01），ND值明显降低（P<0.01）。然而，LIP+全脑缺血组大鼠在0h，1h，3h，6h各时间点海马CA1区锥体神经元均未见明显损伤，尤其是LIP0h组锥体细胞排列整齐，仅个别锥体细胞胞核固缩，无明显细胞缺失，与LIP的sham组相比，HG（0～）明显降低、ND值（154±5.93）明显升高（P<0.01），ND值（27±8.64）显著降低（P<0.01）。LIP+全脑缺血组海马CA1区锥体神经元无明显损伤，与全脑缺血组相比，HG（0～Ⅰ级）明显降低（P<0.01)，ND值（174±12.77）显著升高（P<0.01）。LIP+全脑缺血5d、7d时间点海马CA1区GLT-1的表达逐渐减少，染色逐渐变浅，与control组相比无统计学差异（P＞0.05）。P-p38MAPK的免疫组化结果显示，control组海马CA1区中未见明显的p-p38MAPK阳性表达，染色较浅，平均光密度和阳性细胞总面积分别为1.65±0.28和5486.19±3596（μm2，下同）。LIP+全脑脑缺血后各时间点海马CAI区神经元中p-p38MAPK的表达均有不同程度的上调，即刻时间点阳性细胞表达量较少，胞核着色浅。在LIP+全脑缺血30min、1h、3h时间点，阳性细胞平均光密度和总面积均有所增加，但与control组相比无统计学差异（P＞0.05）。然而，LIP+全脑缺血6h、12h和1d时间点海马CAI区p-p38MAPK的表达明显增多，以12h最为明显，胞核着色明显加深，呈深棕黄色，其平均光密度和阳性细胞总面积分别9.22±0.87和49762.16±7799，与control组相比有统计学差异（P<0.01）。LIP+全脑缺血5d后GLT-1的表达开始降低，7d时基本降到即刻水平。control组海马CA1区p-p38MAPK的表达量很少。LIP+全脑缺血后各时间点中p-p38MAPK的表达有不同程度增多，但是即刻（0h）、30min、1h、3h时间点与control组相比无统计学差异（P＞0.05）。从6h开始p-p38MAPK的表达明显增多，12h达到高峰，并持续到1d左右，与control组相比有统计学差异（P<0.01），分别为4.03±0.55、2.84±0.54、2.46±0.5、2.38±0.31。阳性细胞总面积也明显降低（P
滋养层细胞是胚胎与母体直接接触的部分,包括细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞、绒毛外细胞滋养层细胞三个亚群。妊娠早期滋养层细胞具有高增殖能力及类似恶性肿瘤细胞的侵袭能力等独特的生物学功能。滋养细胞侵入母体蜕膜后,不被母体排斥而快速增殖是妊娠成功的关键因素之一,同时滋养细胞有节制地侵入子宫内膜基质也是正常妊娠所必需的,侵入过程异常将会导致病理妊娠,如自然流产、宫内发育迟缓、妊娠期高血压疾病等。母-胎界面微环境细胞与分子间的相互作用可以调节滋养细胞侵入子宫内膜及蜕膜。因此,母-胎界面参与调控滋养细胞生物学行为的关联分子,可以影响胚泡的正常植入和生长。
PLX3397临床试验 人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因是非经典的主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex, MH) I类分子。以往的研究认为,HLA-G可通过多种机制诱导母胎间免疫耐受,尤其是对母胎界面中的免疫活性细胞如NK细胞、T细胞、抗原提呈细胞等起调节作用,从而使胚胎免遭蜕膜NK细胞和T淋巴细胞的攻击,维持正常妊娠。然而,我们的前期工作提示,HLA-G基因表达下降可直接导致滋养细胞的侵袭能力降低,增殖能力减弱,凋亡增加,从而可能导致一系列病理妊娠如子痫前期、胎儿生长受限、复发性自然流产等的发生。但是,HLA-G基因与病理妊娠发生的具体机制并不明确。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated Alectinib供应商 protein kinase, MAPK)是细胞内重要的信号转导者,主要包括细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)、c-Jun N-端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38MAPK等成员,参与调节细胞的增殖、分化、凋亡以及细胞的黏附与迁移。已有文献报道,胎盘组织中p38MAPK广泛分布,p38MAPK的激活与表达状态的改变可能与子痫前期等病理妊娠的发病密切相关。本研究应用RNA干扰技术抑制HTR-8/SVneo细胞中HLA-G基因的表达,研究HLA-G表达降低对滋养细胞生物学行为、MAPK及磷酸化MAPK关键蛋白激酶表达的影响,进一步阐明子痫前期等病理妊娠的发病机制,并为其治疗提供新思路。
Small Molecule Compound Library 第一部分化学修饰的siRNA体外下调滋养细胞HLA-G的表达 目的体外沉默HTR-8/SVneo滋养细胞HLA-G的表达。 方法利用siRNA干扰技术,转染HTR-8/SVneo滋养细胞后,分别用荧光oligo转染细胞、RT-PCR、Western-blot检测滋养细胞HLA-G的表达水平。 结果HTR-8/SVneo滋养细胞荧光转染效率可达70%-90%。HLA-G mRNA表达：实验组为0.26±0.08,阴性对照组为0.71±0.11,空白对照组为0.79±0.07。实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)；实验组HLA-G mRNA表达抑制率为(69.8±6.3)%,阴性对照组HLA-G mRNA表达抑制率为(14.9±2.2)%,空白对照组为0。HLA-G蛋白表达：实验组为0.20±0.15,阴性对照组为0.75±0.12,空白对照组为0.76±0.21。实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)；实验组HLA-G蛋白表达抑制率为(81.1±14.4)%,阴性对照组HLA-G蛋白表达抑制率为(18.0±7.7)%,空白对照组为0,实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。实验组细胞数目较阴性对照组和空白对照组明显减少。转染48h后各组细胞的增殖能力的比较,实验组为0.19±0.08,阴性对照组为0.26±0.08,空白对照组为0.27±0.09。实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。实验组细胞增殖能力与阴性对照组或空白对照组相比显著减少。转染72h后各组细胞的凋亡率的比较,实验组为(19.5±0.47)%,阴性对照组为(15.8±0.83)%,空白对照组为(16.3±0.92)%。实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.