最后,基于上述膜定位序列的分析结果,设计了一个能使细胞内源RNA富集到外泌体中的光调控系统。通过体外实验,进一步对外泌体作为RNA药物递送系统的可行性进行了验证。具体的实验内容和结果包括(1)采用密度梯度离心收集了几种不同白血病细胞系分泌的外泌体,并通过质谱组学对其蛋白表达谱进行了鉴定。结果表明,不同细胞系衍生的外泌体具有不同的蛋白表达谱,但都有核仁素蛋白的表达。结合流式细胞分析技Erastin花费术,进一步证明了核仁素存在于白血病相关外泌体膜的表面,而不存在于正常细胞所衍生外泌体膜的表面。因此,核仁素蛋白可能是白血病相关外泌体的标志蛋白之一。(2)结合适配体识别、磁性富集和滚环扩增(Rolling circle amplification,RCA)基于的双信号放大技术,建立了一个检测白血病细胞来源外泌体的超灵敏荧光生物传感器。首先,通过琼脂糖凝胶电ABT-263半抑制浓度泳对实验过程中核酸产物的分析,证明了该方法的可行性。然后,通过比较检测体系中信号放大前后的荧光强度,表明该系统可以实现外泌体检测信号的增强。最后,在优化的最佳传感参数下,分析了该传感器对外泌体检测的特异性和灵敏度。结果表明,其可以使得低至1×10~2/μL的外泌体被检测到,且具有很好的特异性。此外,将该方法还成功分析了血清样品中的外泌体。(3)分析了四种不时间同膜定位序列(Palm、PB、CAAX、CD63)与靶蛋白mCherry进行融合表达后,mCherry被分选入外泌体中量的差异。首先,构建了靶蛋白mCherry分别与三种不同膜定位肽和一种跨膜蛋白融合表达的质粒,以及分别表达相应蛋白的稳转细胞系。通过对mCherry在细胞中的荧光成像分析,证明了不同的膜定位序列使其分布在了细胞的不同位置上。收集相应细胞分泌的外泌体后,采用蛋白免疫印迹和流式细胞技术对其中mCherry的表达量进行分析。