阻塞性黄疸患者皮肤角质形成细胞脑啡肽表达水平升高 黄疸组患者与对照组患者的皮肤组织免疫组化分析显示，与对照组相比，黄疸组患者皮肤表皮棘细胞层和基底层角质形成细胞中甲硫氨酸基脑啡肽的表达水平升高。 2. PAR-1受体拮抗剂降低BDL大鼠基础痛阈值、血浆和皮肤角质形成细胞的脑啡肽表达水平 获悉更多 按双重结扎胆总管的方法建立大鼠BDL模型，BDL大鼠建模后6至8天，基础热痛阈值与机械性痛阈值均较术前基线值升高。在BDL大鼠建模后4至7天，连续梯度剂量皮下注射PAR-1受体拮抗剂SCH79797(0，0.3，1μg·kg-1·day-1)，观察发现PAR-1受体拮抗剂SCH79797皮下注射（1μg·kg-1·day-1，4d）可显著降低BDL大鼠建模后第8天的基础热痛阈值与机械性痛阈值，而相同剂量PAR-1受体拮抗剂对假手术组的基础热痛阈值与机械性痛阈值均无影响。
BDL大鼠模型建立8天后，Western blot和PCR检测结果表明，与假手术对照组比较，皮肤组织脑啡肽原mRNA和蛋白表达在BDL组显著升高。PAR-1受体拮抗剂SCH79797皮下注射（1μg·kg-1·day-1，4d）可显著降低BDL组大鼠皮肤组织脑啡肽原的表达。大鼠后肢掌侧皮肤免疫组织化学分析的结果表明，甲硫氨酸脑啡肽强烈表达于BDL大鼠皮肤表皮棘层至基底层的角质形成细胞，而PAR-1拮抗剂处理（1μg·kg-1·day-1，4d）可显著减少BDL组大鼠皮肤角质形成细胞中甲硫氨酸-脑啡肽的表达。 放射免疫方法测定大鼠建模后第8天血浆甲硫氨酸脑啡肽浓度，BDL组大鼠较假手术组大鼠显著升高。PAR-1受体拮抗剂处理组（1μg·kg-1·day-1，4d）血浆甲硫氨酸脑啡肽浓度较BDL组显著降低，而PAR-1受体拮抗剂亚剂量组（0.3μg·kg-1·day-1，4d）血浆甲硫氨酸脑啡肽浓度与假手术组比较，差异无统计学意义。 3.凝血酶通过作用于PAR-1受体诱导角质形成细胞脑啡肽的表达 10%DMEM常规培养HaCaT细胞，凝血酶以0.1，1和5U/ml的浓度分别孵育6和24h。RT-PCR检测观察凝血酶孵育对角质形成细胞脑啡肽原、阿黑皮素原和强啡肽原mRNA表达的影响，结果表明凝血酶对脑啡肽原mRNA的表达呈剂量和时间依赖性增加，5U/ml凝血酶浓度孵育24h，可增加HaCaT细胞脑啡肽原mRNA表达约4.5倍。凝血酶在5U/ml的浓度孵育HaCaT细胞6或24小时对阿黑皮素原和强啡肽原mRNA的表达无影响。
由于凝血酶还可以激活PAR-3和PAR-4受体，因此我们使用TFLLR-NH2，PAR-1的特异性激动肽来证明凝血酶作用于PAR-1受体的特异性。TFLLR-NH2（100μM）孵育6小时能够诱导HaCaT细胞脑啡肽原蛋白表达的量增加约3倍，而PAR-1受体拮抗剂SCH79797（5μM）与凝血酶（5U/ml）或TFLLR-NH2（100μM）共同孵育可消除后两者对HaCaT细胞脑啡肽原蛋白表达的诱导作用。 Akt抑制剂 4. PAR-1受体激活通过ERK1/2和p38MAPK通路诱导角质形成细胞脑啡肽的表达
凝血酶(5U/mL)和PAR-1受体特异性激动剂TFLLR-NH2(100μM)孵育6小时可诱导HaCaT细胞ERK1/2和p38的磷酸化，且这一磷酸化作用可以被PAR-1受体拮抗剂SCH79797(5μM)所阻断。为验证ERK1/2和p38磷酸化是否参与了PAR-1激活诱导脑啡肽表达的过程，HaCaT细胞预先分别孵育ERK1/2和p38磷酸化抑制剂U0126（10μM）和SB203580（20μM）后，给以相同剂量凝血酶和PAR-1受体特异性激动剂TFLLR-NH2刺激。Westhern blot实验显示U0126和SB203580减弱了凝血酶和PAR-1受体激动剂诱导的脑啡肽原表达，表明PAR-1受体激活通过ERK1/2和p38MAPK通路磷酸化从而诱导角质形成细胞脑啡肽的合成。 Pictilisib 综上所述，本研究的结果表明皮肤角质形成细胞中脑啡肽的表达在阻塞性黄疸患者及胆道梗阻模型中均升高，这一结果可能与阻塞性黄疸病人基础痛阈值升高相关。我们的实验数据还表明，阻塞性黄疸病程中升高的凝血酶可通过作用于PAR-1受体而诱导角质形成细胞内源性脑啡肽合成的增加，这可能是胆汁淤积性肝脏疾病中外周组织内源性阿片肽水平升高的机制之一。同时，我们的实验结果提示，PAR-1受体激动剂是一个潜在的镇痛药物，而PAR-1受体拮抗剂可以被用来治疗胆汁淤积患者内源性阿片肽升高相关的并发症。
背景 动脉粥样硬化(AS)是多因素相互作用所导致的复杂病变,其中脂质代谢的异常和血管壁的慢性炎症是AS发生和发展过程中的重要特征。很多炎症因子可以同时参与炎症反应和脂质代谢的调节。正五聚蛋白3(PTX3)是近年来新发现的一个炎症因子,属于长链正五聚蛋白,与动脉粥样硬化和冠状动脉疾病密切相关。研究发现修饰后的脂蛋白可以诱导人血管平滑肌源性泡沫细胞表达PTX3,并且很多研究证明了在人动脉粥样硬化斑块进展期,动脉粥样硬化斑块脂核中的巨噬细胞/泡沫细胞表达大量的PTX3。尽管目前有很多研究发现PTX3在富于脂质的巨噬细胞中呈高表达,但其是否对巨噬细胞的脂质摄取和流出产生影响及相关机制仍不清楚。 目的 通过研究PTX3对人和小鼠巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)与胆固醇流出的影响及其潜在机制,探讨其在动脉粥样硬化中的作用。方法 体外培养人巨噬细胞系THP-1细胞和小鼠巨噬细胞系RAW264.