0软件进行统计分析,用χ2检验判断Nodal表达在各组表达的组间差异,P75%计4分；2)染色强度分为淡黄色,棕黄色,棕褐色三个等级,依次计分1-3分,阴性为成积积分为0者,只要成积积分≥1即可判断为阳性,其中阳性中：1-2分,3-4分,>4分,依次判定为弱阳性(+),阳性(++),及强阳性(+++)。对照为已知的子宫内膜癌强阳性切片,一抗体的阴性对照以PBS代替。 实验结果： 1、正常前列腺组织未见Nodal蛋白表达,表达率为0%(0/20)；良性前列腺增生组织中呈部分阳性表达,表达率为33%(10/30),表达部位位于增生活跃的上皮细胞,前列腺癌肿瘤组织均阳性表达,阳性表达病理染色表现为细胞胞浆内棕黄色的阳性染色颗粒,且其表达率达到100%,(40/40),随着病理分级及临床分期逐渐增加,胞浆内染色颗粒逐渐加强,直至棕褐色,说明Nodal蛋白强表达于分化程度低及临床分期晚的前列腺癌组织中。 2、Nodal蛋白的阳性表达在前列腺癌中随着病理分级的增高及临床分期的增加呈正相关性的改变：G3-4>G2>G1(P均T1-T2期(P均
在世界范围内,前列腺癌的发病率在所有男性恶性肿瘤中位居第二位,死亡率在男性恶性肿瘤中位居第六位。前列腺癌发病率有明显的地域和种族差异,发达国家发病率高于发展中国家。亚洲前列腺癌的发病率虽然远远低于欧美国家,但近年来呈上升趋势,且增长比欧美发达国家更为迅速。早在1941年,雄激素剥夺治疗(ADT)便作为前列腺癌的主要治疗方式,通过阻碍雄激素与雄激素受体结合从而达到治疗目的。但这种治疗方式存在一个问题：一部分经过ADT治疗的激素依赖性前列腺癌(ADPC)经过1-2年的标准治疗后转变为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。在此过程中,研究发现肿瘤细胞的化疗抵抗、转移、侵袭及复发能力增强,这可能与肿瘤干细胞(CSCs)增多和上皮-间质转化(EMT)的发生密切相关。然而有关此方面的证据仍较少。
Doxorubicin临床试验 Stem Cell Compound Library 第一部分ADT激活TGF-β1信号通路 目的：探讨ADT与TGF-β1信号通路的关系 方法： 1.研究人群分为三组：ADPC、ADT和CRPC组。 2.免疫组化检测上述三组中TGF-β1表达。 结果：三组结果比较,在CRPC组肿瘤标本中,TGF-β1表达增高。 结论：ADPC经ADT治疗后转变为CRPC的过程中激活了TGF-β1信号通路。 第二部分TGF-β1诱导EMT发生的同时增加了CD44的表达 目的：研究TGF-β1对EMT和CD44的作用 方法：体外培养激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP)和去势抵抗性前列腺癌细胞株(CWR22RV1),经TGF-β1(5ng/ml)分别刺激上述细胞后,应用蛋白免疫印迹法(Western
blot)分别检测0、3、6、9小时CD44、p-Smad2和Smad2的表达水平；应用Western blot分别检测0、12、24、36、48小时E-cadherin、 vimentin的表达水平。 GSK1210151A 结果： 1.TGF-β1增加了CD44的表达。 2.
TGF-β1对EMT的发生有促进作用。 结论：TGF-β1诱导EMT发生的同时增加了CD44的表达。 第三部分TGF-β1通过调节CD44诱导EMT 目的：TGF-β1诱导EMT机制的研究 方法： 1.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,将上述细胞分别分为四组。先将SB431542(TGF-β1受体抑制剂)加入第三、第四组,2小时后再向第二、第四组加入TGF-β1(5ng/ml),3小时后提取蛋白,应用Western blot检测四组中CD44、 p-Smad2和Smad2的表达水平。 2.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,将上述细胞分别分为三组：对照组、实验组1、实验组2。向对照组转入sicontrol质粒,向实验组1转入siCD44质粒处理24小时,向实验组2转入siCD44质粒处理48小时,分别提取蛋白,应用Western blot检测三组中CD44表达水平。 3.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,将上述细胞分别分为四组。先将sicontrol质粒转入第一、第二组,将siCD44质粒转入第三、第四组,48小时后向第二、第四组加入TGF-β1(5ng/ml),24小时后分别提取蛋白,应用Western blot分别检测CD44、E-cadherin和Vimentin表达水平。 结果： 1.在LNCaP和CWR22RV1细胞中,单加TGF-β1组与对照组比较CD44表达水平明显增高；单加SB431542组和SB431542、TGF-β1两者都加组分别与对照组比较,CD44表达水平无明显改变。 2.在LNCaP和CWR22RV1细胞中,转染质粒后CD44表达水平由高到低依次为转入sicontrol质粒组、转入siCD44质粒处理24小时组、转入siCD44质粒处理48小时组。 3.在LNCaP和CWR22RV1细胞中,单加TGF-β1组与对照组比较,CD44和Vimentin表达水平增高,E-cadherin表达水平降低；转入siCD44质粒组和转入siCD44质粒、TGF-β1两者都加组分别与对照组比较,CD44、Vimentin表达水平降低、E-cadherin表达水平增高。 结论：TGF-β1通过上调CD44表达水平诱导EMT的发生。 第四部分前列腺癌鼠模型建立和体内靶向抑制CD44阻碍前列腺癌转移 目的：建立前列腺癌鼠模型并体内研究靶向抑制CD44与前列腺癌转移的关系。 方法： 1.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,用盐霉素(salinomycin)分别处理0、24、48小时后分别提取蛋白,应用Western blot检测CD44表达水平。 2.建立前列腺癌鼠模型,随机分为实验组(腹腔注射盐霉素)和对照组(腹腔注射玉米油)。取原位瘤及转移灶,比较两组间转移情况。 3.免疫组化检测上述两组CD44、E-cadherin和Vimentin表达水平。 结果： 1.盐霉素抑制CD44表达。 2.实验组转移灶数量明显少于对照组。 3.