将纯化后的MAGE-A 3 mRNA转染到NIH/3T3细胞中,Western blot实验检测MAGE-A3蛋白的表达。结果 pcDNA3.1-MAGE-A3正确表达和构建。体外转录MAGE-A3 mRNAA_(260)/A_(280)为1.92,浓度是872.3 ng/μl,长度约为500 bp。转染MAGE-A3 mRNA后,NIH/3T3能表达大小约35 ku的MAGPXD101体外E-A3蛋白。结论成功构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得纯度较高的MAGE-A3 mRNA,该mRNA能在NIH/3T3细胞中表达MAGE-A3蛋白。
[目的]研究FAT4通过上调乳腺癌耐药蛋白(BCRP)影响结直肠癌对5-FU的耐药性。[方法]采用RT-PCR检测50例结直肠癌患者中癌组织以及相应癌旁组织和正常组织中FA此网站T4表达量;采用免疫组化检测手术组以及手术+新辅助化疗组中FAT4以及BCRP的相对表达量,并采用Pearson相关性分析FAT4与BCRP表达水平间的相关性;采用RT-PCR检测各结直肠癌细胞系(SW48、HT-29、HCT-116、SW620、DLD1、SW480、CaCO2、LOVO)中FAT4和BCRP mRNA的表达量;构建过表达FAT4或selleck合成敲降FAT4的直肠癌细胞系,用RT-PCR以及Western blot检测FAT4表达水平的变化;进一步使用5-FU刺激过表达FAT4或敲降FAT4的直肠癌细胞系,MTT检测其增殖能力的变化。[结果]与正常组织以及癌旁组织比较,FAT4以及BCRP在癌组织中表达量较高(P<0.001),5-FU刺激结直肠癌细胞后,与对照组比较,FAT4过表达可以增加其细胞增殖能力(P<0.01),FAT4敲减可以降低细胞增殖能力(P<0.01)。