微卫星多态性标记的选择参考文献报道,从UCSC人类基因组数据库获得微卫星序列。LOH分析:取10μlPCR产物与10μl甲酰胺上样缓冲液混合,95℃变性10min,冰冷5分钟。加样10μl于8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(含7M尿素),80v电泳2.5h,硝酸银染色,观察等位片段大小和信号强度,判断结果。与正常组织相比,癌组织条带消失或相对密度减少50%以上时Dabrafenib判断为LOH。若癌组织条带增多或位移则判断为微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)。 免疫组织化学:标本8例BCC,26例SCC,5例正常皮肤石蜡包埋,5μm连续切片,PTCH1抗体购自北京奥维亚生物技术公司,稀释浓度为1:200,二氨基联苯胺(DAB)显色,苏木苏复染,胞内见均一的棕黄色颗粒EGFR抑制剂为阳性。400倍镜下计数5个视野或者1000个细胞,计算阳性细胞所占的百分数,染色细胞≥20%为阳性,实验数据经过SPSS13.0进行x~2验检分析。P0.05)。PTCH1高表达可通过激活Hedgehog信号通路在SCC、BCC发生过程起重要作用。 五、不同病理分期的SCC中PTCH1蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。
目也许的对以Notch2为表面标志的胰腺癌干样细胞进行分离鉴定和组织定位,并探索其靶向治疗方法。 方法将人胰腺癌细胞株Panc-1、Bxpc-3、Aspc-1、Cfpac-1在无血清条件下培养,采用EGF, IGF-1和FGF-10诱导形成细胞球体。用免疫荧光法分别检测这4种人胰腺癌细胞株及其球体细胞、15例胰腺癌和13例正常胰腺组织标本以及吉西他滨作用后Panc-1细胞中自我更新调控因子OCT4和Nanog的表达。