三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导的HSC细胞中Smad4细胞内定位的影响 GDC-0449订单 TGF-β1可诱导Smad4表达增加,并促进其入核；三种MAPK抑制因子均可抑制Smad4入核,但对其表达无显著影响。 3Western blot法检测三种MAPK抑制因子对TGF-p,诱导HSC细胞内Imp7/Imp8蛋白表达的影响 3.1Western blot去检测三种MAPK抑制因子对TGF-β,诱导HSC细胞内Imp7蛋白表达的影响 在无TGF-β1刺激条件下,Imp7蛋白表达程度很低且核内表达很弱。TGF-β1可诱导Imp7表达及入核；三种MAPK抑制因子均可抑制Imp7表达及入核。
3.2Western blot法检测三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导HSC细胞内Imp8蛋白表达的影响 在无TGF-β1刺激条件下,Imp8蛋白表达程度很低且核内表达很弱。TGF-β1可诱导Imp8表达及入核；三种抑制因子均可抑制Imp8表达,p38抑制因子可减少Imp8入核。 4.三种MAPK抑制因子对TGF-p,诱导的HSC细胞内PAI-1mRNA表达的影响 TGF-β1可明显诱导PAI-1mRNA表达,ERK、JNK及p38抑制因子均能抑制TGF-p1诱导的PAI-1mmRNA表达。 5.三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导的HepG2细胞内MAPK通路活化的抑制作用 5.1ERK抑制因子(PD98059)对TGF-β1诱导的HepG2细胞内ERK通路活化的抑制作用 在无TGF-β1刺激时,HepG2细胞内的ERK通路已有一定程度磷酸化；TGF-β1则进一步增强pERK的表达。而ERK抑制因子(PD98059)可明显抑制pERK的表达。
5.2JNK抑制因子(SP600125)对TGF-β1,诱导的HepG2细胞内JNK通路活化的抑制作用 在无TGF-β1刺激时,HepG2细胞内的JNK通路已存在明显磷酸化；TGF-β1则进一步增强pJNK的表达。而JNK抑制因子(SP600125)可明显抑制pJNK的表达。5.3p38抑制因子(SB203580)对TGF-β,诱导的HepG2细胞内p38通路活化的抑制作用 在无TGF-β1刺激时,HepG2细胞内的JNK通路已存在明显磷酸化；TGF-β1则进一步增强pp38的表达。而p38抑制因子(SB203580)可明显抑制pp38的表达。 6.三种MAPK抑制因子对HepG2细胞内TGFβp1诱导的磷酸化Smad3C、Smad3L转位的影响 在无TGF-p1刺激条件下,Smad3C及Smad3L磷酸化程度很低且核内表达很弱。TGF-β1可诱导Smad3C、Smad3L磷酸化,并促进pSmad3C、pSmad3L入核。ERK抑制因子、JNK抑制因子显著可抑制Smad3L磷酸化及其入核,p38抑制因子抑制Smad3L磷酸化,但对其核浆分布无明显影响。TGF-β1及三种MAPK抑制因子对Smad3C磷酸化均未见显著影响,但TGF-β1增加pSmad3C入核,三种MAPK抑制因子可抑制pSmad3C入核。7.三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导HepG2细胞内Smad2/3/4复合物形成的影响 Tenofovir分子量 在无TGF-β1刺激的对照组HepG2细胞中,无Smad2/3/4复合物形成,TGF-β1可显著诱导Smad2/3/4复合物形成；p38抑制因子(SB203580)几乎完全阻断Smad2/3/4复合物的形成；JNK抑制因子(SP600125)呈浓度依赖性抑制TGF-β1诱导的S1mad2/3/4复合物形成；ERK抑制因子(PD98059)对复合物形成没有明显影响。各组HepG2细胞内Smad2/3蛋白的表达量没有变化,同时细胞提取物中Smad4蛋白的表达量在各组间也没有差异。 8.Western blot法检测三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导HepG2细胞内Imp7/Imp8蛋白表达的影响 8.1Western blot法检测三种MAPK抑制因子对TGF-β,诱导HepG2细胞内Imp7蛋白表达的影响 在无TGF-β1刺激条件下,Imp7蛋白表达程度很低且核内表达很弱。TGF-β1可诱导Imp7表达及入核；三种MAPK抑制因子均可抑制Imp7入核,尤其是p38抑制因子。
8.2Western blot法检测三种MAPK抑制因子对TGF-β1,诱导HepG2细胞内Imp8蛋白表达的影响 在无TGF-β1刺激条件下,Imp8蛋白表达程度很低且核内表达很弱。TGF-β1可诱导Imp8表达及入核。ERK抑制因子、JNK抑制因子可抑制Imp8入核,p38抑制因子对Imp8核浆分布无明显影响。 9.三种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导的HepG2细胞内PAI-1mRNA表达的影响 很少 TGF-β1可明显诱导PAI-1mRNA表达,ERK、JNK及p38抑制因子均能抑制TGF-β1诱导的PAI-1mRNA表达。 结论 5.1TGF-β1诱导HSC细胞及HepG2细胞中Smad3C及Smad3L磷酸化、进而促进Smad2/3/4复合物形成及其转位入核和靶基因PAI-1mmRNA表达可能是肝纤维化-肝癌发病的重要机制,而其中TGF-β1诱导的Smad3L的磷酸化可能是肝纤维化-肝癌发病的最关键环节。 5.2在HSC细胞中ERK、.INK、P38抑制因子均可明显抑制TGF-p1诱导pSmad3L的表达,JNK抑制因子可抑制pSmad3L入核；提示,Smad3蛋白连接区的磷酸化依赖于ERK、JNK、p38通路的激活,而pSmad3L转位入核则主要与JNK通路的激活有关。而在HepG2细胞中ERK抑制因子、JNK抑制因子显著可抑制Smad3L磷酸化及其转位入核,p38抑制因子抑制Smad3L磷酸化,但对其核浆分布无明显影响。三种MAPK抑制因子均可抑制pSmad3C转位入核。提示,在HepG2细胞中Smad3L磷酸化依赖于ERK、JNK、p38通路的激活,而pSmad3L转位入核则主要与ERK、JNK通路的激活有关。pSmad3C的转位入核则与ERK、JNK、p38通路的激活有关。 5.