经热和bFGF诱导后的表皮细胞出现蛋白、形态、功能和基因水平的改变。免疫细胞化学检测显示细胞诱导后CK19和β1整合素染色呈阳性;

经热和bFGF诱导后的表皮细胞出现蛋白、形态、功能和基因水平的改变。免疫细胞化学检测显示细胞诱导后CK19和β1整合素染色呈阳性;流式细胞仪检测结果显示CK19和β1整合素阳性率在诱导前分别为0.00%和0.00%,诱导后7d和14d

CK19阳性率增加到83.01%和90.42%,β1整合素阳性率增加到83.63%和93.88%;Western Nutlin-3a供应商 bloting检测显示,表皮细胞在去分化诱导前CK19和β1整合素均无表达,诱导后7d和14d CK19和β1整合素出现不同程度的表达。Giemsa染色和透射电镜观察显示细胞诱导后形态发生改变,表现为体积减小,细胞器数目减少,核浆比增大。增殖和再分化能力的改变体现在诱导后的表皮细胞能形成克隆,在滋养层培养条件下可以形成复层生长,并能够在体外构建出包括基底层和基底上层在内的表皮结构。基因水平的改变表现在与角质化相关的基因下调和与有丝分裂相关的基因上调。3.体外激活β-catenin通路可以促使表皮细胞表达CK19和β1整合素,克隆形成和进入细胞分裂周期;而通过siRNA抑制β-catenin的表达可以阻断由热和bFGF诱导的去分化过程。免疫荧光染色显示,Smad4敲除小鼠表皮细胞核内β-catenin表达增强,CK14和Ki67表达阳性细胞大量多层分布于表皮组织内。4.MSCs和SGCs在体外均呈克隆样生长;MSCs表达CD29、CD44、CD71、CD105和CD166,不表达造血干细胞标志CD34和CD45,以及汗腺细胞标志CK19和CEA。加入诱导培养基后MSCs可以向骨和脂肪细胞分化;培养的SGCs表达CK19和CEA;SGCs经高温损伤后,大多数细胞的细胞间连接消失;BrdU或GFP标记的MSCs和损伤的SGCs共培养5d后,部分MSCs表达汗腺细胞标志CK19或CEA;发汗实验和形态学观察证实将具有汗腺细胞表型的干细胞移植于裸鼠创面后,能显著促进受损汗腺的修复与再生。人体移植试验表明,经种植诱导的汗腺细胞后,病人创面愈合部位呈现出汗功能,对照部位发汗实验阴性,形态学检测显示创部真皮浅层经汗腺移植后有大量CEA阳性细胞,结构类似正常汗腺组织。汗液成分分析结果显示治疗处收集的汗液与正常皮肤处收集的汗液具有类似的pH值,渗透压和化学组分。

结论:1.在特定损伤环境和特定因素的诱导下,已分化的表皮细胞可去分化为表皮干细胞或表皮干细胞样细胞。2.表皮细胞的去分化过程与β-catenin/Wnt信号通路有关。3.骨髓间充质干细胞可以在体外成功诱导为汗腺细胞,经移植后,在创面能形成具有功能的汗腺组织。
目的:探讨喜树碱类衍生物与celecoxib联合用药的体外和体内的抗肿瘤作用及机制,同时观察celecoxib对CPT-11引起裸鼠腹泻及体重的影响。 以及 方法:以MTT法检测结肠癌细胞系在联合应用celecoxib后对喜树碱及其衍生物的化学敏感性的改变;流式细胞术检测celecoxib与喜树碱联合用药后HT-29细胞的凋亡比率和细胞周期的变化;Western Blot法检测环氧合酶-2(COX-2)以及凋亡相关蛋白(Bcl-2、Caspase-3、P53)的表达。以HT-29细胞裸鼠移植瘤模型观察celecoxib与CPT-11联合应用的体内抗肿瘤作用,并且观察celecoxib对CPT-11引起腹泻及体重减轻的影响。 结果:Celecoxib可以显著降低三种喜树碱类衍生物对四种人结肠癌细胞系的IC_(50)值,并且这种降低的程度与COX-2的表达密切相关。在HT-29细胞,celecoxib和CPT的联合应用使其凋亡率达到51.4%,而CPT单独使用的凋亡率为24.4%(p<0.01)。同时,celecoxib可以使CPT处理组的G0/G1期细胞增加并降低S期和G2/M期的细胞比例(p<0.01)。Celecoxib和CPT的联合应用可以降低COX-2和Bcl-2的表达,增加Caspase-3和P53的表达。HT-29细胞裸鼠移植瘤实验中,celecoxib(60mg/kg)与CPT-11(25mg/kg)的联合应用使肿瘤生长明显抑制,其抑制率为78.77%(与对照组相比(p<0.01),与CPT-11(25mg/kg)组相比也有显著差异(p<0.05)。同时celecoxib可以明显减轻CPT-11引起腹泻症状,降低其腹泻评分(p<0.01),并降低腹泻的发生率(p<0.05);另外,celecoxib可以明显缓解CPT-11引起的裸鼠体重减轻(p<0.05)。

Ruxolitinib半抑制浓度 结论:Celecoxib可以增强CPTs的体外、内的抗肿瘤活性,这种作用可能与增加细胞凋亡和细胞周期阻滞作用有关。另外celecoxib可以减轻CPT-11引起的腹泻,并缓解CPT-11引起的体重下降。 恶性肿瘤的生长和转移与肿瘤区域的血管密切相关,肿瘤区域的新生毛细血管是肿瘤赖以生长和生存的物质基础,肿瘤细胞需要新生血管为迅速生长的肿瘤提供营养和排出代谢废物。早在七十年代初就有人提出把抑制肿瘤血管形成作为肿瘤治疗的一个途径,随后这种以肿瘤血管为靶标的治疗策略——肿瘤血管靶向治疗(Tumor vascular targeting therapy)逐步发展成为当今肿瘤领域研究的主攻方向之一。因此肿瘤血管生成的分子基础也成了当今肿瘤生物学与分子生物学研究中最活跃的领域。大量研究表明,VEGF/VEGF-R信号传导通路在肿瘤血管生成中占有非常重要的地位,本研究的第二部分就是围绕血管生成过程中的关键性的信号传导通路展开,以寻找新型的血管生成抑制剂。本部分内容包括两个方面,其中第一方面研究了新型的VEGF-R抑制剂——苯胺酞嗪类化合物FVE-3的抗血管生成作用。第二方面探讨了RXR选择性激动剂LGD1069的抗肿瘤作用以及对肿瘤诱导的血管生成的影响。结果如下: 一、新型苯胺酞嗪类化合物FVE-3的抗肿瘤及抗血管生成作用 1、FVE-3的抗肿瘤作用 在体外研究中,FVE-3可抑制多种不同来源的肿瘤细胞的生长,如人结肠癌细胞HT-29、HCT-8,人卵巢癌细胞A2780,人胃腺癌细胞BGC-823,人非小细胞肺癌细胞A549,人宫颈癌细胞HeLa,人乳腺癌细胞MCF-7,人黑色素瘤细胞A375,人脐静脉内皮细胞HUVEC和ECV/304以及小鼠黑色素瘤B16、B16-BL6以及转染MEKK1基因的细胞m1B16及空载体细胞pB16等,MTT法测得其半数抑制浓度IC_(50)在2.25~9.17μmol/L之间。用SRB方法观察了FVE-3对三株人结肠癌细胞系HT-29、HCT-8和HCT-116细胞生长的影响,结果表明FVE-3可不同程度地抑制这三种结肠癌细胞系的生长,其半数抑制浓度GI_(50)在1.06~4.3μmol/L之间。同时FVE-3还可以剂量依赖性地抑制结肠癌细胞HT-29和HCT-8的集落形成能力。体内研究表明,FVE-3对小鼠Lewis肺癌及肝癌H22的生长均有一定的抑制作用,并呈一定的剂量效应关系,抑制率分别为28.0%(p<0.05)、53.6%(p<0.01)和45.1%(p<0.05)、50.4%(p<0.

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