧化低密度脂蛋白(oxLDL),被巨噬细胞吞噬后转化为泡沫细胞,发生动脉粥样硬化。既往研究证实,天然属性IgM亚类抗体通过封闭oxLDL与巨噬细胞结合的表位,抑制巨噬细胞对oxLDL的吞噬,从而降低泡沫细胞与动脉粥样硬化斑块的形成。临床研究发现血清高浓度脂多糖/LPS与动脉粥样硬化发病密切相关,但机理尚不十分明确。

目前还没有关于高脂饮食饲养的正常小鼠是否能够诱导产生天然属性抗氧化低密度脂蛋白IgM亚类抗体,从而能影响动脉粥样硬化发生发展;体内或者体外应用这些天然抗体是否有保护作用;以及在LPS血清浓度升高提高动脉粥样硬化的发病过程中,这些天然抗体是否参与尚未见报道。基于以上,我们设计并完成了相关实验。 find protocol 目的: 1.制备并鉴定天然属性的抗LDL及抗oxLDL IgM亚类抗体,为研究LDL和oxLDL及其天然抗体在动脉粥样硬化发生发展中的作用奠定基础。 2.探讨天然属性的抗oxLDL IgM亚类抗体对巨噬细胞与oxLDL结合的影响,了解其在动脉粥样硬化发病机制中的作用。 3.以apoE基因敲除小鼠为研究对象,复制动脉粥样硬化模型,研究天然属性抗oxLDL IgM亚类抗体对apoE基因敲除小鼠血脂、血oxLDL和主动脉粥样硬化斑块形成的影响。 4.探讨脂多糖活化对巨噬细胞与oxLDL结合的影响,了解脂多糖活化对天然IgM亚类抗体在动脉粥样硬化中的保护作用的破坏机理,进一步了解天然抗体在动脉粥样硬化中的作用。 方法: 1.给予饲养在无特殊病原体条件下Babl/c小鼠高胆固醇饮食,4周后取脾细胞直接与SP2/0细胞融合,以纯化的LDL及oxLDL为抗原对阳性杂交瘤细胞生长孔进行间接ELISA筛选。鉴定杂交瘤上清的免疫球蛋白亚类、亚型,进而采用免疫印迹、免疫沉淀法和ELISA法对获得的抗体进行免疫学反应性鉴定。 2.体外培养小鼠巨噬细胞系;纯化IgM抗体3A6并将其与Na125I标记的oxLDL作用形成免疫复合物。通过油红O染色及细胞结合同位素标记oxLDL,以观察3A6对巨噬细胞对oxLDL吞噬的封闭作用。 已经 3. 18只8周龄apoE基因敲除小鼠随机分为对照组(腹腔注射PBS/2ml/周);5G8组:(腹腔注射天然属性抗低密度脂蛋白IgM亚类抗体5G8/10μg/g体重,2ml/周)和3A6组(腹腔注射天然属性抗氧化低密度脂蛋白IgM抗体3A6/10μg/g体重,2ml/周)。高脂饲料饲养16周后行处死,分离血清,测定血清脂质含量及血浆oxLDL含量,小鼠原位灌注固定,石蜡包埋,连续切片,HE染色,对各个切面的动脉粥样斑块面积进行分析。

4. LPS刺激巨噬细胞后,通过油红O染色及细胞结合同位素标记oxLDL,观察IgM抗体3A6在LPS活化巨噬细胞情况下对oxLDL吞噬地影响。分别利用TLR4的中和性单抗, p38MAPK阻抑剂SB203580和NF-κB阻抑剂PDTC作用及Fcα/μ受体进行RNA干扰后,利用实时定量RT-PCR和流式细胞术观察Fcα/μ受体mRNA转录及蛋白表达情况。 结果: 1.杂交瘤细胞分泌的抗LDL及抗oxLDL的天然抗体通过ELISA法被筛选出来,可以与LDL或oxLDL发生高亲和力结合,经过4次克隆化,最终获得2株稳定分泌天然属性抗LDL抗体,命名为5G8和2H7,及1株稳定分泌天然属性抗oxLDL抗体,命名为3A6,3株抗体均属于IgM亚类,无交叉反应,可以满足免疫印迹、免疫沉淀、ELISA等实验要求。 2.天然属性抗oxLDL IgM亚类抗体3A6,在体外试验中能够抑制巨噬细胞与铜氧化的LDL的结合,从而降低泡沫细胞的形成。 3. apoE基因敲除小鼠高脂饲料喂养16周后,三组之间的各项血脂及oxLDL含量无明显差异;HE染色结果显示:三组均出现动脉粥样硬化斑块,但3A6组可显著降低胸主动脉斑块面积和校正面积,与对照组和5G8组比较差异有显著性。 4. 3A6不能抑制脂多糖活化的巨噬细胞对铜氧化的LDL的结合,并且促进铜氧化的LDL介导的泡沫细胞的生成。我们分别利用3A6 F(ab′)2、Fcα/μ受体RNA干扰或者利用不识别oxLDL的IgM抑制了oxLDL-IgM与脂多糖活化的巨噬细胞的结合,意味着Fcα/μ受体对这个过程是起作用的。同时,脂多糖促进Fcα/μ受体的表达有时间和剂量的依赖性,TLR4特异性中和抗体的封闭作用可减少LPS的作用。另外,脂多糖诱导的p38MAPK磷酸化和NF-κB 65的转位促进了Fcα/μ受体表达的上调。当使用p38MAPK阻抑剂SB203580和NF-κB阻抑剂PDTC,可降低了Fcα/μ受体表达的上调。 结论: 1.抗LDL及抗oxLDL IgM亚类单抗的制备为研究天然抗体在体内脂质代谢和相关心脑血管疾病如动脉粥样硬化等发生发展中的作用提供了重要的研究工具。 2.

00%和63 49%,而在癌旁正常组织中阳性表达率分别为30 00%和25 00%。P38和JNK在肾透明细胞癌中的表达明显高于癌

00%和63.49%,而在癌旁正常组织中阳性表达率分别为30.00%和25.00%。P38和JNK在肾透明细胞癌中的表达明显高于癌旁正常组织(p0.05)。对肾透明细胞癌中P38和JNK进行Spearma相关性分析呈正相关(r=0.484,p
骨髓造血组织功能抑制是肿瘤放疗与化疗的常见的副作用,也是高剂量核辐射事故的首要死亡原因,临床上表现为急性和慢性骨髓抑制。急性骨髓抑制即刻出现严重的症状,导致辐射事故受害者与放疗患者的死亡,或者使肿瘤放疗病人的病情恶化。慢性骨髓抑制起病隐匿,病情迁延并且难以康复,而且,由于临床对急性骨髓抑制的治疗掩盖这种难以逆转的骨髓损伤。由于骨髓功能抑制难以治愈,急需对其发病机制进行研究,为骨髓功能抑制的有效治疗与预防提供依据。众多证据表明造血细胞凋亡引发急性骨髓抑制,而造血干细胞的衰老被认为是骨髓长期抑制的主要原因,多项研究表明电离辐射激活p38 还有 MAPK诱导造血细胞凋亡和衰老。 本研究以P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580为研究对象,研究其对全身照射小鼠造血细胞的辐射保护作用,并初步探讨其作用的机制。包括三部分实验:1)SB203580对造血祖细胞和造血干细胞保护作用的观察:小鼠随机分为对照组、照射组及SB203580给药组,以6.0

Gγ137Csγ射线全身均匀照射SB203580给药组和照射组的C57BL/6小鼠。收集并计数外周血红细胞、白细胞和血小板,以及单侧股骨骨髓有核细胞;骨髓细胞半固体培养法检测骨髓有核细胞增殖能力,卵石样造血集落形成实验检测造血干细胞增殖能力。2)SB203580的抗氧化作用:收集小鼠骨髓有核细胞,分组同上,照射组与SB203580给药组细胞进行1Gγ体外照射,照射之后孵育过夜,酶标仪检测细胞内活性氧水平。3)SB203580对造血干细胞样细胞p16 mRNA表达的影响:磁珠分离小鼠系标记阴性骨髓造血细胞,分为对照组、照射组、照射+放线菌素D组、照射+SB203580组、照射+SP600125组,细胞照射剂量为4Gγ。培养后去除悬浮细胞,消化贴壁细胞后重新贴壁取非贴壁细胞为干细胞样细胞,提取RNA, AR-A014418 Real-time PCR检测p16与p21 mRNA的表达情况。 本研究观察到SB203580给药组外周血白细胞、血小板的数量分别比照射组高111.8%和157.7%(P<0.05),CAFC阳性细胞形成率较照射组高146.6%(P<0.01)。SB203580处理组体外受照骨髓有核细胞内活性氧较照射组低56.2%(P
目的:了解C型钠尿肽前体氨基末端肽(amino-terminal

proCNP, NTproCNP)在正常儿童及原发性甲状腺功能减低症、特发性中枢性性早熟(ICPP)等生长异常儿童血清水平,探讨NTproCNP与身高、骨龄、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、骨钙蛋白(osteocalcin ,OC)、骨碱性磷酸酶(bone specific alkaline 或者 phosphatase, BAP)的相互关系,从而确立血清NTproCNP对评价儿童骨骼生长潜能的临床价值。 方法:所选61例儿童(其中原发性甲状腺功能减低症22例,ICPP 21例,正常儿童18例)均来自于我院儿科生长发育专科门诊。测定其身高,采用CHN法评定手、腕部骨化指标,计算骨龄。采集上述儿童8:00-9:00时空腹取静脉血4ml,室温下静置15分钟,待血液凝固后,3000r/min离心5min,分别留取血清,置-20℃冰箱保存。采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清NT-proCNP、IGF-1、OC、BAP水平。SPSS14.0统计软件进行统计学分析。对资料进行方差齐性及正态分布检验,计量数据以均数±标准差(x±s)表示,两组间比较用t检验,两变量之间相关性用Pearson相关分析。 结果:1、正常儿童血清NTproCNP、IGF-1、OC、BAP水平分别为22.47±16.62pmol/L,364.15±191.34ng/ml,97.59±30.62ng/ml,143.36±32.52 U/L;身高、骨龄、年龄分别为137.54±15.27cm, 10.41±2.42岁,10.27±2.36岁;NTproCNP与其他血清学指标和生长发育指标之间无明显相关性,相关系数分别为r=-0.062,r=-0.007,r=-0.236,r=-0.131,r=-0.103,

r=-0.115,均P>0.05。IGF-1与年龄、骨龄和身高有高度正相关性。2、原发性甲状腺功能减低症儿童血清NTproCNP、IGF-1、OC、BAP水平分别为22.93±23.37pmol/L,257.88±100.59ng/ml,98.06±32.79ng/ml,120.67±47.37 U/L,身高、骨龄、年龄分别为128.57±11.23cm, 8.82±2.38岁,11.66±2.23岁;NTproCNP与其他血清学指标和生长发育指标之间无明显相关性,相关系数分别为r=-0.167,r=0.315,r=0.421,r=-0.215, r=-0.241,r=0.315,均P>0.05,血清IGF-1与年龄、骨龄和身高有高度正相关性。3、ICPP儿童血清NTproCNP、IGF-1、OC、BAP水平分别为11.75±4.85pmol/L,573.38±229.55ng/ml,86.17±18.23 ng/ml,116.96±27.18U/L,身高、骨龄、年龄分别为144.84±11.10cm, 12.09±1.76岁,9.78±1.90岁;NTproCNP与IGF-1和骨龄呈负相关,相关系数分别为r=-0.456(p=0.038),r=-0.541(p=0.011),IGF-1与身高、年龄、骨龄呈高度正相关。4、原发性甲减儿童与正常儿童血清NTproCNP、IGF-1、OC、BAP水平无明显差异,均P>0.

检测IBS-D患者结肠内容物上清液刺激后人结肠上皮细胞BDNF的表达改变;2 探讨IBS-D患者结肠内容物上清提取液诱导人结肠上皮

检测IBS-D患者结肠内容物上清液刺激后人结肠上皮细胞BDNF的表达改变;2.探讨IBS-D患者结肠内容物上清提取液诱导人结肠上皮细胞BDNF的表达的分子机制。第二、三部分探讨肠粘膜BDNF过表达介导IBS腹痛发生的分子机制,研究包括:1.探讨IBS患者肠粘膜中BDNF及其受体Tropomyosin receptor kinase B (TrkB)表达的改变,EGC网络相关标记物和分泌因子的改变,并探讨这些可能存在的改变与IBS腹痛症状的相关性(第二部分)。2.应用IBS-D患者粪便上清诱导的小鼠内脏高敏感模型,以及EGC功能障碍小鼠模型,并借助于BDNF+/-小鼠和BDNF+/+小鼠对比,探讨BDNF与EGC激活的关系以及EGC网络改变在内脏高敏感发生中的直接作用。最后通过体外EGC培养和肠系膜神经放电实验,探究BDNF对EGC作用的相关分子机制,以及BDNF自身和EGC激活分别对肠感觉传入神经兴奋性和机械敏感性的直接作用(第三部分)。方法第一部分依据功能性胃肠病罗马III标准连续纳入22例IBS-D患者和17例正常对照者,收集每位受试者新鲜粪便,经处理后提取上清液(Fecal

INK1197 价格 supernatants, FSN),应用azo-casein法测定上清液蛋白水解酶活力。应用丝氨酸蛋白酶抑制剂验证IBS-D FSN升高的蛋白酶活性依是否赖于丝氨酸蛋白酶。FSN分别刺激6小时和24小时提取细胞总RNA,应用实时荧光定量PCR检测BDNF和PAR-2 mRNA表达;同时收集细胞培养液上清,应用ELISA测定上清BDNF浓度。提取总蛋白,Western blotting检测PAR-2表达。应用人结肠腺癌来源的上皮细胞系Caco-2行体外培养,应用靶向PAR-2基因的小干扰RNA(siRNA)沉默Caco-2细胞PAR-2基因,并在接受IBS-D FSN和对照FSN刺激24小时后检测PAR-2和BDNF蛋白的表达。结合PAR-2拮抗剂,p38 MAPK和NF-κB抑制剂,检测IBS-D FSN对以上两种信号通路蛋白表达的影响。选用野生雄性C57BL/6小鼠,应用IBS-D FSN结肠灌注诱导小鼠结肠高敏感。结合BDNF拮抗剂,丝氨酸蛋白酶抑制剂和PAR-2拮抗剂,通过结直肠扩张(Colorectal distention,

CRD)和腹壁肌电实验检测小鼠内脏敏感性变化。收集灌注部位的小鼠结肠组织,Western blotting和免疫组化染色检测BDNF的表达和分布。第二部分根据罗马III标准入选IBS患者和正常对照者,每位IBS患者完成一份肠道功能评分量表,进行腹痛严重程度和频率评分。收取IBS和正常对照者粪便,提取上清。每位受试者接受结肠镜检查,并在直肠乙状结肠交界处收取6块活检标本,2块用于常规组织学检查和免疫组织化学,2块用于western 寻找更多 blotting,2块用于透射电镜检查。应用免疫组织化学检测活检标本结肠粘膜中BDNF和GFAP表达,荧光双标检测TrkB受体和P物质(Substance 时间 P, SP)在EGC和肠神经纤维中的表达。Western blotting进一步定量BDNF, GFAP和TrkB在肠粘膜中的表达,并分析与腹痛评分的相关性。应用透射电镜观察EGC形态学改变,并定量EGC中异染色质,线粒体,糖原颗粒,高尔基体和核糖体数目的改变。第三部分应用IBS-D患者粪便上清以及BDNF+/-C57BL/6小鼠和同窝出生BDNF+/+野生小鼠构建模拟IBS的内脏高敏感模型。结合丝氨酸蛋白酶抑制剂,BDNF拮抗剂和EGC代谢抑制剂,通过CRD和腹壁肌电实验检测小鼠内脏敏感性检测变化。收集灌注部位结肠组织,应用western

blotting和免疫组织化学和免疫荧光染色检测结肠粘膜BDNF, GFAP, TrkB和SP的表达。应用人重组BDNF (r-HuBDNF)体外刺激大鼠肠胶质细胞系,结合PLC-γ1抑制剂和TrkB拮抗剂进一步检测TrkB-PLCγ1信号通路是否参与BDNF对EGC的激活,以及EGC激活后SP表达的改变。应用大鼠空肠肠系膜神经放电实验检测EGC培养液上清和r-HuBDNF对肠系膜传入神经兴奋性放电和机械敏感性的影响,进一步验证EGC激活和BDNF对肠道感觉传入神经兴奋性和敏感性的直接作用。结果第一部分1.IBS-D患者粪便上清液中丝氨酸蛋白酶活性明显升高IBS-D FSN总蛋白酶活性为1461±143.1 U/mg蛋白,显著高于正常对照者(438.6 ± 70.2 U/mg蛋白)。应用丝氨酸蛋白酶抑制剂FUT-175预先孵育IBS-DFSN则可显著抑制其升高的总蛋白酶活性。此结果证实IBS-D患者粪便上清中升高的蛋白酶活性主要依赖于丝氨酸蛋白酶。2. IBS-D患者粪便上清诱导Caco-2细胞BDNF mRNA和蛋白表达升高Caco-2细胞BDNF mRNA表达在IBS-D FSN刺激后显著升高。而FUT-175预处理的IBS-D FSN组BDNF mRNA表达明显受到抑制。与mRNA结果一致,ELISA检测BDNF蛋白表达在IBS-D FSN刺激后同样显著升高,FUT-175则同样明显抑制IBS-D FSN对BDNF蛋白表达的诱导作用。3.

064/1 004;SER(Dq):1 079/1 047。流式细胞术:两细胞的凋亡率与照射剂量呈正比。在H2228组细胞中G0/

064/1.004;SER(Dq):1.079/1.047。流式细胞术:两细胞的凋亡率与照射剂量呈正比。在H2228组细胞中G0/G1期细胞阻滞现象明显,H3122细胞各周期细胞比率未见明显变化。Western Blot法:应用克唑替尼联合时STAT3的磷酸化过程受到阻滞。H2228细胞株阻滞现象更为明显。结论克唑替尼对NSCLC

H2228及H3122细胞株均有放射增敏作用,对H2228细胞株的放射增敏效果更加明显。
棘皮动物微管结合蛋白-间变性淋巴瘤激酶(echinoderm Tofacitinib浓度 microtubule-associated prote i n-l ike4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)在肺癌中已成为第二个最重要的驱动致癌基因,在4%~6%的肺腺癌中EML4-ALK已经成为第一个可以靶向治疗的融合基因位点。伴随着ALK分离探针荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)试剂盒的上市,克唑替尼已经被批准治疗ALK阳性的进展期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。然而,一种靶向药物的成功主要取决于一种敏感且特异的筛选实验方法来检测分子药物作用的靶点。以作者的经验看,用RTPCR来检测EML4-ALK,比用FISH和免疫组化(immunohistochemistry,IHC)方法更敏感,结果更可靠。尽管通过FISH检测ALK已经经过大量的临床实验验证,然而该方法在技术层面仍存在许多具有挑战性的问题,而通过IHC和RT-PCR方法检测ALK仍需要临床进一步的探索。
随着肿瘤生物学、基因组学和分子生物学的发展,靶向治疗的研究和临床应用已成为当前肺癌领域的热点。本文对国内外有关非小细胞肺癌分子靶向治疗的靶点和主要药物进行了综述。首先概括了表皮生长因子受体抑制剂,其次总结了肿瘤血管生成抑制剂,包括抗血管内皮生长因子单克隆抗体、血管内皮抑素和金属蛋白酶抑制剂的研究,最后对新的靶点EML4-ALK抑制剂的研发进行了跟踪。未来肺癌靶向治疗药物的开发和临床应用会达到更加成熟的阶段。
间变性淋巴瘤激酶(anaplastic

PF-02341066数据表 lymphoma kinase,ALK)融合基因是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的驱动基因,存在此基因表达的ALK阳性NSCLC已被认为是NSCLC的一种分子亚型,具有较独特的临床病理特征和预后,更为重要的是,ALK抑制剂对于此类晚期患者具有明显的疗效。因此,如何诊断此类患者便成为了病理诊断工作中相当重要的部分。目前ALK阳性NSCLC的诊断方法较为多样且各有优缺点,如何挑选最佳方法用于肺癌样本的常规诊断成为临床病理所关注的重点。国内外已有较多权威指南或共识推荐了诊断方法及其流程或相关标准。基于此,本文对ALK阳性NSCLC的诊断方法及特殊检测样本类型做一综述。
肺癌是全球发病率和致死率最高的疾病之一。非小细胞肺癌(non-small

许多 cell lung cancer,NSCLC)是肺癌最为常见的组织学类型。近些年,分子生物学的发展让我们对NSCLC的认识从组织水平深入到分子水平。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变和间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)融合基因是NSCLC患者最为重要的两个肿瘤驱动基因。针对它们的酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)显著改善了带有这类分子特征的NSCLC患者的生存。不幸的是,目前几乎所有针对这两种突变的初始靶向治疗都会不可避免地出现耐药问题。有关EGFR-TKIs的耐药机制及其应对策略已经有很多文章进行阐述,而对于ALK TKIs治疗后出现耐药问题的机制和相应的治疗策略还未曾有过详细的综述。因此,本文针对一代ALK TKI(克唑替尼)治疗ALK融合基因阳性的NSCLC患者(ALK+NSCLC)后引起耐药问题的机制和有关后续治疗策略做一综述。
背景与目的继表皮生长因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变之后,间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)基因重排的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)已经成为了肺癌的又一重要的临床分型。在临床上需要选择一种特异,灵敏并且价廉的方法准确快速地找到ALK阳性的NSCLC患者。为此本研究探讨增强免疫组化法(ventana-IHC,V-IHC)检测ALK重排的临床可行性。方法利用V-IHC检测172例NSCLC患者ALK重排,阳性患者以荧光原位杂交法(fluorescence in situ hybridization,FISH)验证。结果 172例NSCLC患者中有12例为ALK阳性,经过FISH验证,11例患者为阳性,符合率为91.

05);②线粒体活性氧族检测结果:EMT异位病灶组织线粒体的荧光强度达低于EMT在位内膜和对照组内膜,差异具有统计学意义(p<0

05);②线粒体活性氧族检测结果:EMT异位病灶组织线粒体的荧光强度达低于EMT在位内膜和对照组内膜,差异具有统计学意义(p<0.05);③miR-183在EMT组的异位病灶的表达低于在位和对照组子宫内膜,差异具有统计学意义(p0.05);④靶基因EGR1在EMT组异位病灶表达高于EMT组在位内膜和对照组子宫内膜,差异具有统计学意义(p0.05)。

并且 结论:EMT患者异位病灶组织细胞的miR-183表达显著下调,在位内膜组织细胞miR-183的表达无显著变化,并且异位病灶组织细胞的靶基因EGR1表达显著上调,这说明失巢后的病灶组织细胞削弱了其对靶基因EGR1的负性调控作用,导致EGR1在EMT异位病灶组织细胞表达上调,进而诱发失巢的子宫内膜细胞产生抵抗失巢凋亡的能力,使子宫内膜细胞在盆腔内种植,并形成相应病灶,引发一系列临床症状。
目的:肺癌是当今全球最常见的恶性肿瘤之一,统计资料显示其发病率呈逐年上升趋势,已有报道表明肺癌的发病率和死亡率位于世界恶性肿瘤首位。而随着对肿瘤发病机制及其生物学行为的不断深入,人们越来越多的将治疗的焦点集中于特异性高、不良反应轻的分子靶向药物,其中EGFR-TKI在治疗NSCLC中已取得较为可喜的疗效。而新近发现了EML4-ALK融合基因中另一种高活性的酪氨酸激酶类型,ALK激酶抑制剂crizotinib已被证实能够抑制EML4-ALK融合基因阳性细胞的生长。本实验旨在研究NSCLC中EML4-ALK突变情况,及其与临床特征、生存的关系,进而为非小细胞肺癌患者的个体化治疗、预后判断提供较好的依据。

方法:收集自2010年10月至2013年11月于福建医科大学附属协和医院就诊,经组织病理学证实的NSCLC患者。满足病理诊断后,完成EML4-ALK基因突变检测共82例。按要求记录所有患者的临床资料,其中包括患者的年龄、性别、吸烟史、病理类型、肿瘤转移、临床分期或术后分期及EGFR突变情况等,并通过阅览病例、电话随访等方式随访其生存情况。数据统计分析采用SPSS19.0统计分析软件中用x2检验进行各种率的分析,对于理论频数小于5的则采用Fisher确切概率法检验。所有统计结果以P<0.05认为有统计学意义。采用Kaplan-Meier方法估计组间生存率和绘制累计生存函数曲线,组间对比使用log-rank检验,比较基因突变情况与患者生存的关系,以P<0.05认为有统计学意义。 结果:1、初次诊断为NSCLC并行EML4-ALK及EGFR基因检测患者82例。其中男性44例,女性38例;年龄36-82岁,平均年龄60.51±10.24岁;无吸烟史患者53例,有吸烟史患者29例;I期20例,II期3例,Ⅲ期23例,Ⅳ期患者36例。腺癌61例,鳞癌14例,大细胞癌1例,其他类型6例。检测出EML4-ALK基因突变9例。 为什么 2、男性患者突变率(6.8%)与女性患者突变率(15.8%)无统计学差异(P=0.291)。年龄≥60岁患者突变率(11.9%)与年龄<60岁突变率(10.0%)无统计学差异(P=0.782)。在吸烟突变率(0%)与不吸烟突变率(17.0%)存在统计学差异(P=0.023)。其中腺癌突变率(13.1%)、鳞癌基因突变率(0%)、大细胞癌基因突变率(0%)、其它类型基因突变率(16.67%),四者比较无统计学差异(P=0.782)。在出现肿瘤转移基因突变率(11.67%)与无肿瘤转移基因突变率(9.1%)无统计学差异(P=0.737)。I期基因突变率(10.0%)、II期基因突变率(0%)、III期基因突变率(13.0%)、IV期基因突变率(11.1%),四者比较无统计学差异(P=0.846)。EGFR基因突变率(2.6%)与EGFR突变率(18.2%)有统计学差异(P=0.033)。

更多 3、本研究至2014年4月30日截止,共有9例失访,全为EML4-ALK基因突变阴性,其余病例都有完整随访资料,随访时间为6-37个月,其中共有29例死亡,其中EML4-ALK基因突变4例,无基因突变25例。无突变组与突变组的生存中位时间分别为23个月(95%CI,22个月-24个月)和21个月(95%CI,18个月-24个月),P=0.769,两者无统计学差异。 结论:1、本实验共完成了82例NSCLC患者的EML4-ALK融合基因检测,其中突变数为9例,突变率为10.97%,其中双位点突变3例,具体为E13;A20突变为9例,E6; A20突变1例,E20; A20突变2例。 2、EML4-ALK融合基因突变多倾向于女性、不吸烟、腺癌与EGFR基因无突变的患者。而年龄、疾病分期和肿瘤转移间与EML4-ALK融合基因突变无统计差异。 3、EML4-ALK融合基因突变尚不能作为评估非小细胞肺癌预后的独立因素。
目的:晚期实体瘤患者行以卡铂为基础的化疗方案是否增加静脉血栓栓塞的风险目前尚没有定论,本文旨在对以卡铂为基础的化疗对晚期实体瘤患者发生静脉血栓栓塞风险进行系统评价。方法:计算机检索PubMed、EMbase、Web of Science、 CBM、CNKI和WangFang Data,并辅以文献追溯的方法收集国内外发表的相关文献,收集以卡铂作为化疗方案的随机临床试验,检索时限从1990年1月1日至2013年12月31日。由两位研究者按纳入和排除标准筛选文献并评价纳入研究质量后,应用RevMan5.2软件进行对数据进行Meta分析。结果:(1)共纳入20个随机对照试验,4863例晚期实体瘤患者。卡铂组与非卡铂组相比,不增加晚期实体瘤患者静脉血栓栓塞风险,有统计学意义[RR=0.48,95%CI(0.26,0.90), P=0.

324-390),其亲和指数Kd值约2nM,表明其亲和力较差。另外,scFv78分子量小,容易经肾脏排泄,血浆半衰期短,限制了其在

324-390),其亲和指数Kd值约2nM,表明其亲和力较差。另外,scFv78分子量小,容易经肾脏排泄,血浆半衰期短,限制了其在早期特异性诊断和治疗等方面的应用。 本实验为了提高TEM1特异性抗体的亲和力与延长其在血液中的半衰期。我们构建了一系列新的scFv78多价抗体衍生物,包括二聚体Fc融合蛋白(来自hu

IgG1)(78Fc),四聚体CH2融合蛋白(78CH2),二聚体CH3融合蛋白(78mb)和二聚体的CH1-铰链区融合蛋白(78F(ab’)2),以便从中发现温度稳定和血清稳定性更好以及亲和力更高的抗体;通过瞬时转染293F细胞并且对培养上清进行亲和纯化获得这些蛋白;利用活细胞ELISA对这些蛋白进行亲和力的分析;同时,在动物体内对上述5个蛋白的血液代谢动力学进行检测;并利用近红外荧光成像技术对筛选出的最佳候选蛋白进行了体内成像检测,利用细胞杀伤实验和成管实验,观察其体外选择性地杀伤TEM1阳性表达细胞的效果。实验结果显示:与我们前期工作发现的scFv78相比,本实验构建的78Fc亲和力(Kd=0.14±0.01nM)增加了约15倍;动物体内代谢动力学结果表明78Fc的慢相半衰期约5.1小时;体内功能分析表明78Fc不针对Naive鼠的正常器官,而只是针对体内TEM1+肿瘤;近红外荧光成像技术结果显示78Fc在鼠体内只靶向TEM1阳性表达的细胞;最后78Fc-MMAE可以在体外选择性地杀伤TEM1阳性表达细胞。

PR-171数据表 综上所述,我们可以初步认为,通过将scFv78和Fc段融合后,提高了该蛋白的稳定性及亲和力,血液动力学结果表明78Fc有相对长的血清半衰期,可以用来做成像的探针。体内近红外荧光成像技术,体外细胞杀伤实验与成管实验与也证实其具有较高的特异性。因此,我们认为TEM1是一个成像与治疗的候选基因,可能为卵巢癌和其它癌症的靶向诊断与治疗提供新的思路;而78Fc可以为卵巢癌的早期诊断和治疗提供可能。
目的: 通过沉默或激活PC-9细胞(携带EGFR基因19外显子突变的NSCLC细胞株)中的内源性FGF2表达,同时添加吉非替尼与外源性FGF2,诱导PC-9细胞产生针对EGFR-TKIs快速获得性耐药的状态,筛选出FGF2介导的EGFR-TKIs快速获得性耐药的细胞模型,以进一步明确FGF-2信号通路介导EGFR-TKIs快速获得性耐药这一全新的耐药模式中所涉及的分子机制。 研究方法: 1.构建编码靶向FGF2基因shRNA及基于PAS (PCR-based Accurate Synthesis)的慢病毒载体,包装慢病毒,感染人肺癌细胞PC-9,以荧光定量PCR检测FGF2基因在mRNA水平的变化,以western blot检测FGF2蛋白表达水平的变化,筛选出FGF2沉默表达/高表达的细胞株; Temsirolimus数据表 2.PC-9细胞针对EGFR-TKIs快速获得性耐药状态的诱导及鉴定:对FGF2沉默表达(PC-9-FGF2-KD)或过表达细胞株(PC-9-FGF2-OE)单用吉非替尼或联用外源性FGF2,筛选出耐药细胞株。进一步用相关的生物学指标验证其耐药属性,生物学指标检测包括:(1)以MTS法检测细胞增殖情况;(2)以AnnexinV/PI凋亡检测试剂盒检测时的细胞凋亡情况,以PI单染法检测细胞周期分布情况;(3)软琼脂实验测定细胞锚定非依赖生长的影响;(4)Transwell法测定细胞迁移和侵袭能力;(5)实时荧光定量PCR法检测获得性耐药相关突变T790M突变和cMET扩增拷贝数。

IKK16 3.以Affymetrix人全基因组3′IVT芯片检测PC-9-NC+FGF2、PC-9-FGF2-KD+FGF2、PC-9-FGF2-OE+FGF2,以及空白对照的PC-9细胞的差异基因表达改变。 结果: 1.采用慢病毒载体介导的转基因方法构建了FGF2基因沉默和FGF2基因高表达的PC-9细胞,Western Blot检测进一步在蛋白水平对细胞内FGF2的表达改变进行了验证,成功筛选出稳定的FGF2基因沉默(PC-9-FGF2-KD)和FGF2基因高表达(PC-9-FGF2-OE)的PC-9细胞株; 2.在FGF2基因过表达的PC-9细胞株(PC-9-FGF2-OE)及给予外源性FGF2的PC-9细胞株中均观察到细胞活力的增加,提示内外源性的FGF2刺激均有可能诱导出PC-9细胞针对EGFR-TKIs的快速获得性耐药;细胞生物学检测进一步表明PC-9-FGF2-OE+FGF2细胞株中出现显著的细胞凋亡率下降、细胞增殖分裂加快、细胞迁移和侵袭能力增强等耐药生物学行为,证实该细胞模型为FGF2介导的EGFR-TKIs快速获得性耐药的稳定的NSCLC细胞模型; 3.芯片检测发现PC-9-FGF2-OE+FGF2组细胞与PC-9-NC+FGF2组相比较而言,主要产生了PI3K-AKT通路、MAPK通路、ErbB通路和VEGF通路的上调,其中PI3K-AKT信号通路对FGF2介导的EGFR-TKIs快速获得性耐药的发生机制可能具有重要意义。 结论: 1.成功构建出FGF2介导的EGFR-TKIs快速获得性耐药的稳定的NSCLC细胞模型,为进一步揭示FGF-2信号通路介导EGFR-TKIs快速获得性耐药的分子机制奠定了研究基础; 2.

However,a significant immune reaction was detected when these cel

However,a significant immune reaction was detected when these cells were co-cultured with allogenous PBMCs.Furthermore,no significant expression of perforin or granzyme B was detected following stimulation of autogenous immune effector cells(CD3+CD8 T cells,CD3+CD8+T cells or CD3 CD56+NK cells)by

NPCs in both PBMC and T cell co-culture systems.These results suggest that human iPSC-derived NPCs may not initiate an immune response in autogenous transplants,and thus set a base for further preclinical evaluation of human iPSCs.
Nodal分子是胚胎发育中一个重要的形态发生素分子(Morphogen),属于转化生长因子-β(Transforming 更多 growth factor-β,TGF-β)超家族成员。它在维持胚胎干细胞的未分化状态、诱导中胚层和形成内脏器官左右不对称性等过程中发挥重要作用[1]。Nodal基因在胚胎发育早期高表达,而在胚胎晚期呈低表达,在成年正常个体中仅表达于少数几种生殖系统组织[2]。最近研究表明Nodal分子在多种恶
Neural

cells differentiated from pluripotent stem cells(PSCs), including both embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells, provide a powerful tool for drug screening, disease modeling and regenerative medicine. High-purity oligodendrocyte progenitor Chk 抑制剂 cells(OPCs) and neural progenitor cells(NPCs) have been derived from PSCs recently due to the advancements in understanding the developmental signaling pathways. Extracellular matrices(ECM) have been shown to play important roles in regulating the survival, proliferation, and differentiation of neural cells. To improve the function and maturation of the derived neural cells from PSCs, understanding the effects of ECM over the course of neural differentiation of PSCs is critical. During neural differentiation of PSCs, the cells are sensitive to the properties of natural or synthetic ECMs, including biochemical composition, biomechanical properties, and structural/topographical features. This review summarizes recent advances in neural differentiation of humanPSCs into OPCs and NPCs, focusing on the role of ECM in modulating the composition and function

of the differentiated cells. Especially, the importance of using three-dimensional ECM scaffolds to simulate the in vivo microenvironment for neural differentiation of PSCs is highlighted. Future perspectives including the immediate applications of PSC-derived neural cells in drug screening and disease modeling are also discussed.
精原干细胞是雄性体内可以永久维持的成体干细胞,它具有自我更新和分化的能力,保证了雄性个体生命过程中精子发生的持续进行,从而实现将遗传信息传递给下一代。精原干细胞不仅可在体外实现长期培养或诱导分化为各级生精细胞,并且可在特定条件下将其诱导去分化成为多能性干细胞。同样,这种多能性干细胞如同胚胎干细胞,可被诱导形成造血细胞、神经元细胞、肌细胞等多种类型细胞。鉴于其独具的生物学特性,精原干细胞在揭示精子的发生机制、治疗雄性不育和转基因动物等研究中具有重要价值。该文对精原干细胞在生物学特性、纯化培养、移植、体外诱导分化及其相关调控方面的各项研究进行了小结,综述了近年来的研究历程和最新研究成果。
目的观察Notch通路对乙醛激活大鼠肝星状细胞株HSC-T6增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响。方法 还有 HSC-T6细胞常规培养及乙醛处理,加入Notch途径特异性阻断剂DAPT和TGF-β/ALK5途径特异性阻断剂SB-431542,分为空白组、单阻断组及双阻断组;MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白(TIMPⅠ)、纤维黏连素(FN)的表达;RT-PCR检测Notch途径节点分子RBP-JK、Hes1及效应蛋白Smad3表达量;Western印迹检测细胞内效应蛋白α-SMA的表达。结果 MTT检测发现乙醛刺激明显增强HSC活性(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05);RT-PCR检测Hes1乙醛刺激后上调明显(P<0.05),阻断组RBP-JK、Hes1及Smad3明显下调(P<0.05),双阻断组Hes1及Smad3下调更明显(P<0.05);Western印迹检测结果显示乙醛刺激明显促进α-SMA表达(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.