2.统计方法实验至少重复3次,所有数据均以平均值±标准差表示。多组之间的比较采用单因素方差分析和Dunnett t检验进行统计学分析。P<0.05(*)具有统计学差异,P<0.01(**)具有显著性的统计学差异。结果1、AHL诱导成骨细胞发生线粒体依赖的内源性凋亡与对照相比,AHL(20-50μM)逐渐降低成骨细胞CCK-8的OD值,具有浓度依赖性,但随着时间延长Y-27632 IC50,OD值有所回升;TUNEL法荧光标记凋亡细胞,随着AHL浓度升高,绿色荧光标记的阳性凋亡细胞数逐渐增多;Western检测凋亡标志蛋白,可见Cleaved-Caspase-3和Cleaved-PARP的蛋白表达量在3 h到达高峰,并具有浓度依赖性;荧光检测AHL在成骨细胞内定位,可见绿色荧光标记的AHL与红色荧光标记成骨细胞线粒体影像重确认细节合;JC-1检测线粒体膜电位,AHL降低了线粒体膜电位,具有浓度依赖性;绿色免疫荧光标记细胞色素c,红色荧光染料标记成骨细胞线粒体,可见AHL组细胞色素c脱离线粒体遍布整个胞质区;分离线粒体和胞浆蛋白,Western检测AHL作用下细胞色素c蛋白的表达,可见细胞色素c蛋白在线粒体中表达降低,在胞浆中表达升高。2、不同浓度AHL对成骨细胞分点击此处化有双向调节作用50μM AHL抑制了成骨细胞ALP染色、ALP活性、矿化结节的产生,并下调了成骨分化功能基因Runx2、Osterix、Bsp和OCN的m RNA表达;30μM AHL在3 d时抑制了ALP活性,但在7-17 d时,却促进了ALP活性及矿化结节的产生,并上调了Runx2、Osterix、Bsp和OCN的m RNA表达。其余浓度的AHL组,成骨细胞ALP活性及成骨分化功能基因存在一定范围内的正负向波动。