1益气养阴活血方为导师临床经验用方,首次对其作用机制做相关实验研究。 1.2从ERK通路血流动力学和非血流动力学两方面效应探讨药物的作用机制。 2、临床研究 2.1观察中医药治疗DN的远期疗效(≥2年)。 2.2从多方面观察指标更全面地反映整体综合疗效。 2.3设定了不同的蛋白尿和肾功能终点事件作为次要结局指标,更早期反映疗效差异。
皮肤创伤愈合是一个复杂的生物学过程,它启动一系列复杂的生物学事件,包括炎症、组织新生及组织重构[1]。虽然许多研究采用不同的方法治疗皮肤创伤修复,但愈合质量低、附属器官不可再生等依然是皮肤创伤愈合过程中的关键问题。目前,皮肤移植是修复大面积皮肤损伤的最有效方法。其中,应用骨髓间充质干细胞(Bone Selleckchem BI6727 mesenchymal stem cells, BMSCs)治疗重症皮肤创伤展现出良好的应用前景。已有研究结果证实BMSCs在促进创面愈合方面起到积极的作用。Badiavas将骨髓间充质干细胞移植到深Ⅱ度烧伤创面,发现其明显促进创面的愈合[2]。付小兵等将BMSCs移植至猪深度烧伤创面,发现创面愈合速度明显加快,表皮增厚,真皮神经纤维增多,大大改善了创面愈合质量[3]。文献报道BMSCs还参与表皮、汗腺及创面血管的重建[4]。这些研究结果表明BMSCs是非常好的皮肤组织工程种子细胞。 创伤愈合的各个阶段都有生长因子的参与和调控,生长因子对治疗慢性难愈合皮肤创口和大面积烧伤创面有着广阔的应用前景[5]。活化素(Activin)是转化生长因子-β(transforming

growth factor β, TGF β)超家族成员,成熟组织内,Activin信号可调节伤口愈合和表皮再上皮化,在皮肤创伤愈合过程中具有重要的作用[6]。而且Activin和其拮抗剂卵泡抑素(Follistatin)共同调节毛囊的发育和周期循环[7]。课题组前期研究发现Activin B在In vitro水平上通过JNK/MAPK信号通路促进角朊细胞的迁移,从而加速创伤修复过程[8,9，10]；近期研究显示：在In vivo水平上,Actvin B通过RhoA-JNK-cJun信号通路调节伤口愈合,并且在毛囊的再生和毛囊细胞的增殖方面起着关键的调控作用[11]。

干细胞从定居的部位进入到相应的组织器官内才能实现该部位的再生和修复,而细胞迁移的过程是受趋化因子、趋化因子受体系统所调控的[12,13]。在创伤愈合的过程中,Activin/TGF-β是趋化因子之一,可以通过不同的方式作用于炎症及修复细胞,调节细胞的趋化性迁移、增殖分化和细胞外基质合成与分泌[14]。研究发现BMSCs表面高度表达Activin受体,而且Activin/TGF-β通路下游信号分子Smad3的缺失导致BMSCs迁移能力降低[15.16,17],提示Activin/TGF-β信号可能在调控BMSCs的生物学功能上发挥重要作用。因此鉴于BMSCs能加速创伤愈合并促进皮肤血管及汗腺等组织的再生,而Activin B能促进BMSCs的迁移,我们假设Activin CP868596 B可能改善了BMSCs介导的创伤修复,为了验证假设我们提出将Activin B和BMSCs联合起来,观察其治疗创伤愈合的作用,并在细胞水平上探索其可能的信号机制。本研究为临床治疗创伤修复提供了新的理论及实验依据。 (一)目的 探讨Activin B联合BMSCs对治疗大鼠皮肤创伤愈合的影响。 (二)方法 24只健康成年SPF级SD大鼠随机分为四个组：PBS对照组,BMSCs组,Activin B组和Activin B联合BMSCs组。10%水合氯醛(0.003ml/g)腹腔注射麻醉,SD大鼠背部两侧剪毛后用蜂蜜脱毛冻蜡脱毛,制作面积为1cm2正方形切口,深达皮下。术后动物自由进食、水。术后每天用细Mark笔将各组未愈合创面面积描记在透明薄膜上,利用数码相机在相同的条件下对描记下的图像拍照,IPP图像分析系统计算未愈合创面面积,计算创面愈合率,愈合率=(原始创面面积—未愈合的创面面积)/原始创面面积×100%。术后3d、7d、14d、21d取伤口周围0.5cm皮肤,PBS冲洗,4%多聚甲醛固定,PBS冲洗,乙醇逐级脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。切片(5μm),二甲苯脱蜡,乙醇逐级复水,常规的苏木精伊红(hematoxylin and eosin, H&E)染色。 (三)结果 与Activin

B、BMSCs组及PBS组相比,ActivinB联合BMSCs组可以显著促进SD大鼠皮肤创面愈合,移植后第7d、14d,Activin B联合BMSCs组创面愈合率显著高于Activin B、BMSCs组及PBS组。移植后第12d,Activin B联合BMSCs处理组的12个创口(n=6)已完全闭合,而Activin 和 B、BMSCs组及PBS组伤口尚未完全闭合。Activin B组和BMSCs组于移植后14d创面完全愈合,而PBS组创面完全闭合发生于第16d。第14d H&E结果显示Activin B、BMSCs组及Activin B联合BMSCs处理组已经完成再上皮化,而且与PBS组和BMSCs组相比,Activin B组和Activin B联合BMSCs可以促进皮肤毛囊的再生,提示Activin B联合BMSCs不但可以促进急性创伤的愈合还可以促进伤口部位毛囊的再生。(四)结论 以上研究结果提示Activin B联合BMSCs能够促进大鼠皮肤创伤愈合。 (一)目的 在细胞(In vitro)水平及载体(In vivo)水平上探讨Activin B通过何种途径诱导BMSCs从而促进创伤愈合。 (二)方法 在细胞(In vitro)水平上利用免疫组化观察K15,K19的表达；利用细胞划痕实验、细胞趋化实验、细胞的Actin结构观察实验记录细胞迁移情况；在载体(In vivo)水平上利用Brdu标记观察创伤愈合过程中细胞增殖的变化。 (三)结果 1.K15,K19的表达：24孔板中放入coverglass,第4代BMSCs接种其中,每孔细胞含量约1×104个,分别用含5%胎牛血清的DMEM(PBS组)和5%胎牛血清+10ng/mlActivin B的DMEM (Activin B组)培养。从培养第一天起开始直到第21d,隔天一次,取出coverglass,进行细胞免疫化学检测。结果显示：PBS组和Activin B组相比,K15,K19的表达均未见显著性差异。 2.