028)；血管内皮生长因子A在两组的相对表达量分别为0.6904±0.1032和0.7411±0.1007,两组血管内皮生长因子A的表达量无显著性差异(t=-0.786,P=0.454)。结膜下注射50μmol/L SB203580能抑制磷酸化p38表达；而对血管内皮生长因子A的表达无明显影响。 4.病理学及免疫组织化学染色结果术后7d,50μmol/L SB203580组角膜各层排列整齐,新生血管管腔细小、密度低,炎性细胞浸润少, CD31染色结果：强表达于新生血管管腔内皮细胞,排列尚规整,角膜内皮细胞弱表达；而生理盐水组角膜大量血管样结构,管腔较大、较多,炎性细胞浸润多且分布无规则,进一步CD31染色：大量阳性细胞分布于新生血管,排列杂乱,部分炎性浸润细胞亦有较强表达。
结论 1.结膜下注射50μmol/L SB203580显著抑制大鼠角膜新生血管生长。 2.结膜下注射50μmol/L SB203580抑制磷酸化p38的表达,即抑制p38的激活；而对大鼠角膜VEGFA的表达无显著影响。 3.SB203580抑制炎症反应,抑制炎性细胞在角膜的浸润。 4.进一步证实p38信号转导通路和大鼠角膜新生血管调控相关。 5.靶向p38阻断可能是角膜新生血管治疗的新策略。 第四部分可溶性血管内皮生长因子受体2对血管化大鼠角膜磷酸化p38表达的影响 目的 采用可溶性血管内皮生长因子受体2阻断血管内皮生长因子与其受体的结合,研究其是否能抑制大鼠角膜新生血管生长,并进一步探讨其是否参与p38信号转导通路的激活,最终分析p38信号转导通路参与调控角膜新生血管是否与血管内皮生长因子途径相关。 方法 1.建立大鼠角膜新生血管模型采用缝线法建立SD大鼠右眼角膜新生血管模型,将缝线后的大鼠随机分为两组：可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组和生理盐水结膜下注射组,每组8只。 BMS-907351浓度 2.结膜下注射依据分组从术后第1日开始用药,分别结膜下注射不同药物,每日1次,共7d。 3.临床观察每日在显微镜下观察角膜缝线后角膜透明度、上皮完整性、缝线数量以及是否存在角膜感染,并重点观察角膜新生血管情况。 4.计算后缝线后7d两组角膜新生血管面积显微镜下测量角膜新生血管的长度并计算角膜新生血管面积。 5.Western Blot检测两组大鼠角膜p38和磷酸化p38的表达缝线后7d,各组分别随机选取5只,摘取角膜,收集角膜蛋白,采用Western Blot方法检测各组角膜p38和磷酸化p38的表达。 6.病理学及免疫荧光检查各组随机选取3只角膜,常规多聚甲醛固定,行病理学检查；修复抗原后行免疫荧光检测p38和磷酸化p38的分布。
7.统计学分析采用SPSS13.0软件分析,计量资料以均数±标准差表示,组间比较采用T检验,所有统计推断均采用双侧检验,检验水准a=0.05。 结果 1.动物观察生理盐水对照组,在观察过程中,睫状充血明显,新生血管管腔较粗且生长较快,缝线后7日,大量密集网状新生血管跨越角膜缝线处。而可溶性血管内皮生长因子受体2组在观察 Androgen Receptor Antagonist细胞系 2.角膜新生血管面积结果可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组和生理盐水注射组大鼠角膜新生血管面积分别为3.87±0.73和6.94±0.92mm2,可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组显著低于生理盐水结膜下注射组(t=-7.343,P=0.000)。 3.Western Blot结果可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组和生理盐水组大鼠角膜p38的相对表达量分别为0.6179±0.1334和0.6038±0.1484,两组p38表达无显著性差异(t=0.158,P=0.878)；两组磷酸化p38的相对表达量分别为0.2667±0.0642和0.4771±0.1171,可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组显著低于生理盐水注射组(t=-3.523,P=0.008)。结膜下注射可溶性血管内皮生长因子受体2抑制p38激活。
4.病理学和免疫荧光检查结果术后7d,可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组角膜各层排列整齐,新生血管管腔细小、密度低；而生理盐水组角膜见大量血管样结构,管腔较大、较多,炎性细胞浸润杂乱。两组p38免疫荧光检测分布基本一致,多位于细胞浆；而磷酸化p38强表达在生理盐水组,定位均在细胞核内。 已经 结论 1.结膜下注射可溶性血管内皮生长因子受体2抑制大鼠角膜新生血管生长。 2.结膜下注射可溶性血管内皮生长因子受体2抑制大鼠角膜血管化进程中p38信号转导通路的激活,下调磷酸化p38的表达。 3.p38与血管内皮生长因子所介导的信号转导过程既互相联系、偶有协同,又相对独立、各自作用；在纷繁复杂的细胞信号转导网络中,二者可能不是简单的线性排列关系。
目的：炎症因子白介素6（IL-6）在包括糖尿病视网膜病、葡萄膜炎等多种眼科炎症性疾病中起重要作用，可能成为下一个潜在的治疗靶点。视网膜Müller细胞是眼内贯穿视网膜全层的重要细胞，是各种炎症因子分泌的主要来源，对眼内炎症的调节起到了重要作用。然而，视网膜Müller细胞IL-6的表达及其调控机制尚未清楚。本实验目的在于借助于视网膜Müller细胞系（MIO-M1）细胞，深入研究并阐述视网膜Müller细胞IL-6的表达及其调控机制。 方法：为找到引起视网膜Müller细胞IL-6表达的最强潜在因素，本实验用不同的刺激：IL-1β（10ng/mL），TNF-α（10ng/mL），IL-6（10ng/mL），IL-8（10ng/mL），VEGF（10ng/mL），IFN-γ（10ng/mL），Glucose（50mM），Mannitol（50mM）处理MIO-M1细胞24h，Western Blot技术检测MIO-M1细胞内IL-6的蛋白改变。 为进一步明确IL-1β对视网膜Müller细胞在mNRA水平和蛋白水平对IL-6的调控作用，不同浓度的IL-1β （0,0.1,1,10ng/mL）刺激MIO-M1细胞24h或者IL-1β（10ng/mL）刺激MIO-M1细胞不同时间（0,2,6,12,24h），随后分别用Western Blot技术检测细胞内IL-6的mRNA和IL-6蛋白表达改变。不同浓度的IL-6（0,0.