5μg/ml)、索拉非尼(1.25μmol/L)、奥沙利铂(0.25μg/ml)单药、两药联合(人参皂苷Rg3+索拉非尼,索拉非尼+奥沙利铂,奥沙利铂+人参皂苷Rg3)、三药联合(人参皂苷Rg3+索拉非尼+奥沙利铂)对SMMC-7721细胞均有抑制增殖的作用,各组药物在作用24h时对细胞的增殖抑制率均小于15%。(2)用MTT法检测黏附于FN上1h、2h的SMMC-7721细胞,人参皂苷Rg3作用2h与1h比较,黏附抑制率具有统计学差异(P1.15)；黏附2h时,索拉非尼联合奥沙利铂或人参皂苷Rg3,其抑制黏附作用均好于索拉非尼单药(P0.05)。用MTT法检测黏附于Matrigel上1h、2h的SMMC-7721细胞,当三药相互两两联合时黏附1h,表现为协同作用(Q>1.15)；黏附2h时,索拉非尼联合奥沙利铂或人参皂苷Rg3抑制黏附作用均好于索拉非尼(P<0.05),黏附2h时,三药联合比两药联合体现了更好的抗黏附作用(P<0.01)。(3)细胞迁移实验表明,奥沙利铂、索拉非尼单药对SMMC-7721细胞的迁移抑制作用较好；奥沙利铂+人参皂苷Rg3比人参皂苷Rg3单药抑制迁移作用明显(P<0.01)；奥沙利铂+索拉非尼比索拉非尼单药抑制迁移作用明显(P<0.01)；人参皂苷Rg3+索拉非尼比人参皂苷Rg3单药抑制迁移作用明显(P<0.01)；奥沙利铂+人参皂苷Rg3表现为相加作用,人参皂苷Rg3+索拉非尼与奥沙利铂+索拉非尼表现为协同作用。王药联合抑制迁移作用优于人参皂苷Rg3+索拉非尼组及奥沙利铂+人参皂苷Rg3组(P<0.01)。(4)细胞侵袭实验表明,奥沙利铂、索拉非尼单药对SMMC-7721细胞的侵袭抑制作用较好；奥沙利铂+人参皂苷Rg3比人参皂苷Rg3单药抑制侵袭作用明显(P<0.01)；奥沙利铂+索拉非尼比索拉非尼单药抑制侵袭作用明显(P<0.01)；人参皂苷Rg3+索拉非尼比人参皂苷Rg3单药抑制侵袭作用明显(P<0.01)；奥沙利铂+人参皂苷Rg3与奥沙利铂+索拉非尼表现为相加作用；三药联合比人参皂苷Rg3+索拉非尼组及奥沙利铂+人参皂苷Rg3抑制侵袭作用明显(P<0.05)。(5)免疫细胞化学法结果表明,人参皂苷Rg3可使SMMC-7721细胞CD44V6及MMP-9表达减弱(P<0.05),奥沙利铂可使SMMC-7721细胞CD44V6、VEGF-C、MMP-9表达减弱(P<0.05)；索拉非尼可使VEGF-C、MMP-9表达减弱(P<0.05)；两药联合(人参皂苷Rg3+索拉非尼,索拉非尼+奥沙利铂,奥沙利铂+人参皂苷Rg3)对VEGF-C蛋白的影响,明显高于单药(P<0.01)；对CD44V6蛋白的影响,索拉非尼+奥沙利铂及奥沙利铂+人参皂苷Rg3两药组优于单药(P<0.05),人参皂苷Rg3+索拉非尼联合优于索拉非尼(P<0.05)；对MMP-9蛋白影响方面,索拉非尼+奥沙利铂优于索拉非尼单药(P<0.05),奥沙利铂+人参皂苷Rg3优于人参皂苷Rg3(P<0.05)；三药联合组较两药联合组使相关蛋白CD44V6、VEGF-C、MMP-9的表达减弱更明显(P
[研究背景和目的]
和 selleck怎么样 获悉更多 结直肠癌(colorectal cancer, CRC)容易发生肝转移。如何预测及防治结直肠癌肝转移(colorectal liver metastases, CLM)是一大世界性难题。趋化因子作为肿瘤微环境的重要成份之一,在CLM中发挥重要作用。现有的研究表明,巨噬细胞炎性蛋白3a (macrophage inflammatory protein-3a, MIP3a或CCL20)和白介素-8(interleukin-8, IL-8或CXCL8)与CLM最为密切。然而,相关分子机制尚未完全明了。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是一个由上皮细胞向间质细胞转变的暂时性和可逆性过程。这个过程被广泛定义为从上皮形态向间质形态转变时不同标志物表达的改变,以及细胞获得迁移及侵袭力增强的功能性改变。本研究旨在明确趋化因子CCL20和CXCL8与EMT之间的关系,深入探讨CCL20与CXCL8联合诱导肠癌细胞发生EMT的分子机制。检测临床CRC组织标本,寻找支持CCL20与CXCL8联合诱发EMT的临床证据,分析CCL20与CXCL8共表达与CRC患者临床病理指标及预后的相关性。 [研究方法] 1.CCL20与CXCL8促进肠癌细胞增殖、侵袭的体外实验研究。 (1)细胞增殖试验。 (2)细胞侵袭试验。 (3)细胞划痕试验。 2.CCL20与CXCL8联合诱导肠癌细胞发生EMT及其分子机制的体外实验研究。 (1)细胞免疫荧光试验。 (2) Western Blot. (3)中和试验。 (4)RNA干扰试验。 3.肠癌标本CCL20与CXCL8共表达的临床意义研究。 (1)免疫组织化学检测肠癌组织及其配对癌旁组织中CCL20、CXCL8、E-cad表达。 (2)肠癌组织CCL20与CXCL8共表达与E-cad表达及临床病理学特征之间的相关性分析。 (3)肠癌组织CCL20与CXCL8共表达与肠癌患者生存之间相关性分析。 [实验结果] 1.